Este protocolo describe la medición simultánea del electrorretinograma y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas.
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Artículo de método
Grabación simultánea de Electrorretinografía y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas
En este artículo
Resumen
Resumen
El electrorretinograma (ERG) y el potencial evocado visual (VEP) se utilizan comúnmente para evaluar la integridad de la vía visual. El ERG mide las respuestas eléctricas de la retina a la estimulación lumínica, mientras que el VEP mide la integridad funcional correspondiente de las vías visuales desde la retina hasta la corteza visual primaria después del mismo evento lumínico. La forma de onda ERG se puede descomponer en componentes que reflejan las respuestas de diferentes clases de células neuronales y gliales de la retina. Los primeros componentes de la forma de onda VEP representan la integridad del nervio óptico y los centros corticales superiores. Estas grabaciones se pueden realizar de forma aislada o conjunta, dependiendo de la aplicación. La metodología descrita en este trabajo permite la evaluación simultánea de la electrofisiología visual evocada de la retina y la cortical desde ambos ojos y ambos hemisferios. Esta es una forma útil de evaluar de manera más integral la función de la retina y los efectos previos que los cambios en la función de la retina pueden tener en la función cortical evocada visual.
Introducción
La medición de la electrorretinograma (ERG) y de potencial evocado visual (VEP) proporcionar evaluaciones cuantitativas útiles de la integridad de la vía visual. El ERG mide las respuestas eléctricas de la retina a la estimulación de luz, mientras que el VEP mide la integridad funcional correspondiente de las vías visuales de la retina a la corteza visual primaria siguiendo el mismo evento de la luz. Este manuscrito describe un protocolo para el registro y análisis de las respuestas de ERG y PEV en un modelo de laboratorio de uso común, la rata.
El ERG proporciona un índice de la integridad funcional de una serie de clases de células reti....
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Protocolo
Todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo de acuerdo con el Código Australiano de Prácticas para el Cuidado y Uso de animales con fines científicos, establecido por el Consejo de Investigación Médica y Salud Nacional de Australia. aclaramiento de la ética se obtuvo de la Universidad de Melbourne, Facultad de Ciencias, Comité de Ética Animal (número de autorización 0.911.322,1).
1. Pre-implantación de electrodos VEP crónica
Nota: Si las señales simultáneas ERG y PEV se deben recoger los animales deben ser implantados quirúrgicamente con VEP Electrodos de al menos 1 semana antes de la señal de colección.
- Esterilizar el banco ....
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Resultados
El ERG una onda (> -1.38 registro cd.sm -2), b-ondas (> - 4,99 log cd.sm -2) RTS (<- 4,99 log cd.sm -2) y los VEP (> - 0,52 cd.sm log -2) se registraron simultáneamente (Figura 1 y 3). En destellos muy tenue, un RTS positivo (PSTR) es visto en aproximadamente 110 milisegundos después del flash, y un STR negativo (NSTR) a aproximadamente 220 mseg (Figuras 1 y 2). Un ERG con una gran onda b, picos e.......
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Discusión
El ERG y VEP son medidas objetivas de la función visual de la retina y la corteza, respectivamente. La ventaja de la grabación simultánea es que una visión más completa de toda la vía visual se le concede. En concreto, la información complementaria a partir de su evaluación concurrente podría proporcionar una definición más clara del lugar de la lesión en la vía visual (por ejemplo, para los trastornos con la superposición de ERG sin embargo distinto VEP manifestaciones 18, cuando la neuropatía óptic.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen divulgaciones relevantes para este trabajo.
Agradecimientos
La financiación de este proyecto fue proporcionada por el Consejo Nacional de Investigación Médica y de Salud (NHMRC) 1046203 (BVB, AJV) y la Beca del Instituto de Neurociencia de Melbourne (CTN).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Pinza de cocodrilo | de la marca genérica | HM3022 | Clip de acero inoxidable de 26 mm para conectar electrodos de tornillo VEP a cables |
| Bioamplificador | ADInstrumentos | ML 135 | Para amplificar señales ERG y VEP |
| Carboximetilcelulosa sódica 1.0% | Allergan | CAS 0009000-11-7 | Fluido viscoso para mejorar la calidad de la señal del electrodo ERG activo |
| Carprofeno 0.5% | Pfizer Animal Health Group | CAS 53716-49-7 | Nombre patentado: Rimadyl inyectable (50 mg/ml). Para la analgesia postoperatoria, diluida al 0,5% (5 mg/ml) en solución salina normal |
| Clorhexidina al 0,5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Para la desinfección de instrumentos quirúrgicos |
| Baño de agua circulante | Lauda-Kö nigshoffen | MGW Lauda | Para mantener la temperatura corporal del animal anestesiado durante la cirugía y los registros electrofisiológicos |
| Amalgama dental | DeguDent GmbH | 64020024 | Para encerrar el conjunto electrodo-cráneo para hacerlo más robusto |
| Fresa dental | Storz Instruments, Bausch y Lomb | #E0824A | Un cabezal de perforación en miniatura de ~ 0,7 mm de diámetro para hacer un pequeño orificio en el cráneo sobre cada hemisferio para implantar tornillos VEP |
| Taladro | Bosch | Dremel serie 300 | Un taladro automático para trepanar |
| Electrodo de plomo | Grass Telefactor | F-E2-30 Cables de | platino para conectar electrodos de alambre de plata al amplificador |
| Jaula de Faraday | hecha | a medida Garantiza la resistencia a la luz para mantener la adaptación a la oscuridad. Incluye la configuración de Ganzfeld para mejorar la relación señal-ruido | |
| Hisopos de gasa | Multigate Medical Products Pty Ltd | 57-100B | Para secar la incisión quirúrgica y la superficie expuesta del cráneo durante la cirugía |
| Esfera integradora de Ganzfeld Photometric | Solutions International | Estimulador de luz diseñado a medida: 36 mm de diámetro, tamaño de apertura de 13 cm | |
| Velcro | VELCRO Australia Pty Ltd | Marca VELCRO Reutilizable Envoltura | Cierre de velcro para asegurar los electrodos y el animal en la plataforma de grabación |
| Isoflurano 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Nombre patentado: Isoflo(TM) Anestésico por inhalación. Anestésico inhalatorio de grado farmacéutico mezclado con gas oxígeno para cirugía de implante de electrodos VEP |
| Ketamina | Troy Laboratories | Ilium Ketamil | Nombre patentado: Ketamil Injection, Marca: Ilium. Anestésico de grado farmacéutico para el registro electrofisiológico |
| Luxeon LEDs | Phillips Lighting Co. | Para la estimulación lumínica veinte LEDs de 5 W y uno de 1 W. | |
| Micromanipulador | Harvard Apparatus | BS4 50-2625 | Sostiene el electrodo activo ERG durante las grabaciones |
| Electrodo de aguja | Grass Telefactor | F-E2-30 | Se inserta por vía subcutánea en la cola para que sirva como electrodo de tierra tanto para el ERG como para el VEP |
| Fenilefrina 2.5% minims | Bausch and Lomb | CAS 61-76-7 | Instilado con tropicamida para lograr la máxima dilatación para el registro de ERG |
| Povidona yodada 10% | Sanofi-Aventis | CAS 25655-41-8 | Nombre patentado: Betadine, Antiséptico para preparar la piel afeitada para la cirugía 10%, 500 ml |
| Sistema de adquisición de datos Powerlab | ADInstruments | ML 785 | Controla los LED |
| Proxymetacaína 0.5% | Alcon Laboratories& nbsp; | CAS 5875-06-9 | Para la anestesia corneal durante los registros ERG |
| Solución salina | Gelflex | No inyectable, para galvanoplastia electrodos de alambre de plata | |
| Alcance Software | ADInstrumentos | versión 3.7.6 | Activa simultáneamente el estímulo a través del sistema Powerlab y recopila datos |
| Plata (alambre redondo fino) | A& E metal | 0,3 mm | Se utiliza para fabricar electrodos ERG activos e inactivos, y el electrodo VEP inactivo |
| Tornillos de acero inoxidable | MicroFasterners | 0,7 mm de diámetro de eje, 3 mm de longitud para ser implantado sobre la corteza visual primaria y servir como electrodos VEP activos | |
| El atlas del cerebro de rata de Watson de 2007 coordina la | |||
| cuchilla quirúrgica | Swann-Morton Ltd. | 0206 | Para incidir el área de la piel que se superpone a la corteza visual primaria para implantar los electrodos VEP |
| Sutura | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | 3-0 sutura trenzada de seda no absorbible, para la retracción de la piel durante la cirugía de implantación de electrodos VEP | |
| Pomada ocular Tobramicina 0.3% | Alcon Laboratories | CAS 32986-56-4 | Nombre propio: Tobrex. Pomada antibiótica profiláctica aplicada alrededor de la herida cutánea después de la cirugía |
| Tropicamida 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 1508-75-4 | Nombre patentado: 0,5% Gotas oftálmicas de midriacil, instiladas para lograr midriasis para el registro de ERG |
| Xilacina | Troy Laboratories | Ilium Xylazil-100 | Anestésico de grado farmacéutico para registro electrofisiológico |
| Punta de pipeta | Eppendorf Pty Ltd | 0030 073.169 | Eppendorf epTIPS 100 - 5.000 ml, para electrodos a medida |
| Microsoft Office Excel | Microsoft | versión 2010 | software de hoja de cálculo para el análisis de datos |
| Lethabarb Euthanazia Injection | Virbac (Australia) Pty Ltd | LETHA450 | 325 mg/ml pentobarbital sodio para la eutanazia rápida |
Referencias
- Nguyen, C. T. O., Vingrys, A. J., Bui, B. V. Dietary omega-3 fatty acids and ganglion cell function. Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3586-3594 (2008).
- Weymouth, A. E., Vingrys, A. J. Rodent electroretinography: methods for extraction and interpreta....
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Reimpresiones y permisos
