Artículo de método

La determinación de Preferencias ultrasónico Vocalización en ratones utilizando una prueba de reproducción de dos elección

DOI:

10.3791/53074

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3 de septiembre de 2015

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1School of Veterinary Medicine, Azabu University, 2Division of Electric and Information Engineering, Tokyo University of Agriculture and Technology, 3Kato Acoustics Consulting Office

En este artículo

Resumen

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Las vocalizaciones ultrasónicas (USV) en ratones difieren según la edad, el sexo, la condición y los antecedentes genéticos. Utilizando dos emisores de ultrasonido que emiten simultáneamente en diferentes ubicaciones, esta prueba de dos opciones puede evaluar el reconocimiento murino y las respuestas de preferencia a diferentes características de los USV.

Resumen

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Los ratones emiten vocalizaciones ultrasónicas (USV) durante una variedad de condiciones, como el aislamiento de los cachorros y las interacciones sociales de los adultos. Estos USV difieren con la edad, el sexo, la condición y los antecedentes genéticos del animal emisor. Aunque muchos estudios han caracterizado estas diferencias, aún no se ha dilucidado si los ratones receptores pueden discriminar entre USV objetivamente diferentes y mostrar preferencias por rasgos sonoros particulares. Para determinar si los ratones pueden discriminar entre diferentes características de los USV, recientemente se desarrolló un experimento de reproducción, en el que las respuestas de preferencia de los ratones a dos USV diferentes podrían evaluarse en forma de preferencia de lugar.

Primero, se registraron los USV de ratones. A continuación, los USV grabados se editaron, se recortaron en consecuencia y se exportaron como archivos de sonido estereofónico. A continuación, las amplitudes USV generadas por los dos emisores de ultrasonidos utilizados en el experimento se ajustaron al mismo nivel de presión sonora. Se utilizaron emisores termoacústicos de silicio nanocristalino para reproducir los USV. Finalmente, para investigar la preferencia de los ratones en cuestión a los USV seleccionados, se reprodujeron simultáneamente pares de dos señales de USV diferentes en una caja de prueba de dos opciones. Al entrar repetidamente en una zona definida cerca de un emisor de ultrasonidos y buscar en la malla de alambre delante del emisor, el ratón revela su preferencia por un sonido sobre otro. Este modelo permite comparar el atractivo de las diversas características de los USV de ratón, en varios contextos.

Introducción

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Muchos animales utilizan vocalizaciones para la comunicación intraespecífica. En el ratón Mus musculus, un tipo importante de la señal de comunicación es vocalizaciones ultrasónicas (USVs), que tienen frecuencias superiores a 20 kHz. USVs emitidos por los ratones se consideran un componente de reconocimiento social en hombre-mujer 1.4, hembra-hembra 1, 5 y macho-macho 1, 6 interacciones. USVs también son emitidos por los cachorros cuando están aislados de su madre, lo que aumenta su comportamiento cachorro-recuperación, y por lo tanto PUP supervivencia 7. Aunque muchos informes han analizado y categorizado USVs ratón 8....

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Protocolo

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Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Ética de la Universidad de Azabu. Todos los experimentos se llevaron a cabo en una cámara insonorizada.

1. Preparación Animal

  1. Machos para grabación
    1. Obtener ratones machos sexualmente maduros con experiencia en el apareamiento.
  2. Los sujetos femeninos
    1. Obtener ratones hembra virgen que han sido alojados con 2 a 5 compañeros de camada por jaula (generalmente 8 - 12 semanas de edad).
    2. Obtener frotis vaginal a diario para determinar la fase del ciclo estral antes de la prueba, según McLean 21. Se debe tener cuidado para....

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Resultados

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Los USVs registran de una BALB-macho (161 sílabas por 20 sec), así como el ruido de fondo se usaron como la reproducción de sonidos en el experimento representativo se muestra en la Figura 3. En este experimento, se utilizaron 7 ratones B6 hembra a 9 semanas de edad . Para determinar la mejor duración de las pruebas de respuesta femenina para reproducir los sonidos, los parámetros de comportamiento se analizaron por separado para los primeros y últimos cinco min de la época total de la .......

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Discusión

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Aquí, los resultados de una prueba representativa mostraron que los ratones hembra pueden discriminar entre USV machos artificiales y ruido de fondo (Figura 3). La conclusión que se extrae de estos resultados es que la señal de discriminación se refleja en la duración de la estancia en la habitación y la zona de sonido, y en la duración de la búsqueda de la malla en los primeros 5 min de prueba, pero no en los segundos 5 min (Figura 3C, E y F). Estos datos indican que los ratones se habi.......

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Divulgaciones

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Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.

Agradecimientos

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Este trabajo fue apoyado por una subvención-en-Ayudas a JSP becarios a AA; por subvenciones-en-Ayudas a la Investigación Científica en Áreas innovadoras para JSP Fellows (Nº 4501 y Nº 25132712) a los conocimientos tradicionales; y con una donación proyecto de investigación otorgado por la Universidad de Azabu. Figura 2 se reimprime de Kihara, T., Harada, T., y Koshida, fabricación y características de silicio nanocristalino inducidos térmicamente emisores de ultrasonido compatible con la oblea N.. En: Los sensores y actuadores A: físicas, volumen 125, Elsevier, p. 426, (2006), con permiso de Elsevier.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cámara insonorizadaMuromachi Kikai
Jaula pequeñaCLEA JapónCL-0113-1
Jaula intermediaCLEA JapónCL-0103-1
Micrófonos de condensador de ultrasonidosAvisoft BioacousticsCM16/CMPA
Convertidor A/DAvisoftBioacoustics UltraSoundGate116H
Audio softwareAvisoft BioacousticsRECORDER USGH
Adobe Audition 3.0 / Software de edición de audioAdobe SystemsAdobe Audition 3.0
Emisor de Nc-SiOriginalno está disponible comercialmente, pero está previsto que lo esté en un futuro próximo
Convertidor D/A National InstrumentsNI USB-6251 BNC
AttenuatorOriginal
AmplificadorYamatake
PCWindows 7 profesionalIntel® core i7-2600K CPU @ 3.4GHz, 8GB RAM, sistema operativo de 64 bits
Grabador de eventos Excel-macro / Software de puntuación de eventosoriginalProgramado por Naoto Akagawa & Takeru Yamamoto
Cámara
Placas de goma (hechas de resina elastómera)Tokyo bouonTI-75BK B4Córtelos al tamaño adecuado http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&ca=6&p=3
Solución de azul de metileno de eosina azur de GiemsaMerck Millipore1.09204.0500
CCD

Referencias

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  1. Panksepp, J. B., et al. Affiliative behavior, ultrasonic communication and social reward are influenced by genetic variation in adolescent mice. PLoS One. 2 (4), e351(2007).
  2. Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N.

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Etiquetas

Comportamiento del rat nPrueba de dos opcionesReproducci n de sonidoGrabaci n de USVEdici n de audioCalibraci n del emisorNivel de presi n sonoraMonitoreo conductualPruebas de preferencia

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