Se presenta la caracterización de complejos formados en diferentes proporciones relativas de mercurio(II) a tetrapéptidos dicysteinil mediante espectrometría de masas orbitrap de ionización por electrospray.
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Artículo de método
Un estudio de la complejación de Mercurio (II) con Dicysteinyl tetrapéptidos por electrospray espectrometría de masas de ionización
En este artículo
Resumen
Resumen
En este estudio evaluamos un método para la caracterización de complejos, formados en diferentes proporciones relativas de mercurio(II) a tetrapéptido dicysteinilo, por espectrometría de masas orbitrap de ionización por electrospray. Esta estrategia se basa en la caracterización exitosa previa de complejos de mercurio-dicitensteinilo que involucran tripéptidos mediante la utilización de espectrometría de masas, entre otras técnicas. El cloruro de mercurio (II) y un tetrapéptido dicysteinil se incubaron en un medio tamponado desgasificado en proporciones estequiométricas variables. Los complejos formados se analizaron posteriormente en un espectrómetro de masas por electrospray que consistía en un analizador de masas lineal híbrido de iones y orbis trampa. Los espectros de espectrometría de masas de ionización por electrospray (ESI-MS) se adquirieron en modo positivo y los picos observados se analizaron para determinar los distintos patrones de distribución isotópica del mercurio y los picos monoisotópicos asociados. Este trabajo demuestra que se puede determinar una estequiometría precisa del mercurio y el péptido en los complejos formados bajo condiciones de ionización por electrospray especificadas mediante el uso de ESI MS de alta resolución basada en distintos patrones de distribución isotópica de mercurio.
Introducción
Los fármacos clínicos actuales prescritos para la terapia de quelación de la intoxicación por mercurio1 contienen grupo(s) tiol(es), que es/son responsables de unir y secuestrar los iones de mercurio2,3. Sin embargo, los estudios han demostrado que estos pequeños compuestos tioles [ácido dimercaptosuccínico (DMSA) y ácido dimercaptopropano-sulfónico (DMPS)] no son óptimos para la terapia de quelacióndel mercurio 4-6. Por lo tanto, es necesario comprender la asociación y las tendencias de formación compleja del mercurio con los tioles para mejorar el diseño racional de fármacos de compuestos tioles para la quelación del mercurio. Rec....
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Protocolo
Nota: Por favor consulte a todas las hojas de datos de seguridad de materiales pertinentes (MSDS) antes de usar. Cloruro de mercurio es una sustancia química tóxica. Equipo de protección personal (guantes, gafas de seguridad y bata de laboratorio) deben ser usados cuando entregarlo y todas las soluciones asociadas. Deshágase de las soluciones en botellas de residuos químicos etiquetados claramente designadas para los metales pesados.
1. Preparación de 5 mM desgasificado formiato de amonio Buffer, pH 7,5
- Disolver 0,1576 g de tampón de formiato de amonio en 450 ml de agua de grado HPLC. Ajustar el pH de la solución anterior con....
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Resultados
Se realizó un estudio para caracterizar la posible composición compleja de mercurio de péptido durante dos tetrapéptidos, CGGC y PECO (Figura 1) por espectrometría de masas ESI. Los complejos de mercurio (II) con CGGC o PECO se investigaron mediante la reacción de las mezclas de mercurio (II) y soluciones de péptidos en tres proporciones diferentes molares: 1: 0,5, 1: 1 y 1: 2 (mercurio (II): péptido) . La concentración de mercurio (II) fue de 7,5 x 10 -6
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Discusión
El tetrapéptido dicysteinyl hidrófobo CGGC (C 10 H 18 N 4 O 5 S 2; MW = 338) (Figura 1), forma complejos con mercurio (II) como se muestra en la Figura 2 y la Tabla 1 Además, forma dímeros peptídicos y trímeros. incremental a medida que la cantidad de péptido aumentos en la mezcla de reacción. Como se muestra por los valores de m / z de los dímeros asociados [(2M + .......
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Divulgaciones
No hay divulgación para el trabajo informado.
Agradecimientos
MN-S reconoce el apoyo de la National Science Foundation, RUI conceder CHE 1011859. Los autores agradecen el Fondo Tríada Espectrometría de Masas de la Universidad de Carolina del Norte en Greensboro para el uso del espectrómetro de masas Thermo Fisher Scientific LTQ Orbitrap XL. Los autores agradecen a Daniel Todd, Vincent Sica y Brandie Erhmann en la Universidad de Carolina del Norte en Greensboro para sugerencias y comentarios útiles con respecto a este trabajo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cloruro de mercurio (II) | Sigma-Aldrich | 429724 | Altamente tóxico |
| Formiato de amonio | Sigma-Aldrich | 516961 | |
| Ácido fórmico | Sigma-Aldrich | F0507 | |
| Hidróxido de amonio | Fisher | A512-P500 | |
| HPLC agua | Fisher | W5-4 | |
| HPLC Acetonitrilo | Fisher | BP2405-1 | |
| HPLC Metanol | Fisher | A452-4 |
Referencias
- Clifton, J. C. Mercury exposure and public health. Pediatr. Clin. N. Am. 54, 237-269 (2007).
- Andersen, O. Principles and Recent Developments in Chelation Treatment of Metal Intoxication. Chem. Rev. 99, 2683-2710 (1999).
- Aposhian, H. V., Maiorino, R. M., Gonzal....
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Reimpresiones y permisos
