Artículo de método

Un método simple y barato para la Determinación de la sensibilidad al frío y Adaptación en ratones

DOI:

10.3791/52640

⸱

17 de marzo de 2015

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1MSTP, Neuroscience Program, Washington University in St. Louis, 2Washington University Pain Center, Department of Anesthesiology, Washington University in St. Louis

En este artículo

Resumen

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El ensayo plantar en frío (CPA) mide la respuesta al frío entre 30 °C y 5 °C, y también puede medir la adaptación al frío. Este protocolo describe cómo usar el CPA para medir la hipersensibilidad al frío, la analgesia y la adaptación en ratones.

Resumen

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La hipersensibilidad al frío es un problema clínico grave, que afecta a un amplio subconjunto de pacientes y causa disminuciones significativas en la calidad de vida. El ensayo plantar frío permite la evaluación objetiva y económica de la sensibilidad al frío en ratones, y puede cuantificar tanto la analgesia como la hipersensibilidad. Los ratones se aclimatan en una placa de vidrio y una bolita de hielo seco comprimido se sostiene contra la superficie de vidrio debajo de la pata trasera. La latencia hasta la retirada del vidrio refrigerante se utiliza como medida de la sensibilidad al frío.

La sensación de frío también es importante para la supervivencia en regiones con cambios estacionales de temperatura, y para mantener la sensibilidad, los animales deben ser capaces de ajustar sus umbrales de respuesta térmica para que coincidan con la temperatura ambiente. El Cold Plantar Assay (CPA) también permite estudiar la adaptación a los cambios en la temperatura ambiente mediante la prueba de la sensibilidad al frío de ratones a temperaturas que oscilan entre 30 °C y 5 °C. Los ratones se aclimatan como se describe anteriormente, pero la placa de vidrio se enfría a la temperatura inicial deseada utilizando cajas de aluminio (o paquetes de papel de aluminio) llenas de agua caliente, hielo húmedo o hielo seco. La temperatura de la placa se mide en el centro utilizando una sonda de termopar tipo T de filamento. Una vez que la placa ha alcanzado la temperatura inicial deseada, los animales se someten a pruebas como se ha descrito anteriormente.

Este ensayo permite realizar pruebas con ratones a temperaturas que van desde inocuas hasta nocivas. El CPA produce respuestas conductuales inequívocas y consistentes en ratones no lesionados y se puede utilizar para cuantificar tanto la hipersensibilidad como la analgesia. Este protocolo describe cómo usar el CPA para medir la hipersensibilidad al frío, la analgesia y la adaptación en ratones.

Introducción

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Medición de la capacidad de respuesta frío en roedores es importante para mejorar la comprensión de los mecanismos potenciales de sensibilidad al frío en los seres humanos, tanto en condiciones normales y patológicas. El Plantar Ensayo Fría (CPA), originalmente desarrollado hace varios años 1, está diseñado para generar respuestas reproducibles, sin ambigüedades murinos de comportamiento a un estímulo frío entregado a temperatura ambiente. Más recientes mejoras de este ensayo han permitido la medición reproducible de sensibilidad al frío en una amplia gama de temperaturas de 2. Ambas versiones también están diseñados para ser relativamente de alto rendimiento, y barato de usar.

Una gran parte de los avances se han logrado en la comprensión de los mecanismos de la sensibilidad al frío utilizando otros métodos de comportamiento. Un método es la prueba de la evaporación de acetona, que implica frotando o pulverización acetona en la pata del ratón y midiendo la cantidad de tiempo que gasta el ratón agitando el 3,4 pata. Desafortunadamente,las respuestas a la evaporación de acetona son confundidos por la sensación de humedad y el olor de la acetona. Además, el estímulo frío que se aplica en la prueba de la evaporación de acetona puede variar en función de la cantidad de acetona aplicado, y es difícil de cuantificar. Finalmente, los ratones no lesionados tienen respuestas mínimas a acetona al inicio del estudio, por lo que es imposible medir la analgesia en ausencia de hipersensibilidad con este método.

Otro ensayo clásico para las respuestas frías es el ensayo de retirada de la cola, donde se mide la latencia a la retirada después de la cola se encuentra inmersa en 5,6 agua fría. Mientras que las respuestas de comportamiento en este ensayo son inequívocos y el ensayo mide las respuestas a una temperatura específica, los animales deben estar sujetos durante la prueba, lo que puede alterar la capacidad de respuesta fría a través de bien descritos mecanismos analgésicos inducidos por el estrés 7.

Otra herramienta comúnmente usada es la prueba de la placa fría, que mide el comportamientorespuestas de los ratones después de que se colocan en una placa Peltier enfriado 8-10. Mientras que esta herramienta proporciona información sobre respuestas de los animales a temperaturas específicas, también se ha utilizado de manera incompatible; diferentes grupos han medido diferentes tipos de respuestas, incluyendo el número de saltos 8,11, la latencia hasta la primera respuesta 8,11- 13, y el número de la pata ascensores 11,13,14 con resultados muy diferentes. El ensayo de placa de frío es también relativamente bajo rendimiento, ya que sólo un animal puede ser probado a la vez, y requiere un dispositivo peltier caros y frágiles.

La prueba de preferencia la temperatura de la placa 2 es un derivado de uso común de la prueba de la placa fría que mide la cantidad relativa de tiempo que los animales pasan en 2 placas conectadas de diferentes temperaturas 9,15- 17. Otro ensayo comúnmente utilizado similar es el ensayo de gradiente térmico, donde la cantidad de tiempo que los ratones que pasan en diferentes zonas de temperaturaque oscila entre 5 ° C y 45 ° C en una placa de metal larga se mide 16. Si bien estos ensayos permiten la comparación de temperaturas, no está claro si el comportamiento representa la temperatura o la aversión a la preferencia de la temperatura.

Por último, el ensayo de placa fría dinámica ha sido utilizado para medir cómo los ratones responden a los cambios de temperatura ambiente 18. Este método consiste en colocar los ratones en un dispositivo peltier RT y el aumento gradual de abajo a 1 ° C, mientras que la medición de la cantidad de los ratones saltan o se lamen las patas a diferentes temperaturas de la placa. Si bien esta prueba cómo los ratones adaptarse a un entorno de enfriamiento, que no proporciona una forma de probar cómo los ratones responden a un estímulo frío en la configuración de un refrigerador de temperatura ambiente. Adicionalmente, se requiere un equipo costoso para llevar a cabo y no proporciona una manera para aclimatarse a los ratones el equipo de prueba antes de medir su sensibilidad al frío.

Para complementar estos ensayos, el CPA pone a prueba la ACCLIMAted respuestas a un estímulo frío bien definido en una variedad de rangos de temperatura, o durante el proceso de adaptación a climas fríos. Se puede probar hasta 14 ratones a la vez con nuestro aparato actual, con el potencial de ser económicamente a escala para ensayos de alto rendimiento.

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Protocolo

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Todos los protocolos de ratón estaban de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud y fueron aprobados por el Comité de Estudios Animal de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington (St. Louis, MO).

1. Preparación de la Bandeja de Pruebas y Cajas

  1. Limpie la superficie del cristal.
  2. Fije la sonda de termopar de tipo T filamento a la superficie en el medio de la placa de vidrio con cinta de laboratorio.
  3. Coloca los recintos de los animales sobre la placa de vidrio en una sola línea a lo largo del centro de la placa.
  4. Pase la sonda termopar a través del centro recinto de animales y enchufe en el registrador de datos. Gire el registrador de datos en tiempo de desactivar la función de apagado automático, y conecte el registrador de datos al ordenador con el cable suministrado.
    1. Si el registro de la temperatura de la placa durante el experimento, abra el software de registro de datos para comenzar a registrar temperaturas de placas.
    2. Si es necesario, ajustar el software para volvercable de la temperatura de la placa una vez por segundo.
    3. Comience a registrar temperaturas utilizando el software incluido con el registrador de datos térmica.
  5. Separar el recinto con inserciones en negro para evitar la interacción visual entre ratones.
  6. Posición refleja debajo del vidrio de tal manera que la parte inferior de los recintos es visible desde una posición sentada cómoda.

2. El calentamiento / enfriamiento de la placa de vidrio

  1. Llenar cajas de aluminio con agua calentada, hielo húmedo, o hielo seco y la posición apropiada sobre la placa de vidrio (paquetes de papel de aluminio lleno de hielo seco se pueden utilizar también para enfriar el vidrio; Figura 1) 2.
    1. Para la prueba a 30 ° C, colocar las cajas de aluminio de aproximadamente 0,25 '' fuera de los recintos de los animales (Figura 2 B) 2.
      1. Establecer un circulador de agua caliente a cada lado de la placa de vidrio. Ajuste el termostato a 45 - 60 ° C, y nose para llenar las cajas de aluminio con un flujo constante de agua caliente (Figura 1 C) 2.
      2. Coloque los circuladores de tal manera que el agua caliente de las cajas de aluminio drena directamente de vuelta al depósito de la bomba de circulación en cada lado (Figura 1 C) 2.
    2. Para la prueba a temperatura ambiente, deje los cuadros vacíos (Figura 2) 2.
    3. Para la prueba a los 17 ° C, colocar las cajas de aproximadamente 0,25 '' fuera de los recintos de los animales de cada lado y se llenan de hielo húmedo (Figura 2) 2.
    4. Para la prueba a 12 ° C, colocar las cajas de aproximadamente 1,25 '' fuera de los recintos de cualquier lado y se llenan de hielo seco (Figura 2) 2.
    5. Para la prueba a 5 ° C, coloque las cajas de aproximadamente 0,25 '' fuera de los recintos de cualquier lado y se llenan de hielo seco (Figura 2) 2.
      1. Al enfriar el vaso con hielo seco, asegúrese de que haya suficiente ventilación para evitar la acumulación de CO 2 en la habitación.
  2. Espere a que el vidrio para alcanzar el rango de temperatura deseado.
  3. Añadir los ratones a los recintos de la placa.
    NOTA: un generador de ruido blanco puede ser utilizado para disminuir las perturbaciones de ruido.
  4. Espere a que los ratones se aclimate.
    NOTA: En nuestras instalaciones de esto toma aproximadamente 2,5 horas, pero esto puede variar de forma significativa sobre la base de alojamiento de los animales y las condiciones de manejo.
  5. Mantener el vidrio en el intervalo de temperatura deseado, garantizando que las cajas se mantienen llenas de agua caliente, hielo húmedo, o hielo seco.
    NOTA: Con nuestro aparato de las cajas necesita ser rellenado con hielo aproximadamente cada 90 min.
    NOTA: Para obtener la condición de 17 ° C, es útil para vaciar la mayor parte del agua de las cajas de aluminio a través de los orificios de drenaje antes de rellenar con hielo. Esto estabilizará la temperatura mejor, y prdesbordamiento evento
    NOTA: La cantidad exacta del hielo seco variará según la temporada, pero en general mantener las cajas de más de ¼ completo a lo largo de toda la longitud de la caja va a mantener la temperatura constante.

3. Prueba de los ratones a temperaturas fijas

  1. Fuera de la sala de comportamiento, llenar un cubo de hielo alrededor de la mitad llena de hielo seco.
  2. Con un martillo o mazo, machacar el hielo seco en un polvo fino.
    NOTA: Si sobrecarga el cubo hará que sea difícil para aplastar por completo el hielo seco en polvo.
  3. Utilizando una hoja de afeitar recta o tijeras, corte la parte superior de una jeringa de 3 ml.
  4. Utilizando una aguja de 21 G, meter 3 agujeros en los lados opuestos de la jeringa (total de 6 hoyos).
    NOTA: Estos agujeros se reducirá la presión generada por la sublimación mientras comprime el hielo seco. La jeringa de corte puede ser reutilizado para múltiples experimentos.
  5. Tome la jeringa, polvo de hielo seco, y un cronómetro de mano en la sala de comportamiento.
  6. Llene la cámara de la jeringa medio lleno de polvo de hielo seco. Mantenga el extremo cortado de la jeringa contra un objeto plano, y comprimir firmemente el polvo utilizando el émbolo. Ten cuidado; el émbolo de plástico puede doblarse o romperse por la presión. Si esto ocurre, vuelva a colocar el émbolo de una jeringa nueva.
  7. Extender la punta de la pastilla de hielo seco comprimido más allá del borde de la jeringa.
  8. Ratones de prueba que son totalmente en reposo.
    1. A 30 ° C, 23 ° C y 17 ° C, los ratones de prueba que tengan todas las 4 patas en el vidrio y no se mueve, pero no completamente dormido 19.
    2. A los 12 ° C y 5 ° C, los ratones de prueba que se encuentran en 2 patas o 4 patas y no se mueven o saltan.
  9. El uso de los espejos para la orientación, con suavidad pero con firmeza, presione el rubor pellet plana contra la superficie de cristal debajo de la pata trasera del ratón (Figura 1) 2. Inicie la mano automático.
  10. Detener el temporizador y retirar el sedimento cuando el ratón se aleja del vidrio enfriado.
    NOTA: El movimiento de retroceso puede ser vertical u horizontal.
    1. Si el ratón se mueve muy brevemente la pata y luego devuelve a la superficie de enfriamiento, continúe sincronización y la estimulación hasta que el ratón hace un movimiento permanente de distancia.
      NOTA: Nuestro laboratorio utiliza un tiempo máximo estímulo de 20 seg para ratones en la mayoría de los casos.
  11. Repita este procedimiento de prueba hasta que se recogen al menos 3 valores en cada pata de cada animal. Ensayos separados de prueba patas opuestas en el mismo ratón por al menos 7 min, y los ensayos consecutivos separados en una sola pata por al menos 15 min.
  12. Si es necesario, utilizar diferentes espesores de vidrio para generar diferentes tasas de enfriamiento (Figura 3) 1.
    NOTA: La velocidad de enfriamiento se correlaciona inversamente con el espesor del vidrio.

4. Prueba de la Ratones Durante Fría Adaptación

NOTA: Este es un protocolo alternativo que permite realizar pruebas como la plataforma de cristale enfría, en lugar de una vez que la placa se ha estabilizado y los ratones se han adaptado plenamente al ambiente frío.

  1. Siga las instrucciones que figuran en la Sección 1 para configurar el aparato.
  2. Siga las instrucciones que figuran en la Sección 3 para tomar mediciones de referencia a RT (Figura 7A) 2.
  3. Pre-enfriar las cajas de aluminio con hielo seco.
  4. Una vez que se han medido las latencias de retirada de línea de base, coloque las cajas preenfriados en la placa de aproximadamente 1,25 '' fuera de los recintos de cualquier lado (Figura 7A, flecha etiquetada como "hielo seco añadió") 2.
  5. Siga las instrucciones que figuran en la Sección 3 para tomar medidas como la placa de vidrio se enfría, tomando medidas tan a menudo como sea posible.

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Resultados

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Las respuestas de comportamiento inducidos a partir de ratones a partir de 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, y 12 ° C son altamente reproducible (Figura 4A) 20. Con el fin de medir el estímulo frío que se genera bajo la pata trasera, los ratones fueron anestesiados con una mezcla de ketamina / xilazina / acepromazina cóctel y sus patas fueron asegurados en el cristal en la parte superior de un termopar de tipo T filamento (Figura 4B) 20. El vidrio se enfría o se calienta a l...

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Discusión

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El CPA se puede utilizar para evaluar la sensibilidad al frío y la adaptación al frío en ratones. Proporciona una forma asequible y eficiente de medir las respuestas al frío en animales aclimatados y sin restricciones en una amplia variedad de rangos de temperatura. También proporciona una respuesta conductual inequívoca con una variable de salida fácilmente cuantificada y analizada. Ya se ha utilizado para evaluar los cambios en la sensibilidad al frío inducida por la inflamación1, la lesión neuropática

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Divulgaciones

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Los autores no tienen nada que revelar

Agradecimientos

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Los autores desean agradecer las contribuciones de todo el Laboratorio Gereau para la edición de manuscritos. Este trabajo cuenta con el apoyo de los fondos NINDS 1F31NS078852 para DSB y el fondo NINDS NS42595 para RWG.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Sonda de termopar tipo TPhysitempIT-24pSe utiliza para medir la temperatura de la superficie del vidrio (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)
Placa de vidrioEmpresa de vidrio local (en St. Louis, Stemmerich Inc)Utilizamos vidrio pyrex (flotador de borosilicato). Nuestro laboratorio generalmente usa 1/4'', pero 3/16'' y 1/8'' también son útiles
Registrador de datos térmicosExtechEA15Termologger para realizar un seguimiento de la temperatura del vidrio (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 ml JeringaBD309657La parte superior se corta y el hielo seco se comprime en la jeringa para generar una sonda fría
ComputadoraSi usa un registrador Extech, cualquier caja de aluminio Pcwill work
Las cajas deltaller mecánico de la Universidad de Washington en St. Louis miden Hay un agujero de 1/2'' perforado en un lado corto de cada caja, cerca de la parte inferior. Estos agujeros se llenan con llaves de paso de goma cuando las cajas se llenan con hielo húmedo o agua caliente.
Circulador de agua calefactadaVWRCualquier modelo de circulador de agua con bomba funcionará
Aguja de 21 GBD305165El tamaño exacto de la aguja no es importante
TemporizadorCualquier temporizador de mano funcionará
EspejoCualquier espejo plano funcionará
3' de largo, 4.5'' de ancho y 3'' de alto con una tapa sellada. de mano

Referencias

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  1. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice. Plos ONE. 7 (6), 8(2012).
  2. Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice. Journal of Neuroscience Methods. , (2014).
  3. Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain. Pain. 59 (3), 369-376 (1994).
  4. Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice. Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).
  5. Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate. Pain. 56 (2), 155-166 (1994).
  6. Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists. European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).
  7. Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats. Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).
  8. Karashima, Y., et al. TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).
  9. Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo. Pain. 150 (2), 340-350 (2010).
  10. Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats. Molecular pain. 1, 36(2005).
  11. Colburn, R. W., et al. Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice. Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).
  12. Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. TRPM8 is required for cold sensation in mice. Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).
  13. Bautista, D. M., et al. The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold. Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).
  14. Obata, K., et al. TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury. The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).
  15. Tang, Z., et al. Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8. Nature communications. 4, 2179(2013).
  16. Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).
  17. Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. The cellular code for Mammalian thermosensation. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).
  18. Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -J., Barrot, M., Poisbeau, P. Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents. The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).
  19. Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state. The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).
  20. Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo. Pain. , (2014).
  21. Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).
  22. Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate. Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).
  23. Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain. Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).
  24. Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate. The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).
  25. Zhang, H., et al. Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).
  26. Wang, H., Zylka, M. J. Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).

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