Aislamiento de CD 90+ fibroblastos / miofibroblastos de congelados Humanos gastrointestinales Especímenes

Paul Johnson; Ellen J. Beswick; Celia Chao; Don W. Powell; Mark R. Hellmich; Iryna V. Pinchuk

doi:10.3791/53691

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Artículo de método

Aislamiento de CD 90+ fibroblastos / miofibroblastos de congelados Humanos gastrointestinales Especímenes

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DOI:

10.3791/53691

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31 de enero de 2016

Paul Johnson¹ , Ellen J. Beswick³ , Celia Chao¹ , Don W. Powell² , Mark R. Hellmich¹ , Iryna V. Pinchuk²

¹Surgery, University of Texas Medical Branch, ²Internal Medicine, University of Texas Medical Branch, ³Molecular Genetics and Microbiology, University of New Mexico

En este artículo

Resumen

Aquí, se presenta un protocolo para aislar y establecer cultivos primarios de fibroblastos/miofibroblastos (MF) a partir de células gástricas, del intestino delgado y de colon congeladas productoras de tejido con un fenotipo MF. Estas células expresan CD90, α-SMA y vimentina. Los MF se pueden utilizar para una variedad de ensayos funcionales, incluida la actividad enzimática y la producción de citocinas.

Resumen

Fibroblastos / miofibroblastos (MFS) han ido ganando cada vez más atención por su papel en la patogénesis y sus contribuciones a tanto la cicatrización de heridas y la promoción del microambiente tumoral. Si bien en la actualidad hay muchas técnicas para el aislamiento de FMs de (GI) tejidos gastrointestinales, este protocolo introduce un elemento novedoso de aislamiento de estas células del estroma de tejido congelado. Congelar las muestras de tejido GI no sólo permite al investigador para adquirir muestras de colaboradores en todo el mundo, los biobancos y proveedores comerciales, sino que también permite el procesamiento retardado de muestras frescas. El protocolo descrito producirá consistentemente células fusiformes característicos con el fenotipo MF que expresan los marcadores CD90, α-SMA y vimentina. A medida que estas células se derivan de muestras de los pacientes, el uso de células primarias también confiere el beneficio de MFs que imitan estrechamente a partir de los estados-a saber, la enfermedad del cáncer y enfermedades inflamatorias del intestino. Esta técnica tiene la abejan validado en gástrico, intestino delgado, colon y MF generación cultivo primario. Culturas MF primarios se pueden utilizar en una amplia gama de experimentos sobre un número de pasaje y su pureza evaluados tanto por inmunocitoquímica y análisis de citometría de flujo.

Introducción

Los miofibroblastos / fibroblastos (MFS) representan una abundante población de células en el tracto gastrointestinal (GI) mucosa. Estas células estromales se encuentran justo por debajo del epitelio y forman una red interconectada dentro de la lámina propia de la mucosa en el intestino. MFs no sólo sean responsables de la deposición de la matriz extracelular, pero a través de la regulación paracrina puede influir en el transporte de electrolitos, restitución, y la función de barrera del epitelio adyacente ^{1, 2.} Además, MFs han demostrado que desempeñan un papel clave en la inflamación y el tejido remodelación de ^{3, 4.} Los miofibroblastos son un....