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Artículo de método

Determinación de la supervivencia en el tiempo

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DOI:

10.3791/54126

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22 de julio de 2016

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Autores correspondientes: Gen Kaneko <gkaneko1@icloud.com>

En este artículo

Resumen

Los rotíferos son zooplancton microscópico utilizados como modelos en estudios ecotoxicológicos y de envejecimiento. Aquí proporcionamos un protocolo para la medición potente y reproducible del tiempo de supervivencia en rotíferos de Brachionus. La sincronización de las condiciones de cultivo a lo largo de varias generaciones es de particular importancia porque la condición materna afecta la historia de vida de las crías.

Resumen

Los rotíferos son zooplancton cosmopolita microscópico utilizado como modelos en estudios ecotoxicológicos y de envejecimiento debido a sus diversas ventajas, como su corta vida útil, facilidad de cultivo y partenogénesis que permite el cultivo clonal. Sin embargo, se requiere precaución al medir su tiempo de supervivencia, ya que se ve afectado por la edad materna y las condiciones de alimentación materna. Aquí proporcionamos un protocolo para una medición potente y reproducible del tiempo de supervivencia en Brachionus rotifers después de una cuidadosa sincronización de las condiciones de cultivo a lo largo de varias generaciones. Empíricamente, una mala sincronización da lugar a una mortalidad precoz y a una disminución gradual de la tasa de supervivencia, lo que da lugar a un poder estadístico débil. De hecho, en tales condiciones, la restricción calórica (RC) no logró prolongar significativamente la vida útil de B. plicatilis, aunque la longevidad inducida por la RC se ha demostrado con muestras de rotíferos bien sincronizadas en estudios pasados y presentes. Este protocolo es probablemente útil para otros modelos de invertebrados, incluyendo la mosca de la fruta Drosophila melanogaster y el nematodo Caenorhabditis elegans, ya que también se han reportado efectos sobre la edad materna en estas especies.

Introducción

Los rotíferos son microscópicos zooplancton cosmopolita (<1 mm) que constituyen el filo rotíferos 1. Tienen un plan simple cuerpo compuesto de aproximadamente 1.000 células somáticas, así como un aparato ciliar rueda-como característica llamada la corona, que se utiliza para la locomoción y la alimentación. La mayoría de los rotíferos pertenecen a clases monogononta o Bdelloidea, que contienen alrededor de 1.600 y 500 especies, respectivamente 2. Rotíferos monogononta generalmente tienen dos fases de reproducción sexual y asexual (partenogénesis cíclica), mientras que los rotíferos bdelloid reproducen por partenogénesis obligatoria 3.....

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Protocolo

1. Preparación de Medios

Nota: Use la mitad diluida Brujewicz agua de mar artificial de la salinidad de 16,5 partes por mil (PSU). Otros aguas marinas artificiales también se utilizan con frecuencia para cultivo de rotíferos Brachionus 25,26.

  1. Añadir NaCl 454 mM, 26 mM MgCl 2, 27 mM MgSO4, se mM KCl 10, y 10 mM CaCl 2 a 4,5 L de agua destilada (volumen final será de 5 L). Como alternativa, utilizar agua de dilución desionizada en lugar de agua destilada. Añadir CaCl 2 después de disolver todas las otras sales.
  2. Preparar la solución de bicarbonato sódico 0,4....

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Resultados


La Figura 1 muestra las curvas de supervivencia de las poblaciones representativas mal sincronizados (de un total de dos repeticiones). En este experimento, los rotíferos fueron alimentados todos los días, ya sea [ad libitum grupo (AL)] o cada dos días (si el grupo). La mediana de supervivencia fue de 13 y 18 días en el AL y si los grupos, respectivamente. Aunque es bien conocido que si se extiende la vida útil de la rotíferos, este experimento no pudo det.......

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Discusión

El protocolo actual describe un método para medir el tiempo de supervivencia en rotíferos Brachionus. El paso crítico es la sincronización de las condiciones de rotíferos lo largo de varias generaciones. Cuando rotíferos experimentales están bien sincronizados, una curva de supervivencia de tipo I típico se observa con muy poca mortalidad temprana como se informó en varios estudios anteriores 18,24,37,38. Las desviaciones estándar de su tiempo de supervivencia, por lo tanto se hacen más pequeños en c.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Estamos muy agradecidos a George Jarvis, Martha Bock, y Bette Hecox-Lea, Laboratorio de Biología Marina, por su ayuda en la filmación.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cloruro de sodioWako190-13921
Cloruro de magnesioWako136-03995
Sulfato de magnesioWako131-00427
Cloruro de potasioWako168-22111
Cloruro de calcioWako035-00455
Bicarbonato de sodioWako199-05985
Bromuro de sodioWako190-01515
Filtro de membrana (0.45 µ PlacaHAWP04700Millipore
, 6 pocillos, sin tratarThomas Scientific6902D01de fondo plano
, 48 pocillos, sin tratarThomas Scientific6902D07Tetraselmis de fondo plano
, LivingCarolina Biological Supply Company152610
PRISM 6GraphPad Softwareversión 6.0d
de cultivo de Placa de cultivo

Referencias

  1. Wallace, R. L., Snell, T. W., Ricci, C., Nogrady, T. Rotifera Vol.1: Biology, ecology and systematics. , 2nd edn, SPB Academic Publishing. (2006).
  2. Segers, H. Annotated checklist of the rotifers (Phylum Rotifera), with notes on nomenclature, taxonomy and distribution. , Magnoli....

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Reimpresiones y permisos

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