Los autores presentan un protocolo para recolectar toallitas nasales de cerdos para detectar y aislar los virus de la influenza A.
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Artículo de método
Nasal Toallitas para Influenza A Detección de Virus y aislamiento de los cerdos
En este artículo
Resumen
Resumen
La vigilancia de los virus de la gripe A en cerdos es fundamental para la salud humana y animal debido a la influenza A virus evoluciona rápidamente en poblaciones porcinas y las nuevas cepas están surgiendo continuamente. Los cerdos son capaces de ser infectados por diversos linajes del virus de la gripe A haciéndolos anfitriones importantes para la aparición y el mantenimiento de la nueva influenza A cepas del virus. Muestreo cerdos en diversos entornos, como las granjas comerciales de cerdos, ferias agrícolas y mercados de animales vivos es importante proporcionar una visión completa de las cepas circulantes de IAV. La técnica actual estándar de oro ante mortem de muestreo (es decir, colección de hisopos nasales) es mano de obra intensiva, ya que requiere la restricción física de los cerdos. Toallitas nasales implican frotar un trozo de tela a través del hocico del cerdo con mínima o ninguna restricción del animal. La nasal limpie procedimiento es sencillo de realizar y no requiere personal con veterinaria profesional o capacitación manejo de animales. While ligeramente menos sensible que hisopos nasales, las tasas de detección de virus y de aislamiento son adecuados para hacer nasal limpia una alternativa viable para el muestreo de los cerdos individuales cuando se requieren métodos de muestreo de baja tensión. El protocolo de procedimiento describe los pasos necesarios para cobrar una nasal viable limpie de un cerdo individual.
Introducción
Los virus de influenza A (IAV) causan enfermedades respiratorias en muchas especies, incluyendo aves domésticas, cerdos y seres humanos. Debido al reordenamiento del genoma segmentado IAV rápida evolución viral puede ocurrir y nuevas cepas IAV surgir con frecuencia. Cerdos son una especie que puede servir como un recipiente de mezcla para la redistribución de los virus de este tipo a partir de múltiples especies huésped. 1 Actualmente hay tres subtipos principales de IAV comúnmente circulan entre los cerdos de América del Norte (H1N1, H1N2, H3N2), pero múltiples introducciones IAV de los seres humanos tienen llevó a una extensa diversidad IAV dentro ....
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Protocolo
Todos los cerdos utilizados en la recogida de los siguientes datos estaban protegidos bajo el Comité de Animales Institucional de Cuidado y Uso Universidad Estatal de Ohio (uso de animales número de protocolo 2009A0134-R1).
1. Preparación de Viral Medio de Transporte y Recogida de muestras Viales
- Añadir 37 g de Brain Heart Infusion a 900 ml de agua purificada y mezclar bien con una barra de agitación y un agitador magnético mientras se calienta a 70 ° C para disolver completamente el polvo.
- Autoclave el caldo a 121 ° C durante 15 min. Dejar enfriar en la mesa de trabajo hasta que el caldo alcanza la temperatura ambien....
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Resultados
El uso exitoso de este método produce RT-PCR resulta que, acompañado con el uso de un control interno durante la extracción de RNA y RT-PCR, se muestran muestras no contenían inhibidores de PCR de cualquier residuo ambiental recogió durante el muestreo. Después de la inoculación de la muestra, los pozos de aislamiento del virus deben estar libres de escombros ambiental visible de la muestra. Existe un acuerdo razonable entre los resultados de RT-PCR y los resultados de aislamiento de virus con el entendimiento de que la.......
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Discusión
La recolección de muestras de cerdos utilizando hisopos nasales de poliéster con punta ha demostrado ser útil en la realización de la vigilancia IAV; Sin embargo, el uso del procedimiento de hisopo nasal dificulta los esfuerzos de vigilancia debido al uso requerido de un lazo a la moderación. Toallitas nasales representan un refinamiento de las técnicas de muestreo porcina actuales para minimizar el estrés en las personas y cerdos durante la recogida de muestras. Mientras que el método ha sido desarrollado y validado pa.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo ha sido financiado en parte con fondos federales de los Centros de Excelencia para la Investigación y Vigilancia de la Influenza (CEIRS), el Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas, los Institutos Nacionales de Salud, el Departamento de Salud y Servicios Humanos, bajo el Contrato No. HHSN272201400006C.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| BBL Brain Heart Infusion | Becton, Dickinson and Company 211059 | ||
| Penicilina G Sal de sodio | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
| Sulfato de estreptomicina | AMRESCO LLC | 0382 | |
| Solución de gentamicina | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
| Solución de anfotericina B | Fisher S | 24 25 250 | ug/ml |
| Sulfato de kanamicina | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
| TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
| Frascos de diagnóstico Nalgen | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE con cierre de PP blanco |
| Esponja de gasa Dermacea, 8 capas | Covidien | 441211 | 5,08 cm y veces; 5,08 cm (2 pulgadas y veces; 2 pulgadas) |
| Guantes de examen de nitrilo | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |
Referencias
- Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications. J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).
- Nelson, M. I., Vincent, A. L. Reverse zoonosis of influenza to swine: ne....
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Reimpresiones y permisos
