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Un ensayo de conducta Barato, escalable para medir etanol Sedación La sensibilidad y la tolerancia rápida en

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DOI:

10.3791/52676

15 de abril de 2015

En este artículo

Resumen

Los ensayos sencillos para medir la sensibilidad al etanol y la tolerancia rápida en Drosophila facilitan el uso de este organismo modelo para investigar estos importantes comportamientos relacionados con el etanol. Aquí, se describe un ensayo relativamente simple y escalable para medir la sensibilidad al etanol y la tolerancia rápida en moscas.

Resumen

Trastorno por consumo de alcohol (AUD) es un grave problema de salud. A pesar de un gran componente hereditario AUD, algunos genes se han implicado de forma inequívoca en su etiología. La mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, es un poderoso modelo para explorar los mecanismos moleculares que subyacen a los comportamientos genéticos relacionados con el alcohol y por lo tanto representa una gran promesa para la identificación y la comprensión de la función de los genes que influyen en AUD. El uso del modelo de Drosophila para estos tipos de estudios depende de la disponibilidad de ensayos que miden de forma fiable respuestas de comportamiento a etanol. Este informe describe un ensayo adecuado para evaluar la sensibilidad de etanol y rápida tolerancia en las moscas. Sensibilidad etanol medido en este ensayo está influenciada por el volumen y la concentración de etanol utilizado, una variedad de manipulaciones genéticas se informó anteriormente, y también la longitud de tiempo que las moscas se alojan sin alimentos inmediatamente antes de la prueba. En contraste, el etanol sensitivity medido en este ensayo no se ve afectada por el vigor de la manipulación de la mosca, el sexo de las moscas, y la suplementación de medio de crecimiento con antibióticos o levaduras vivas. Tres métodos diferentes para cuantificar la sensibilidad de etanol se describen, todo lo cual lleva a los resultados de sensibilidad etanol esencialmente indistinguibles. La naturaleza escalable de este ensayo, junto con su simplicidad general de puesta a punto y relativamente de bajo costo, lo hacen adecuado para el análisis genético pequeña y gran escala de sensibilidad etanol y rápida tolerancia en Drosophila.

Introducción

Trastorno por consumo de alcohol (AUD) es un enorme problema de salud en todo el mundo (revisado en 1). Aunque los mecanismos que impulsan el desarrollo de AUD son complejos, estos trastornos tienen un componente genético importante (por ejemplo, 2). La gran heredabilidad de la AUD y las respuestas conductuales conservadas en etanol a través de muchas especies (revisado en 3,4) han generado un gran interés en el uso de organismos modelo genético para investigar la participación de genes específicos en los comportamientos relacionados con etanol hacia una mejor comprensión de las bases moleculares de AUD. La mosca de la fruta,....

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Protocolo

1. Día Antes de Ensayo

  1. Recoger moscas en viales de alimentos frescos en grupos de 11 (solo sexo) bajo breve (1-5 min) CO 2.
  2. Permitir que las moscas se recuperen O / N en viales de alimentos en un espacio con ambiente controlado (normalmente 25 ° C, humedad relativa del 60%, 12 horas de luz / oscuridad ciclo).
  3. Preparar la solución de etanol (s) diluyendo puro (100%) de etanol en (≥18 MΩ) agua purificada hasta una concentración final (s) apropiado para el experimento planeado. Deje que la solución (s) para volver a RT O / N.
    Nota: La dilución de etanol es exotérmica.

2. Día de Ensayo

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Resultados

Los datos brutos de este ensayo sedación etanol son los números de moscas que son sedados como una función de vapor de etanol tiempo de exposición. Los datos en bruto se convierten a las moscas por ciento activos como una función del tiempo (datos primarios, las figuras 1A, B, D - F). Sensibilidad a la sedación etanol a partir de los datos primarios se puede cuantificar como la sedación Tiempo 50 (ST50), el tiempo requerido para el 50% de las moscas para convertirse en sedado o AEA bajo.......

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Discusión

Ensayos sencillos que cuantifican reproducible fenotipos significativos son de gran valor para el análisis del comportamiento. El trabajo que se describe aquí aborda varios aspectos prácticos de un ensayo para medir la sensibilidad sedación etanol y rápida tolerancia en Drosophila. Aunque no es un tema central de este trabajo, análisis de comportamiento son facilitadas por el mantenimiento del medio ambiente y los antecedentes genéticos constante para los sujetos de prueba en un estudio. Además, por lo general .......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Estos estudios fueron financiados por subvenciones de los Institutos Nacionales de Salud, Instituto Nacional para el Alcoholismo y el Abuso del Alcohol a M.G. (P20AA017828, R01AA020634, P50 AA022537). Los autores agradecen a Jill Bettinger por las útiles discusiones y a Jacqueline DeLoyht por su asistencia técnica.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
viales para alimentosVWR89092-772estrecho
FlugsGenesee/flystuff.com49-102tapón de
siliconaFisher Scientific09-704-1L#4
etanolPharmaco-Aaper111000200200 proof
estrecho

Referencias

  1. Rehm, J., et al. Global burden of disease and injury and economic cost attributable to alcohol use and alcohol-use disorders. Lancet. 373, 2223-2233 (2009).
  2. Prescott, C. A., Kendler, K. S.

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