La leche es una fuente primaria de nutrición para el recién nacido. El análisis de los componentes de la leche puede proporcionar información sobre los factores maternos que afectan la salud de la descendencia. Este protocolo describe un método manual de recolección de muestras de leche de la rata lactante, que luego se pueden utilizar para análisis posteriores.
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Artículo de método
Leche Colección de la rata utilizando tubos capilares y Estimación del contenido de grasa de la leche por Creamatocrit
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Resumen
Resumen
La leche, como única fuente de nutrición para el mamífero recién nacido, proporciona los nutrientes y la energía necesarios para el crecimiento y desarrollo de la descendencia. También contiene una gran cantidad de compuestos bioactivos que afectan en gran medida el desarrollo del neonato. El análisis de los componentes de la leche ayudará a dilucidar los factores clave que vinculan el metabolismo y la salud materna con el crecimiento y desarrollo de la descendencia. La rata de laboratorio representa un organismo modelo popular para los estudios maternos, y la leche de rata se puede utilizar para examinar el efecto de diversas intervenciones fisiológicas, nutricionales y farmacológicas maternas en los componentes de la leche, que luego pueden afectar la salud de la descendencia. Aquí se describe un método simple de recolección manual de leche de la rata lactante que puede ser realizado por un solo investigador, no requiere equipo especializado de vacío o succión, y proporciona suficiente leche para el análisis posterior. También se presenta un método para estimar el contenido de grasa de la leche midiendo el porcentaje de nata dentro de la muestra de leche, conocido como creamatocrito. En última instancia, estos métodos pueden utilizarse para aumentar la comprensión de la salud maternoinfantil y para dilucidar los factores maternos que intervienen en el crecimiento y el desarrollo adecuados de la descendencia.
Introducción
La leche es la única fuente de nutrición para los mamíferos recién nacidos, el suministro de energía y nutrientes para el crecimiento infantil y desarrollo 1,2. Mientras que la leche se compone principalmente de células, lípidos, y proteínas 1, también contiene una gran cantidad de compuestos bioactivos que modulan el desarrollo primeros años de vida de la descendencia incluyendo enzimas, carbohidratos, hormonas, anticuerpos, factores de crecimiento, citoquinas, exosomas, microvesículas, y pequeños RNAs tales como microARN 1,2. El papel fundamental de la leche materna en el establecimiento de inmune y la salud intestinal 3 ....
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Protocolo
Este protocolo fue aprobado por la Universidad de Comité de Cuidado de Animales de Calgary y conforme a la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio.
1. Separe la presa de Offspring
- Separar la presa de su descendencia por un mínimo de 5 minutos antes de ordeño 12.
NOTA: La presa puede ser ordeñada hasta 5-6 horas después de la separación 1,6,13, sin embargo períodos de separación de más de 4 horas pueden alterar la composición de la leche 14. Mientras que el tiempo de separación no parece afectar el volumen de recogida de leche 12, se aconseja que un tiempo....
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Resultados
La leche se recogió como se describe en el destete de las presas Wistar (aproximadamente 22 semanas de edad, pesando 350 a 400 g) que consumió un control (AIN-93G, n = 5), alta en proteínas (40% de caseína p / p, n = 5) o alto contenido de fibra prebiótica (21,6% peso / peso, 1: 1 relación de oligofructosa e inulina, n = 4) dieta a lo largo embarazo y la lactancia. La dosis de oxitocina fue 2 IU. La leche se recogió usando tubos capilares, y un tubo se centrifugó utilizando una centrifugadora de hematocrito para determi.......
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Discusión
Las investigaciones sobre los componentes de la leche materna han aumentado a medida que aumenta el interés en la investigación del desarrollo de la vida temprana. Como única fuente de nutrición durante el período neonatal, los compuestos bioactivos de la leche son esenciales para el crecimiento y desarrollo ideales, especialmente en el contexto de la salud intestinal e inmunológica3. El método presentado aquí es un método simple y no invasivo para recolectar leche de la rata lactante en cantidades suficientes.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses a revelar. Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con protocolos CCAC aprobado.
Agradecimientos
Estos trabajos fueron apoyados a través de becas de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá (RGPIN 238382 a 2.011) y los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (MOP115076). Heather Paul recibió el apoyo de una Beca de Postgrado de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá y una beca Health Solutions Alberta innova. Megan Hallam fue apoyado por una de Ciencias Naturales e Ingeniería del Consejo de Investigación de Postgrado de Becas, una beca de Frederick Banting y Charles Best Graduate Canadá, y el Premio a la Infancia de Alberta Instituto de Investigación del Hospital de Capacitación en Genética, Desarrollo Infantil y Sa....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Equipment - Ordeño | |||
| ml Jeringas | BD-Canada | 309602 | |
| 25 G | BD-Canada 305122 | ||
| Agujas 18 G | BD-Canada | 305196 | |
| 50 μ l Microdispensador de tubos capilares | Fisher Scientific | 21-169D | |
| Oxitocina (20 unidades USP/ml) | Bimeda-MTC | 1OXY015 | |
| PPC Vet Anestésico de inhalación de isoflurano, 250 ml | Fresenius Kabi | M60302 | Utilizado por encargo de un veterinario |
| Almohadilla de preparación con alcohol estéril | Dukal | 853 | |
| Almohadilla de banco absorbente | VWR | 82020-845 | |
| Maxi-Therm Manta de hiper/hipotermia | Cincinnati Sub-Zero | 274 | |
| Máquina de anestesia para roedores con vaporizador | Benson Medical Industries Inc. | Sujeto a las necesidades individuales del laboratorio | |
| Mascarillas para animales | Benson Medical Industries Inc. | 50100/50102 | |
| Tubos de microcentrífuga | Axygen | MCT-060-C | |
| Recortadora | |||
| Equipo - Creamatocrit | |||
| StatSpin SafeCrit Tubos de microhematocrito de plástico (sin tratar) | Fisher Scientific | 22-274-914 | |
| Critoseal Bandeja de sellador de tubos capilares | VWR | 470161-478 | |
| Centrífuga de microhematocrito StatSpin CritSpin | Beckman Coulter, Inc | X00-004999-001 |
Referencias
- Izumi, H., Kosaka, N., Shimizu, T., Sekine, K., Ochiya, T., Takase, M. Time-dependent expression profiles of microRNAs and mRNAs in rat milk whey. PLoS ONE. 9 (2), e0088843(2014).
- Hsieh, C. C., Hernández-Ledesma, B., Fernández-Tomé, S., Weinborn, V., Barile, D., de Moura Bell, J. M.
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Reimpresiones y permisos
