Las oscilaciones son propiedades fundamentales de la red y son modulados por la enfermedad y las drogas. El estudio de las oscilaciones cerebrales rebanada permite la caracterización de las redes aisladas en condiciones controladas. Los protocolos se proporcionan para la preparación de cortes de cerebro agudos para evocar oscilaciones γ CA1.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Generación de oscilaciones γ CA1 locales por tetánica Estimulación
En este artículo
Resumen
Resumen
Oscilaciones de la red neuronal son características importantes de la actividad cerebral en la salud y la enfermedad y puede ser modulada por una serie de medicamentos que se utilizan clínicamente. Un protocolo se proporciona para generar un modelo para el estudio de oscilaciones γ CA1 (20 - 80 Hz). Estas oscilaciones γ son estables durante al menos 30 min y dependen de la actividad sináptica excitatoria y inhibitoria Además de la activación de las corrientes de marcapasos. Oscilaciones tetánicamente estimuladas tienen una serie de características reproducibles y fácilmente cuantificables incluyendo recuento de pico, duración de oscilación, la latencia y la frecuencia que informan sobre el estado de la red. Las ventajas de las oscilaciones estimuladas eléctricamente incluyen la estabilidad, la reproducibilidad y la adquisición episódica que permite la caracterización robusta de la función de red. Este modelo de oscilaciones γ CA1 se puede utilizar para estudiar mecanismos celulares y para investigar sistemáticamente cómo actividad de la red neuronal se altera en la enfermedad y por las drogas.Farmacología estado de enfermedad puede ser incorporado fácilmente por el uso de cortes de cerebro de modelos animales genéticamente modificados o intervencionistas para permitir la selección de fármacos que se dirigen específicamente mecanismos de la enfermedad.
Introducción
Oscilaciones de la red cerebral se producen dentro de las bandas de frecuencia distintas que se correlacionan con los estados de comportamiento. En los roedores, las oscilaciones θ hipocampo - se observan (5 de 10 Hz) durante conductas exploratorias 1,2, mientras que las oscilaciones γ (20 - 80 Hz) asociado con diversos procesos cognitivos, incluyendo la percepción y la atención 3,4. Actividad de la red γ síncrono también está implicado en la patología de trastornos tales como la epilepsia y la esquizofrenia 5,6. Por ejemplo, se cree que las oscilaciones γ para corresponder a las áreas de cortical focos epilépticos 5,7,8 y ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Todos los experimentos con ratones fueron aprobados por el comité de ética animal Florey Instituto.
1. Configuración para cortar rebanadas de cerebro
- Preparar una solución de corte compuesto por (mM) 125 La colina-Cl, 2,5 KCl, CaCl2 0,4, 6 MgCl2, 1,25 NaH 2 PO 4, 26 NaHCO3, 20 D-glucosa satura con gas carbógeno (95% O 2 -5 % de CO 2) y un líquido cefalorraquídeo artificial (LCRa solución) de grabación consta de (mM) 125 NaCl, 2,5 KCl, 2 CaCl2, 2 MgCl2, 1,25 NaH 2 PO 4, 26 NaHCO 3, 10 D-glucosa, sat....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Estimulación tetánica de los estrato oriens generado robustos y reproducibles oscilaciones γ (35,4 ± 2,2 Hz), véase la Figura 3B. Para demostrar que las oscilaciones se generaron dentro de la red local de CA1 las entradas de CA3 fueron separadas por el corte de la rebanada en la región CA2 usando un doblado 32 G aguja. Las propiedades de oscilación en las rodajas cortadas no difieren de las rodajas cortadas (p = 0,85; corte rebanadas 6,16 ± 1,1 puntos, n = 6; sin cortar rebanadas 5,89 ± 0,8 puntos, n = .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Un método robusto para generar CA1 oscilaciones γ en rodajas de cerebro agudas se describe. Las oscilaciones generadas surgen de un circuito local de permitir una mejor oportunidad para el control y la comprensión de la base neurofisiológica de las oscilaciones de la red 12. Receptores AMPA, receptores GABA A, I h y tipo T Ca 2 + canales son todos necesarios para oscilaciones γ en este modelo. Mientras que las oscilaciones CA1 locales descritos aquí pueden ser generados robust.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Con el apoyo de APA a RJH, 400121 de subvención del programa NHMRC a SP y 1005050 de becas de NMHRC a SP. CAR reconoce el apoyo de ARC (FT0990628) y el esquema de becas DOWD. El Instituto Florey de Neurociencia y Salud Mental cuenta con el apoyo de fondos de infraestructura del gobierno del estado de Victoria.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cloruro de 4-(N-etil-N-fenilamino)-1,2-dimetil-6-(metilamino) pirimidina (ZD7288) | Sigma-Aldrich | Z3777 | |
| Biuculline | Sigma-Aldrich | 14340 | |
| 6-ciano-7-nitroquinoxa- línea-2,3-diona (CNQX) | Sigma-Aldrich | C127 | |
| Níquel | Sigma-Aldrich | 266965 | |
| Carbamazepina | Sigma-Aldrich | C4024 | |
| (2R)-amino-5-fosfonopentano-ato (APV) | Tocris Bioscience | 0105 | |
| Retigabine | ChemPacific | 150812-12-7 | |
| Colina-Cl | Sigma-Aldrich | C1879-5KG | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P9333-500G | |
| NaH2PO4 | Sigma-Aldrich | S9638-250G | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S6297-250G | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653-5KG | |
| Glucosa | Sigma-Aldrich | G8270-1KG | |
| CaCl2 y toro; 2H2O | Sigma-Aldrich | 223506-500G | |
| MgCl2 & toro; 6H2O | Sigma-Aldrich | M2670-500G | |
| Electrodo de vidrio | Aparato de Harvard | GC150F-10 | |
| Electrodo metálico estimulante bipolar concéntrico | Aislador | FHC CBBPF75 | |
| Obtención de instrumentos | modelo BJN8-9V1 | ||
| Amplificador modelo 1800 | Sistemas A-M | Amplificador modelo 1800 | |
| Digitalizador | Instrumentos | nacionales NI USB-6211 | |
| Vibrótomo | Leica | VT1200s |
Referencias
- Buzsaki, G. Theta rhythm of navigation: link between path integration and landmark navigation, episodic and semantic memory. Hippocampus. 15 (7), 827-840 (2005).
- Vanderwolf, C. H. Hippocampal electrical activity ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
