En los embriones de Xenopus, las células del techo del blastocelo son pluripotentes y pueden programarse para generar varios tejidos. Aquí, describimos los protocolos para usar explantes de techo de blastocoel de anfibios como un sistema de ensayo para investigar las características clave in vivo e in vitro del desarrollo neuronal temprano.
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En este artículo
Resumen
Resumen
Comprender los programas genéticos que subyacen al desarrollo neuronal es un objetivo importante de la biología del desarrollo y de las células madre. En la blástula de los anfibios, las células del techo del blastocoel son pluripotentes. Estas células pueden ser aisladas y programadas para generar varios tejidos a través de la manipulación de la expresión de genes o la inducción por morfógenos. En este manuscrito se describen los protocolos para el uso de explantes de techo de blastocoel de Xenopus laevis como sistema de ensayo para investigar las características clave in vivo e in vitro del desarrollo neuronal temprano. Estos protocolos permiten la investigación de la adquisición del destino, los comportamientos de migración celular y las propiedades autónomas y no autónomas de la célula. Los explantes de techo de blastocoel pueden cultivarse en un medio definido libre de suero e injertarse en embriones hospedadores. Este trasplante en un embrión permite investigar el compromiso del linaje a largo plazo, las propiedades inductivas y el comportamiento de las células trasplantadas in vivo. Estos ensayos pueden aprovecharse para investigar los mecanismos moleculares, los procesos celulares y las redes reguladoras de genes que subyacen al desarrollo neuronal. En el contexto de la medicina regenerativa, estos ensayos proporcionan un medio para generar tipos de células derivadas de neuronas in vitro que podrían utilizarse en el cribado de fármacos.
Introducción
El sistema nervioso de los vertebrados emerge de la placa neural como una capa homogénea de células neuroepiteliales. La comprensión de cómo se inducen los programas de desarrollo, codificados, y establecieron durante la regionalización de la placa neural es, en la actualidad, una meta importante en la biología del desarrollo. En comparación con otros sistemas, el embrión Xenopus experimentalmente susceptible es un modelo de elección para el análisis de los primeros pasos de 1,2 desarrollo neural. Es fácil de obtener un gran número de embriones, y el desarrollo externo da acceso a los primeros pasos de neurulation 3. Muchas herramientas....
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Protocolo
Los experimentos cumplen con la regulación nacional y europea sobre la protección de los animales utilizados para fines científicos y con los principios establecidos a nivel internacional de sustitución, reducción y refinamiento.
1.-montaje plana de Xenopus laevis renacuajos anterior Tubo Neural Después de todo el montaje hibridación in situ
- Obtener X. laevis embriones según los procedimientos estándar de 4 y los años hasta que alcancen neurula etapa 26 y más años (según Nieuwkoop y Faber mesa de desarrollo 17.
- Fix X. laevis renacuajos mediante su incubación en....
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Resultados
En base a consideraciones morfológicas en diferentes especies, las manipulaciones embriológicas, y el patrón de expresión de genes reguladores, un modelo conceptual sostiene que la placa neural se divide en segmentos transversales y longitudinales que definen una rejilla de desarrollo generar campos histogenic distintas. En la placa neural, los primordios del prosencéfalo, mesencéfalo, cerebelo y la médula espinal están todos ya establecidos a lo largo del eje antero-posterior (AP) duran.......
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Discusión
Desarrollo neuronal es orquestada por una compleja interacción entre los programas de desarrollo celulares y señales de los tejidos circundantes (revisado en 3,31,32). Aquí se describe un conjunto de protocolos que se puede utilizar en X. laevis embriones para explorar factores extrínsecos e intrínsecos que intervienen en la determinación del destino neural y la morfogénesis neuronal in vitro e in vivo. Estos protocolos pueden ser utilizados como tales en X. embriones t.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
El autor agradece a Hugo Juraver-Geslin, Marion Wassef y Anne Hélène Monsoro-Burq por su ayuda y consejos, y al Animalario del Institut Curie. El autor agradece a Paul Johnson por su trabajo de edición en el manuscrito. Este trabajo ha contado con el apoyo del Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS UMR8197, INSERM U1024) y por subvenciones de la "Association pour la Recherche sur le Cancer" (ARC 4972 y ARC 5115; FRC DOC20120605233 y LABEX Memolife) y la Fundación Pierre Gilles de Gennes (FPGG0039).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Paraformaldehído | VWR | 20909.290 | Perlas de |
| resina de intercambio aniónico | Biorad | 140- 1231 | |
| Albúmina sérica bovina | SIGMA | A-7888 | Para el cultivo de capuchón animalpH 7.6 |
| Gentamicina | GIBCO | 15751-045 | antibiótico |
| Albúmina sérica bovina | SIGMA | A7906 | para la preparación de cordones |
Referencias
- Nieuwkoop, P. D. IIB, Pattern formation in the developing central nervous system (CNS) of the amphibians and birds (English). Proceedings of the Koninklijke Nederlandse Akademie van Wetenschappen. 94, 121-127 (1991).
- Nieuwkoop, P. D.
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Reimpresiones y permisos
