Presentamos una prueba olfativa sencilla e imparcial en ratones. Con este protocolo, la discriminación olfativa, la preferencia, la evitación y la sensibilidad a un olor nuevo en comparación con el agua se pueden evaluar en sesiones conductuales únicas. Este método está indicado para un solo experimentador y el análisis se basa en el procesamiento de vídeo asistido por ordenador.
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Artículo de método
Simple y asistida por ordenador de pruebas olfativas para Ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
El olfato está altamente conservada entre las especies y se requiere para la reproducción y la supervivencia.
En los seres humanos, el olfato es también uno de los sentidos que se ve afectado con el envejecimiento y es un fuerte predictor de enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, las pruebas de olfato se utiliza como un método de diagnóstico no invasivo para detectar déficits neurológicos desde el principio. Con el fin de comprender los mecanismos subyacentes de sensibilidad olfativa red, la investigación olfativa en roedores ha cobrado impulso en la última década.
A continuación, presentamos un método muy simple, eficiente en tiempo y reproducible prueba olfativa de innata percepción del olor y la sensibilidad en los ratones sin la necesidad de cualquier restricción de alimentos o agua antes. Las pruebas se realizan en un ambiente familiar a los ratones, requieren sólo los olores y una sesión de 2 minutos de exposición odorante. Se lleva a cabo el análisis, post-hoc, utilizando comandos asistida por ordenador en ImageJ y puede ser, por lo tanto,, Llevado a cabo de principio a fin por un investigador.
Este protocolo no requiere ningún hardware o configuración especial y está indicado para cualquier laboratorio interesado en probar la percepción olfativa y sensibilidad.
Introducción
El olfato es una de las funciones sensoriales más desarrollados e importantes en los mamíferos. Cualquier alteración en la actividad olfativa puede afectar la ingesta de alimentos, el comportamiento social y, en el peor de los casos, incluso la supervivencia. En los seres humanos, el deterioro del olfato es dependiente de 1 año y es considerado un fuerte predictor de trastornos neurológicos 2-6. La prueba de identificación del olfato desarrollado por la Universidad de Pennsylvania representa actualmente una de las pruebas más utilizadas, no invasivos y cuantificables, de diagnóstico que pueden evaluar los déficits neurológicos primeros 7
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Protocolo
Todos los procedimientos con animales están en conformidad con la Directiva de la UE 2010/63 / UE relativa a la protección de los animales utilizados para fines científicos y son aprobados por el Comité local de Cuidado de Animales (Cantón de Friburgo, Suiza).
1. Preparación Animal
- Los animales experimentales
- Realizar experimentos sobre tipo salvaje adulto de sexo masculino y de ratones transgénicos (C57BL / 6 de fondo) de 3-5 meses de edad. Los tres grupos de ratones corresponden a los controles de tipo salvaje (littermate grupo A, Jagged1 flox / flox 19) y dos líneas condicionales de ratón KO (grupo B, C y....
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Resultados
La prueba mide la percepción de la atracción a la mantequilla de maní y la evitación de ácido 2-MB. Tres grupos de ratones se prueban y el tiempo pasado en el "olor perímetro" se cuantifican en comparación con agua. En la prueba de preferencia, el grupo de control A muestra preferencia significativa al olor en comparación con agua (8 t = 2,52, p <0,05). Por otra parte, el grupo B no muestra ningún interés significativo para la mantequilla de maní y pasa más tiempo con agua (t 6 = 3.22,.......
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Discusión
Las pruebas que se proponen en este protocolo permiten evaluar diferentes aspectos del comportamiento olfativo innata en ratones: la percepción de los olores, la discriminación entre los olores frente a agua y la sensibilidad a los olores. Este protocolo se puede aplicar a cualquier olor de acuerdo con la preferencia y la escala de evitación previamente demostrado 15. Dado que el protocolo se basa en la actividad exploratoria es importante que los ratones no muestran ningún deterioro motor o la ansiedad que p.......
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Divulgaciones
No hay conflicto de intereses.
Agradecimientos
Este trabajo está financiado por la Fundación Nacional Suiza (31_138429) y la Fundación Synapsis para apoyar la investigación sobre la enfermedad de Alzheimer.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jaula para ratones | Italplast (Italia) | 1144B | 36 cm de largo x 20,5 cm de ancho x 13,5 cm de alto |
| Ropa de cama de madera astillada | Abedd (Austria) | LTE E-001 | 3 cm de altura |
| Mantequilla de cacahuete | Migros (Suiza) | NA | 1:10 |
| 2-metilbutírico | Sigma Aldrich (Suiza) | W269514 | Pura |
| Orina de hembras fértiles de la misma cepa de ratón | NA | NA Serie de dilución | |
| Cámara Olympus | (EE. UU.) | Camedia C-8080 | Archivos MOV |
| Quicktime para Java (Windows) | Apple (EE. UU.) | Complemento de | video NA para visualizar archivos MOV |
| ImageJ para Windows | NIH (EE. UU.) | NA | Procesamiento/análisis de video |
Referencias
- Doty, R. L., Kamath, V. The influences of age on olfaction: a review. Cognitive Science. 5, 20(2014).
- Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of o....
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Reimpresiones y permisos
