Un método simple y barato para la Determinación de la sensibilidad al frío y Adaptación en ratones

Summary

El ensayo plantar en frío (CPA) mide la respuesta al frío entre 30 °C y 5 °C, y también puede medir la adaptación al frío. Este protocolo describe cómo usar el CPA para medir la hipersensibilidad al frío, la analgesia y la adaptación en ratones.

Abstract

La hipersensibilidad al frío es un problema clínico grave, que afecta a un amplio subconjunto de pacientes y causa disminuciones significativas en la calidad de vida. El ensayo plantar frío permite la evaluación objetiva y económica de la sensibilidad al frío en ratones, y puede cuantificar tanto la analgesia como la hipersensibilidad. Los ratones se aclimatan en una placa de vidrio y una bolita de hielo seco comprimido se sostiene contra la superficie de vidrio debajo de la pata trasera. La latencia hasta la retirada del vidrio refrigerante se utiliza como medida de la sensibilidad al frío.

La sensación de frío también es importante para la supervivencia en regiones con cambios estacionales de temperatura, y para mantener la sensibilidad, los animales deben ser capaces de ajustar sus umbrales de respuesta térmica para que coincidan con la temperatura ambiente. El Cold Plantar Assay (CPA) también permite estudiar la adaptación a los cambios en la temperatura ambiente mediante la prueba de la sensibilidad al frío de ratones a temperaturas que oscilan entre 30 °C y 5 °C. Los ratones se aclimatan como se describe anteriormente, pero la placa de vidrio se enfría a la temperatura inicial deseada utilizando cajas de aluminio (o paquetes de papel de aluminio) llenas de agua caliente, hielo húmedo o hielo seco. La temperatura de la placa se mide en el centro utilizando una sonda de termopar tipo T de filamento. Una vez que la placa ha alcanzado la temperatura inicial deseada, los animales se someten a pruebas como se ha descrito anteriormente.

Este ensayo permite realizar pruebas con ratones a temperaturas que van desde inocuas hasta nocivas. El CPA produce respuestas conductuales inequívocas y consistentes en ratones no lesionados y se puede utilizar para cuantificar tanto la hipersensibilidad como la analgesia. Este protocolo describe cómo usar el CPA para medir la hipersensibilidad al frío, la analgesia y la adaptación en ratones.

Introduction

Medición de la capacidad de respuesta frío en roedores es importante para mejorar la comprensión de los mecanismos potenciales de sensibilidad al frío en los seres humanos, tanto en condiciones normales y patológicas. El Plantar Ensayo Fría (CPA), originalmente desarrollado hace varios años ^1, está diseñado para generar respuestas reproducibles, sin ambigüedades murinos de comportamiento a un estímulo frío entregado a temperatura ambiente. Más recientes mejoras de este ensayo han permitido la medición reproducible de sensibilidad al frío en una amplia gama de temperaturas de ^2. Ambas versiones también están diseñados para ser relativamente de al....

Protocol

Todos los protocolos de ratón estaban de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud y fueron aprobados por el Comité de Estudios Animal de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington (St. Louis, MO).

1. Preparación de la Bandeja de Pruebas y Cajas

1. Limpie la superficie del cristal.
2. Fije la sonda de termopar de tipo T filamento a la superficie en el medio de la placa de vidrio con cinta de laboratorio.
3. Coloca los recintos de los animales sobre la placa de vidrio en una sola línea a lo largo del centro de la placa.
4. Pase la sonda termopar a través del centro recinto de animales y enchuf....

Results

Las respuestas de comportamiento inducidos a partir de ratones a partir de 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, y 12 ° C son altamente reproducible (Figura 4A) ^20. Con el fin de medir el estímulo frío que se genera bajo la pata trasera, los ratones fueron anestesiados con una mezcla de ketamina / xilazina / acepromazina cóctel y sus patas fueron asegurados en el cristal en la parte superior de un termopar de tipo T filamento (Figura 4B) ^20. El vidrio se enfría o se calienta a l.......

Discussion

El CPA se puede utilizar para evaluar la sensibilidad al frío y la adaptación al frío en ratones. Proporciona una forma asequible y eficiente de medir las respuestas al frío en animales aclimatados y sin restricciones en una amplia variedad de rangos de temperatura. También proporciona una respuesta conductual inequívoca con una variable de salida fácilmente cuantificada y analizada. Ya se ha utilizado para evaluar los cambios en la sensibilidad al frío inducida por la inflamación¹, la lesión neuropática

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sonda de termopar tipo T	Physitemp	IT-24p	Se utiliza para medir la temperatura de la superficie del vidrio (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)
Placa de vidrio	Empresa de vidrio local (en St. Louis, Stemmerich Inc)		Utilizamos vidrio pyrex (flotador de borosilicato). Nuestro laboratorio generalmente usa 1/4'', pero 3/16'' y 1/8'' también son útiles
Registrador de datos térmicos	Extech	EA15	Termologger para realizar un seguimiento de la temperatura del vidrio (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 ml Jeringa	BD	309657	La parte superior se corta y el hielo seco se comprime en la jeringa para generar una sonda fría
Computadora	Si usa un registrador Extech, cualquier caja de aluminio Pcwill work
Las cajas del	taller mecánico de la Universidad de Washington en St. Louis miden		Hay un agujero de 1/2'' perforado en un lado corto de cada caja, cerca de la parte inferior. Estos agujeros se llenan con llaves de paso de goma cuando las cajas se llenan con hielo húmedo o agua caliente.
Circulador de agua calefactada	VWR		Cualquier modelo de circulador de agua con bomba funcionará
Aguja de 21 G	BD	305165	El tamaño exacto de la aguja no es importante
Temporizador			Cualquier temporizador de mano funcionará
Espejo			Cualquier espejo plano funcionará