El propósito de este protocolo es demostrar los principios y técnicas para medir y calcular la tasa de filtración glomerular, la tasa de flujo urinario y la excreción de sodio y potasio en una rata. Esta demostración se puede utilizar para proporcionar a los estudiantes una comprensión conceptual general de cómo medir la función renal.
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Artículo de método
Demostración Laboratorio Fisiología: tasa de filtración glomerular en una rata
En este artículo
Resumen
Resumen
Las mediciones de la tasa de filtración glomerular (TFG) y la excreción fraccional de sodio (Na) y potasio (K) son fundamentales para evaluar la función renal en la salud y la enfermedad. La TFG se mide como el aclaramiento renal en estado estacionario de inulina que se filtra en el glomérulo, pero no se secreta ni se reabsorbe a lo largo de la nefrona. La excreción fraccional de Na y K puede determinarse a partir de la concentración de Na y K en plasma y orina. El aclaramiento renal de inulina puede demostrarse en un animal anestesiado que tiene catéteres en la arteria femoral, la vena femoral y la vejiga. El equipo y los suministros utilizados para este procedimiento son los comúnmente disponibles en un centro de investigación, lo que hace que este procedimiento sea un medio práctico para medir la función renal. El propósito de este video es demostrar los procedimientos necesarios para realizar una demostración de laboratorio en la que se evalúa la función renal antes y después de un fármaco diurético. La técnica presentada se puede utilizar para evaluar la función renal en modelos de enfermedad renal en ratas.
Introducción
La función más importante del riñón es la regulación homeostática del contenido extracelular de agua y electrolitos. Los riñones regulan estrechamente el agua extracelular, el sodio (Na) y el potasio (K) para mantener los niveles fisiológicos normales. Las alteraciones de la función renal pueden dar lugar a trastornos metabólicos graves que pueden ser mortales. El proceso renal básico ocurre en la nefrona y comienza con la filtración de plasma en el glomérulo y termina con la excreción de orina. Otros procesos que determinan la concentración final de agua, Na y K en la orina son la secreción y la reabsorción dentro de la nefrona. Las mediciones de la tasa de filtració....
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Protocolo
Antes de cualquier procedimiento de animales, el cuidado de los animales y el uso comité institucional (IACUC) debe aprobar el protocolo. Este protocolo fue aprobado por la Universidad Estatal de Michigan IACUC.
1. Preparación Pre-laboratorio de la solución de FITC-inulina
- Caliente 20 ml de solución salina a 70 ° C y agitar lentamente en 100 mg de FITC-inulina (5 mg / ml de FITC-inulina) hasta que se disuelva todo inulina.
- Solución enfriar a ta y añadir 800 mg de albúmina de suero bovino (40 mg / ml de BSA, polvo liofilizado, esencialmente globulina libre, bajo la endotoxina, ≥98% de pureza por electroforesis e....
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Resultados
El diurético utilizado en la demostración de laboratorio era furosemida que inhibe muy rápidamente la reabsorción de Na y K filtrada por el riñón resulta en aumento de Na, K, y la excreción de agua en cuestión de minutos de la administración del fármaco. Por su mecanismo primario, furosemida debe tener efectos mínimos sobre la tasa de filtración glomerular y de la carga filtrada de Na y K, pero aumentará el flujo de orina y la excreción fraccional de Na y K.
Los resultados representativos en.......
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Discusión
Un marcador adecuado para la medición de la TFG debe cumplir con cuatro criterios: se filtra libremente en el glomérulo, sea no unido a las proteínas plasmáticas, y ni ser absorbida ni secreta en la nefrona. La inulina es un polímero de la fructosa que satisface estos criterios. Como resultado, el aclaramiento renal de inulina se considera el estándar de oro para medir la TFG 7. La técnica demostrada representa el enfoque tradicional de la determinación del aclaramiento renal de inulina usando muestras de ori.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia. Las opiniones o afirmaciones contenidas en este documento son las opiniones privadas del autor y no deben ser interpretados como funcionario o como el reflejo de las opiniones del Departamento del Ejército o el Departamento de Defensa.
Agradecimientos
La fuente de financiamiento para la demostración de laboratorio fue subvención NIGMS: GM077119. Agradecemos al Dr. José R. Haywood y el Dr. Peter Cobbett por su apoyo a la corta Couse en Integrativa y sistemas de órganos Farmacología. También agradecemos a la Sra Hannah Garver por su apoyo técnico de la demostración de laboratorio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 5-0 Sutura quirúrgica de seda trenzada | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Placa de ensayo, 96 pocillos | Costar | 3922 | |
| Albúmina sérica bovina | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Centrífuga | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Tubos de muestra cónicos | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Aplicadores con punta de algodón | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Software de adquisición de datos | ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | |
| Báscula digital | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-Inulina | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Esponjas de gasa | Covidien | 2146 | |
| cama quirúrgica calefactada | EZ-Anesthesia | EZ-212 | |
| Heparina | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Isoflurano | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Vaporizador de isoflurano | EZ-Anesthesia | EZ-190F | |
| Pinzas de microdisección | Biomedical Research Instruments Inc. | 70-1020 | |
| Lector de microplacas - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Analizador de sodio/potasio | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Olsen-Hegar Portaagujas con tijeras | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| PE-190 (para catéter vesical) | BD Medical | ||
| & nbsp; | Aditivos | MLT1199 | |
| Tubos de cultivo Pyrex | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Catéter de arteria cónica femoral de rata | Strategic Applications Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemida 5% | Intervet | #34-478 | |
| Tijeras de estrabismo | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Tijeras quirúrgicas para estudiantes | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Guantes quirúrgicos | Kimberly-Clark | Sterling Guantes | |
| Bomba de jeringa | Razel Scientific | R99-E | |
| Pinzas de tejido | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Tijeras de tejido | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Sutura quirúrgica de seda trenzada Surgical Specialties Corp SP1033 Placa de ensayo, 96 pocillos Costar 3922 Albúmina de suero bovino Sigma Chemical Co A2934-25G Centrífuga Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Tubos de muestra cónicos Dot Scientific Inc. #711-FTG Aplicadores con punta de algodón Solon Manufacturing Co 56200 Software de adquisición de datos ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Escala Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulina Sigma Chemical Co F3272-1G Esponjas de gasa Covidien 2146 cama quirúrgica calefactada EZ-Anesthesia EZ-212 Heparina Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurano Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Vaporizador de isoflurano EZ-Anesthesia EZ-190F Pinza de microdisección Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Lector de microplacas - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Analizador de sodio/potasio NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Portaagujas con tijeras Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (para catéter de vejiga) BD Medical 427435 Transductor de presión Instrumentos MLT1199 Tubos de cultivo Pyrex Corning Inc. 99445-12 Catéter de arteria cónica femoral para ratas Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemida 5% Intervet #34-478 Tijeras para estrabismo Herramientas de ciencia fina 14075-11 Tijeras quirúrgicas para estudiantes Herramientas de ciencia fina 91402-12 Guantes quirúrgicos Kimberly-Clark Guantes de nitrilo Sterling Bomba de jeringa Razel Scientific R99-E Pinzas para tejidos Herramientas para ciencias finas 91121-12 Tijeras para tejidos George Tiemann Co 105-420 |
Referencias
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S.
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Reimpresiones y permisos
