Se presenta un protocolo para la extracción y preconcentración de estradiol de muestras de agua mediante el uso de un sistema automatizado y miniaturizado.
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Artículo de método
Un método simple para la fase sólida automatizada Extracción de muestras de agua para análisis inmunológico de los pequeños contaminantes
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Resumen
Resumen
Se propone un nuevo método para la extracción en fase sólida (SPE) de muestras de agua del medio ambiente. El prototipo desarrollado es rentable y fácil de usar, y permite realizar SPE rápida, automatizada y sencilla. La solución de pre-concentrada es compatible con el análisis por inmunoensayo, con un contenido de disolvente orgánico de bajo. Se describe un método para la extracción y pre-concentración de hormona natural 17β-estradiol en muestras de 100 ml de agua. SPE en fase inversa se realiza con sorbente octadecil-sílice y la elución se realiza con 200 l de metanol 50% v / v. Eluyente se diluye mediante la adición de agua DI para reducir la cantidad de metanol. Después de preparar manualmente la columna de la SPE, el procedimiento general se realiza automáticamente dentro de 1 hora. Al final del proceso, la concentración de estradiol se mide mediante el uso de un ensayo de inmuno-sorbente ligado a enzima comercial (ELISA). 100 veces pre-concentración se consigue y el contenido de metanol en sólo el 10% v / v. Recuperaciones completas de la moléculase consiguen con 1 ng / L claveteado muestras desionizada y sintéticos de agua de mar.
Introducción
Preparación de la muestra es un paso importante en cualquier proceso analítico. En particular, la eliminación de los efectos de matriz, disminución de interferencias, y el enriquecimiento de la sustancia analizada son necesarios para obtener resultados precisos y llegar a los límites de detección bajos. Compuestos disruptores endocrinos (EDC) son de particular interés debido a su acción sobre los organismos vivos, incluso cuando están presentes en niveles muy bajos en el medio ambiente. La hormona natural 17β-estradiol está presente en la contaminación de las aguas de la UE Lista de Vigilancia y propenso a ser añadido a la lista de sustancias prioritarias reguladas p....
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Protocolo
Nota: El siguiente protocolo describe la SPE realiza en muestra de 100 ml de agua con sorbente C18 y elución con 50% v / v de metanol. La muestra enriquecida se diluye hasta alcanzar el 10% v / v de metanol antes del análisis con un ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) kit.
1. Preparación de los Reactivos
- Preparar las muestras de agua
- Antes de cualquier otra medida, filtrar cada muestra de 100 ml de agua con filtros de tamaño de 0,2 micras de poro.
- Pico de la muestra con concentración deseada mediante la dilución de volumen apropiado de solución de referencia en un volumen de agua. Por ejemplo, prepar....
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Resultados
Reproducibilidad de embalaje sorbente se evaluó mediante el secado y la ponderación de la sorbente pipeteado en viales de vidrio y el resultado se muestra en la Figura 1. Reproducibilidad del momento de la inyección fue probado para muestras de 100 ml, como se muestra en la Figura 2. Concentración en inicial y pre concentrada claveteado muestras se determinaron mediante el uso de un kit comercial de ELISA para 17β-estrad.......
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Discusión
Se propuso un nuevo método para la preparación de muestras de agua, seguido de análisis mediante inmunoensayo. El instrumento permite realizar extracción en fase sólida en una forma automatizada y fácil de usar.
La filtración de la muestra de agua antes de su inyección en el sistema es crítico. Cualquier partículas aún presentes en la solución sería potencialmente causar la obstrucción de la red fluídica y obstruir la columna de la SPE. Otro paso importante es la preparación de la columna de.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por el Séptimo Programa Marco de la Unión Europea FP7/2007-2013 bajo el acuerdo de subvención nº 265721. Los autores agradecen al RIKILT Institute for Food Safety (NL) por su apoyo en este proyecto.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Membrana filtrante 0,2 μ m tamaño de poro | Merck Millipore | GNWP04700 | Para la filtración de muestras |
| Membrana de nailon 11 μ m tamaño de poro | Merck Millipore | NY1104700 | Para columna SPE |
| Punzón de biopsia desechable 5 mm | Presupuesto médico | 39302439 | |
| Nucleodur C18 ec | Macherey Nagel | 713550.01 | 50 μ m diámetro de partícula |
| Agua de mar sintética | Sigma Aldrich | SSWS500-500ML | |
| Metanol | VWR | ||
| 17beta-estradiol estándar | Enzo Life Science | 300 ng/ml | |
| 17beta-estradiol Kit ELISA | Enzo Life Science | ADI-900-008 | 96 pocillos, rango 30 - 3.000 ng/L |
Referencias
- Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water. J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).
- Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E.
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Reimpresiones y permisos
