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Artículo de método

Terapia fotodinámica con Blended polímero conductor / Fullerene nanopartículas fotosensibilizadores

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⸱

DOI:

10.3791/53038

⸱

28 de octubre de 2015

 , 
1NanoScience Technology Center, University of Central Florida, 2Department of Chemistry, University of Central Florida, 3Department of Materials Science and Engineering, University of Central Florida, 4CREOL, The College of Optics and Photonics, University of Central Florida

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un método para la fabricación de nanopartículas poliméricas conductoras mezcladas con fullereno. Estas nanopartículas fueron investigadas por su uso potencial como fotosensibilizadores de próxima generación para la Terapia Fotodinámica (PDT).

Resumen

En este artículo se presenta un método para la fabricación y evaluación in vitro reproducible de nanopartículas poliméricas conductoras mezcladas con fullereno como fotosensibilizadores de próxima generación para la Terapia Fotodinámica (PDT). Las nanopartículas se forman por la interacción hidrofóbica del polímero semiconductor MEH-PPV (poli[2-metoxi-5-(2-etilhexiloxi)-1,4-fenilenvinileno]) con el fullereno PCBM (fenil-C61-éster metílico del ácido butírico) en presencia de un disolvente no compatible. MEH-PPV tiene un alto coeficiente de extinción que conduce a altas tasas de formación de tripletes y una transferencia eficiente de carga y energía al PCBM fullereno. Estos últimos procesos mejoran la eficiencia del sistema PDT a través de la formación de radicales y tripletes asistidos por fullereno, y la desactivación ultrarrápida de MEH-PPV excitado. Los resultados reportados aquí muestran que este sistema de sensibilización de PDT de nanopartículas es altamente efectivo y muestra una especificidad inesperada para las líneas celulares cancerosas.

Introducción

En la terapia fotodinámica (PDT) fotosensibilizadores se administran a un tejido diana, y tras la exposición a la luz el fotosensibilizador genera especies reactivas del oxígeno (ROS). Especies ROS como el oxígeno singlete y superóxido pueden inducir estrés oxidativo y el daño estructural posterior a las células y tejidos 1.4. Debido a su facilidad de aplicación de este método se ha investigado activamente y los ensayos clínicos se han producido 5,6. Sin embargo, las cuestiones importantes, tales como toxicidad en la oscuridad de los sensibilizadores, la sensibilidad del paciente a la luz (debido a la distribución no selectiva del sensibilizador), y la hidrofobicidad de los sensibilizadores (que conduce a la reducción de la biodisponibilidad y el potencial de toxicidad aguda) permanecen.

Aquí se presenta un método para la fabricación e in vitro de evaluación de la realización de las nanopartículas de polímeros mezclados con fullereno como los fotosensibilizadores de próxima generación para PDT. Las nanopartículas se forman por agregación de auto-el polímero semiconductor MEH-PPV (poli [2-metoxi-5- (2-etilhexiloxi) -1,4-fenilenvinileno]) con el PCBM fullereno (fenil-C 61 butírico metil éster de ácido), cuando estos materiales se disolvieron en una compatible disolvente se inyectan rápidamente en un solvente no compatible (Figura 1A). La elección del MEH-PPV como el polímero anfitrión está motivada por su alto coeficiente de extinción que conduce a altas tasas de formación de trío, y tanto la carga y transferencia de energía eficiente y ultrarrápido a la PCBM fullereno 7. Estas propiedades son ideales para la sensibilización de oxígeno singlete y la formación de superóxido en PDT.

Fullerene de hecho se ha aplicado en PDT, tanto en forma molecular y nanopartículas 08.13. Sin embargo, la citotoxicidad severa ha dificultado aún más el desarrollo 12. Aquí mostramos que encapsula el fullereno en una matriz anfitrión MEH-PPV de rendimiento compuesto de nanopartículas MEH-PPV / PCBM resultados en un material de sensibilización de PDT que iNo es citotóxico intrínsecamente, muestra especificidad hacia las células cancerosas debido al tamaño de nanopartículas y la carga superficial, y los rendimientos de tratamiento altamente eficaz PDT a dosis bajas de luz debido a las propiedades fotofísicas antes mencionados.

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Protocolo

1. El cultivo de líneas celulares

  1. Descongele TE 71 (células epiteliales del timo mouse), MDA-MB-231 (células de cáncer de mama humano), A549 (células de cáncer de pulmón humano) y OVCAR3 (células tumorales de ovario humanos) por la celebración de los viales de criógeno en agua tibia durante menos de 2 min . Añadir 10 ml de medio DMEM suplementado con 10% FBS a cada línea celular y centrifugar durante 6 min a 106 x g.
  2. Aspirar la suspensión y añadir medios de 3 ml al sedimento. Mezclar las células correctamente pipeteando varias veces. Añade esta solución de células pre-calentado 7 ml de medio DMEM suplementado con 10% FBS en matraces T75 y mantener los frascos en atmósfera húmeda de 95% de aire / 5% de CO 2 a 37 ° C. Etiquetar este frasco como Pasaje 0.
  3. Cuando la confluencia de las células alcanza el 80%, recoger las células mediante su incubación con 0,05% de tripsina durante 10 min. Neutralizar la tripsina mediante la adición de la misma cantidad de medios de comunicación. Centrifugar esta solución durante 6 min a 106 x g. Retire la suspensión y añadir 3 ml de medio fresco a la misma. Mezclar well y transferir pequeña cantidad (100 l) a un matraz de cultivo que contiene 7 ml de medio. Incubar el frasco de cultivo en la incubadora. Etiquetar el frasco como Paso 1.
  4. Cultura las líneas celulares hasta el paso 11 o 12.

2. Fabricación de nanopartículas

  1. Preparación de ~ 10 -6 M (ajustada) solución madre sin diluir MEH-PPV
    1. En un vial de añadir 1 mg de poli [2-metoxi-5- (2-etilhexiloxi) -1,4-fenilenvinileno] (MEH-PPV) con un peso molecular (promedio Mn) 150,000-250,000 g / mol y 3 ml de tetrahidrofurano (THF) . Se agita la mezcla durante 2 horas mientras se calienta a 80 ° C en un plato caliente.
    2. Se filtra la solución anterior en un nuevo vial usando un filtro de jeringa de 0,2 micras. Etiquetar esta solución como 'MEH-PPV solución madre sin diluir. Esta solución estará involucrado en la preparación de nanopartículas después de puesta a punto de la concentración como se describe en los pasos 2.1.3 y 2.1.4.
    3. Añadir 50 l de la solución sin diluir MEH-PPV Stock en 3 ml de THF. Etiquetar esta solución como "solución madre diluida MEH-PPV '. Transferencia a una cubeta de cuarzo de 1 cm y medir la absorbancia a 495 nm mediante espectroscopia UV-VIS.
    4. Si la absorbancia de la solución madre MEH-PPV diluida es mayor que 0,17, se diluye la solución sin diluir MEH-PPV de stock mediante la adición de más THF 1 ml a la vez, y repetir el paso 2.1.3 hasta que la absorbancia medida a 495 nm está en el oscilar 0,13 a 0,17.
    5. Calcular la molaridad de la solución madre MEH-PPV diluida utilizando la ley de Lambert-Beer, como se muestra a continuación. Aquí 0,15 absorbancia se utiliza como un ejemplo para el resto del protocolo (es decir., Ajustar todos los siguientes cálculos basados ​​en la absorbancia observado), el coeficiente de extinción MEH-PPV usado es 10 7 M -1 cm -1 y la longitud del camino es utilizado 1 cm.
      A = ε xbxc (Ecuación 1)
      (ε - el coeficiente de extinción molar, A - absorbancia, b - longitud de la trayectoria, c - concentración de la solución)
      0.15 = 10 7 M -1 cm -1 x 1 cm xc (Ecuación 2)
      c = 1,5 x 10 -8 M (Ecuación 3)
      Utilice esta concentración para encontrar la concentración de la solución sin diluir MEH-PPV de la forma siguiente:
      M 1 V 1 = M 2 V 2 (Ecuación 4)
      0,15 x 10 -7 M x 3050 l = M 2 x 50 l (Ecuación 5)
      M = 2 9,15 x 10 -7 M (Ecuación 6)
      Esta es la concentración de la 'MEH-PPV solución madre sin diluir ajustado'.
  2. Cálculo de la masa de MEH-PPV en la solución no diluida ajustada Stock MEH-PPV
    1. Calcular la masa de MEH-PPV en 1 ml de la solución madre sin diluir ajustado como se muestra a continuación utilizando la molaridad obtenida en el apartado 2.1.4 y el peso molecular (M w) MEH-PPV de, que es 10 6 g / mol.
      M = n / V (n -. No de moles, V - volumen en L) (Ecuación 7)
      Por lo tanto, la masa de MEH-PPV en 1 ml de ajustado undsolución madre iluted es 9,15 x 10 -4 g.
  3. Combinando PCBM en MEH-PPV
    1. Calcular la masa de Fenil-C 61 butírico éster metílico del ácido (PCBM) que se añaden a la solución madre MEH-PPV para hacer dopado MEH-PPV solución de 50% en peso PCBM, donde el 50% en peso PCBM se define con respecto a la masa del MEH-PPV (es decir, la mitad de la masa del MEH-PPV). Al utilizar el peso del MEH-PPV obtenido en el apartado 2.2.
      Misa de PCBM / 9,15 x 10 -4 g de MEH-PPV x 100% = 50% en peso PCBM (ecuación 8)
      Misa de PCBM = 4,57 x 10 -4 g (ecuación 9)
    2. Pesar 1 mg PCBM en un vial y añadir 500 l de THF. Calcular la concentración de PCBM en esta solución utilizando el peso molecular de PCBM como 910.88 g / mol
      Molaridad de la solución PCBM = 0,001 g / (910,88 g / mol * 500 l) (Ecuación 10)
      La molaridad de la solución de PCBM = 2,19 x 10 -9 mol / l (Ecuación 11)
    3. Calcular el volumen de solución PCBM necesaria para agregar a la ajustada sin diluir MESolución de H-PPV de stock para obtener la solución MEH-PPV PCBM dopado 50% en peso en THF mediante el uso de la molaridad calculado en el paso 2.3.2
      4,57 x 10 -4 g de PCBM x 1 mol / 910.88 gx 1 l / 2,19 x 10 -9 moles = 229 l (Ecuación 12)
      Añadir 229 l de la solución PCBM en 1 ml de solución madre MEH-PPV sin diluir y mezclar bien ajustado.
  4. Preparación de nanopartículas mediante el método de reprecipitación
    1. Transferir 1 ml de la solución de MEH-PPV / PCBM mezclado en la jeringa 1 ml con la aguja unida a ella.
    2. Rápidamente inyectar 1 ml de la solución de MEH-PPV / PCBM mezclado en 4 ml de agua DI agitación a 1200 rpm. Deja de agitar inmediatamente después de la inyección. Utilice estas nanopartículas sin transformar.

3. Incubación de líneas celulares con nanopartículas de Imagen

NOTA: Todos los experimentos de imagen se completaron en placas de Petri de 35 mm

  1. La captación de nanoparticulos en líneas celulares
    1. Líneas celulares de Cultura hasta el 12 º paso. A las 12 células de cultivo pasaje th en 35 mm placas de Petri. Ajuste concentración de células añadidas a los 35 mm placas de Petri tal que después de 24 hr las células son 40% de confluencia.
    2. En esta etapa eliminar los medios de comunicación DMEM suplementado con 10% FBS de las placas de Petri, se lavan las células con DPBS 1x dos veces, y añadir 100 l de la suspensión de nanopartículas en 2 ml de DMEM a las placas de Petri.
    3. Después de 24 hr quitar el DMEM / nanopartículas suspensión de las placas de Petri y se lavan las células con DPBS 1x 3 veces. A continuación, fijar las células mediante incubación con paraformaldehído al 4% durante 10 min. Lavar dos veces con DPBS. Teñir las células con 300 nM DAPI mediante la incubación con el colorante durante 2 min. Lavar dos veces con DPBS. A continuación, mantener las células en DPBS para imágenes.
  2. La detección de ROS
    1. A549 cultura y líneas celulares OVCAR3 en placas de Petri, 6 por cada línea celular, tal como se explica en la sección 3.1.1. Etiquetar elPlacas de Petri como se muestra en la Tabla 1.
    2. Añadir 100 l de la suspensión de nanopartículas en 2 ml de DMEM a tres de los platos de petri como se muestra en la Tabla 1 y se incuba durante 24 hr. Para las cajas de Petri que recibirán dosis de luz, lavar las células después de 24 horas y suspender las células en HBSS (solución salina equilibrada de Hank) Dye medios de comunicación libres.
    3. Calentar la lámpara del simulador solar durante 15 min. Coloque el filtro UV en frente de la lámpara para filtrar la luz ultravioleta. Calibre la lámpara con una célula solar de referencia mediante el ajuste de la potencia de la lámpara para obtener 0,5 dom (50 mW / cm 2) la intensidad en la superficie de la placa de Petri. En esta configuración particular que la condición se logró con 218 W de potencia suministrada a la lámpara.
    4. Colocar las placas de Petri bajo la lámpara (tapa abierta) durante 60 min, lo que se traduce en una dosis de luz de 180 J / cm 2 como se muestra en los cálculos siguientes:
      50 mW / cm 2 x 3600 seg / 1000 = 180 J / cm 2
    5. Retirar HBSS y sin lavar añadir más 2 ml de medio DMEM suplementado con 10% de FBS a las placas de Petri. Se incuban las células durante otras 2 h.
    6. Para el control positivo se incuban las células con 100 mM de peróxido de hidrógeno (H 2 O 2) durante 30 min.
    7. Teñir las células en todas las placas de Petri con una concentración final de 5 mM del reactivo de detección de ROS mediante la incubación de las células con el colorante durante 30 min a 37 ° C.
    8. Fijar las células mediante incubación con paraformaldehído al 4% durante 10 min. Lavar dos veces con DPBS. Teñir las células con 300 nM DAPI mediante la incubación con el colorante durante 2 min. Lavar dos veces con DPBS. A continuación, mantener las células en DPBS para imágenes.
  3. La apoptosis y necrosis por PI y anexina V FITC
    1. Cultura cada línea celular en 5 placas de Petri. Tres de estas placas de Petri habrá para el experimento, mientras que los restantes 2 placas de Petri serán muestras de control. Incubar las 3 placas de Petri para experimentar con nanopartículas como el correoXplained en la sección 3.1.2. Las muestras de control no se incubaron con nanopartículas.
    2. Después de 24 horas de incubación seguir el paso 3.2.3.
    3. Colocar las 3 placas de Petri experimentales bajo la lámpara (tapa abierta) y extraer uno a 20 min, 40 min de uno en uno y uno en 60 min. Esto produce tres muestras que fueron expuestos a dosis de luz de 60, 120 y 180 J / cm2, respectivamente (de cálculo en la sección 3.2.4). A continuación, administrar un 180 J / cm 2 dosis de la luz a una de las placas de Petri de control. Este es el control con la dosis de luz aplicada en la ausencia de nanopartículas. No aplicar dosis de luz de la muestra de control restante (no hay nanopartículas y sin dosis de luz aplicada).
    4. Sustituir el HBSS con los medios DMEM suplementado con 10% de FBS y mantener las placas de Petri en la incubadora durante 4 hr.
    5. Teñir las células en el grupo experimental y de control de las placas de Petri con 20 l de anexina V FITC incubando las células con el colorante durante 15 min. Lavar dos veces con DPBS. Manchar la cells con 300 nM DAPI así como 300 nM PI (yoduro de propidio) mediante la incubación con los colorantes para 2 min. Lavar dos veces con DPBS. A continuación, mantener las células en DPBS para imágenes.

4. intrínseca citotoxicidad de nanopartículas

  1. Contar las células y el cultivo en placas de 96 pocillos
    1. Recoger las células de los matraces de cultivo mediante la eliminación de los medios y lavado de las células dos veces con DPBS seguido de incubación de las células con 0,05% de tripsina durante 10 min. Añadir 2 ml de medio DMEM suplementado con 10% FBS a la solución de células resultante. Mezclar la solución adecuada para separar grupos de células en interiores.
    2. Tomar 100 l de la suspensión celular y añadir a 900 mu l de medios DMEM suplementado con 10% FBS. Mezclar bien. Coloque 10 l de esta suspensión en un hemocitómetro. Contar las células utilizando el hemocitómetro y ajustar la concentración de la suspensión celular en 4.1.1 a 5 x 10 4 células / ml.
    3. Tome 5 placas de 96 pocillos etiquetados como 0 h, 24 hr, 48 h, 72 hy 96 h. Añadir 50 l de las 5 x 10 4 células / ml de células soluciones (TE 71 y A549) en los pocillos como se muestra en la Tabla 2, la siembra de este modo 2.500 células / pocillo. Realice el mismo procedimiento para las líneas celulares OVCAR3 y MDA-MB-231.
    4. Después de 24 hr lavar los pocillos con 1x DPBS y añadir 50 l de concentraciones crecientes de nanopartículas en los pocillos como se muestra en la Tabla 2. Preparar diferentes concentraciones de nanopartículas mediante la adición de 20, 100, y 180 l de suspensión de nanopartículas a partir de 2.4.2 a DMEM a obtener un volumen final de 2 ml, que produce concentraciones de nanopartículas de 0,4 x 10 -4 mg / ml, 2,0 x 10 -4 mg / ml, y 3,6 x 10 -4 mg / ml, respectivamente. Cada línea celular tiene por triplicado para cada concentración de nanopartículas.
  2. La medición de la viabilidad celular en la oscuridad
    1. Añadir 10 l de MTT a la placa 0 horas inmediatamente después de la adición de nanopartículas. Incubar la placa durante 4 horas para cri formazánALS a la forma. Añadir solución de solubilización 50 l en los pocillos. Incubar la placa durante 6 horas para disolver los cristales de formazán.
    2. Medir la viabilidad de las células de la placa de 0 hr mediante el registro de la absorbancia a 570 nm con un lector de microplacas.
    3. Por 24 horas la placa, se lavan las células con 1x DPBS y añadir 50 l medios de comunicación en cada incubación bien después de 24 horas con nanopartículas. Añadir MTT y leer la placa como se explica en 4.2.1 y 4.2.2.
    4. Por 48 horas, 72 horas y 96 placas hr, se lavan las células con 1x DPBS y añadir 50 l de medios en los pocillos después de 24 horas de incubación con nanopartículas. Se incuban las células durante los períodos restantes.
    5. 4.2.5) Medir la viabilidad celular en los puntos de tiempo particulares como se explica en 4.2.1 y 4.2.2.
    6. Repite el experimento completo para 3 veces (n = 3)

5. medir la viabilidad celular después de PDT

  1. Contar las células y cultivando en placas de 96 pocillos.
    1. Etiquetar un conjunto de 9Placas de 6 pocillos como se muestra en la Tabla 3, tanto para los TE 71 placas + A549 y OVCAR3 + MDA-MB-231 placas. La disposición de las placas será la misma como se muestra en 4.1.3.
    2. Semilla las placas de 96 pocillos como se explica en la sección 4.1 con el mismo diseño que se muestra en la Tabla 2 en la sección 4.1.2.
    3. Después de 24 horas añadir nanopartículas a las placas como se explica en 4.1.4.
    4. 24 hr después de la adición de nanopartículas de lavar las células con 1x DPBS y añadir 50 l de HBSS a cada pocillo.
    5. Irradiar las placas con las respectivas dosis de luz como se explica en 3.2.3.
    6. Vuelva a colocar la HBSS con 50 l medio DMEM suplementado con 10% de SFB y se incuban las placas durante los períodos de tiempo respectivos después de la TFD.
    7. Después de cada período de tiempo medir la viabilidad celular como se explica en 4.2.1 y 4.2.2.

6. microscopía de fluorescencia

  1. La adopción de las nanopartículas
    1. Encienda las luces de un microscopiond el láser 30 minutos antes de la proyección de imagen. Coloque la placa de Petri que contiene las células fijas (como se explica en la sección 3.1) en la platina del microscopio.
    2. Recoger la fluorescencia de nanopartículas y DAPI por el uso de filtros como se muestra en la Tabla 4. Superposición de la fase de contraste, nanopartículas y las imágenes DAPI en software ImageJ.
  2. La detección de ROS
    1. Encienda las luces del microscopio 30 minutos antes de la proyección de imagen. Coloque la placa de Petri que contiene las células (como se explica en la sección 3.2) en la platina del microscopio.
    2. Recoger la fluorescencia de nanopartículas, DAPI, y el reactivo de detección de ROS mediante el uso de filtros como se muestra en la Tabla 4. Superponer la de contraste de fase, nanopartícula, DAPI y la detección de ROS imágenes de reactivos en el software ImageJ.
  3. La apoptosis y necrosis por PI y anexina V FITC
    1. Encienda las luces del microscopio 30 minutos antes de la proyección de imagen. Poner la placa de Petri que contiene las células (como se explica ensección 3.3) en la platina del microscopio.
    2. Recoger la fluorescencia de nanopartículas, DAPI, PI y Anexina V FITC mediante el uso de filtros como se muestra en la Tabla 4. Superponer la de contraste de fase, nanopartícula, DAPI, PI y Anexina V FITC imágenes en el software ImageJ.

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Resultados

La captación y la citotoxicidad intrínseca de nanopartículas

Los 50% en peso de nanopartículas mezclados MEH-PPV / PCBM se incubaron con TE 71, MDA-MB-231, A549 y líneas de células OVCAR3. El nivel de mezcla PCBM fue elegido como 50% en peso de PCBM, que se ha demostrado para proporcionar propiedades de carga y de transferencia de energía ideales entre polímeros conjugados y fullerenos 14. Las imágenes de fluorescencia de la captación de nanopartículas se muestran en la Fi...

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Discusión

Para lograr la captación de nanopartículas que era necesario mantener algunas medidas críticas, mientras que la fabricación de las nanopartículas. Una solución MEH-PPV M 10 -6 (mezclado con 50% en peso PCBM) en THF estaba preparado para inyectar en agua DI, ya que se observó que la concentración de esta solución juega un papel importante en la determinación del tamaño de las nanopartículas se está formando. Concentración se comprobó mediante espectroscopía de UV-vis. Tenga en cuenta que en el paso 2.1.3 proto...

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores agradecen a la National Science Foundation (NSF) por el apoyo financiero a este trabajo a través de un premio CAREER (CBET-0746210) y a través del premio CBET-1159500. Nos gustaría agradecer al Dr. Turkson (Univ. del Hawaii Cancer Center) y al Dr. Altomare (Univ. of Central Florida College of Medicine) por su ayuda con el cultivo celular.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Poli[2-metoxi-5-(2-etilhexiloxi)-1,4-fenilenvinilonico] (MEH-PPV)Sigma Aidrich536512-1Gpromedio Mn  150,000-250,000
[6,6]-Fenil C61  éster metílico de ácido butírico (PCBM)Sigma Aidrich684449-500MG99.5%
Tetrahidrofurano (THF)EMDTX0284-6Drisolv
jeringa de 1 mlNational Scientific Company37510-1Para la filtración de solución MEH-PPV
Filtro de jeringaVWR28145-49525 mm, 0,2 y micro; m, PTFE
Jeringa de 1 mlHamilton Company81320Para inyección de solución MEH-PPV en agua para hacer nanopartículas
Dulbecco's Modification of Eagle's Medium/Ham's F-12 50/50 Mix (DMEM)Corning (VWR)45000-350
Hank's Balanced Salt Solution sin rojo de fenol (HBSS)Calidad Biológica (VWR)10128-740
Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco, 1x sin calcio y magnesio (DPBS)Corning (VWR)45000-436
Suero fetal bovino, regular (inactivado por calor) (FBS)Corning (VWR)45000-736
Tripsina EDTA 1x 0.25%Corning (VWR)45000-664tripsina/2.21 mM EDTA en HBSS sin bicarbonato de sodio, calcio y magnesio Parvovirus porcino probado 16
% ParaformaldehídoCiencias de la Microscopía Electrónica 15710El paraformaldehído al 16% se diluye al 4% mediante la adición de PBS
DAPI  Biotium VWR89139-054Tinción nuclear
pipetas de 5 mlVWR82050-478
matraz de cultivo de 75 cm2VWR82050-856para células de cultivo
96 pocillosVWR82050-771para ensayos MTT
Placas de cultivo de tejidos con respiraderosGreiner Bio-One (VWR)82050-538
Yoduro de propidioSondas molecularesP3566
Anexina V FITCInvitrogenA13199colorante para la apoptosis
Celltiter 96 ensayos no R 1000Promega (VWR)PAG4000MTT
CellROX Green Reactivo, para la detección del estrés oxidativoInvitrogenC10444para ROS
espectrómetro UV-visde detección Agilent 8453
Espectrómetro de fluorescenciaNanoLog HoribaJobin Yvon
PD2000DLS de dispersión de luz dinámica, Detector
IncubadoraNuAir DH Autoflow
Microscopio confocalZeiss Axioskop263X lente objetivo de inmersión en aceite
Microscopio de epiluminiscenciaOlympus IX7160X lente de objetivo de inmersión en agua, cámara Andor Zyla sCMOS
Simulador solarNewport 67005 Oriel Instruments
Referencia célula solarOriel Estándares VLSI incorporados Lector
microplacasBioTek Ex808
HemocitómetroHausser Scientific Partnership3200Para el recuento de células
>placas dede precisión de

Referencias

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