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Artículo de método

No restricción EEG radiotelemetría: epidural y Deep intracerebral estereotáxica colocación de electrodos EEG

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DOI:

10.3791/54216

25 de junio de 2016

En este artículo

Resumen

No de restricción EEG radiotelemetría es un enfoque metodológico valioso para grabar electroencefalogramas a largo plazo in vivo de los roedores con libertad de movimientos. Este protocolo detallado describe epidural estereotáxica y colocación de los electrodos intracerebral profunda en diferentes regiones del cerebro con el fin de obtener registros fiables de la ritmicidad del SNC y las etapas de comportamiento relacionadas con el SNC.

Resumen

Implantable radio telemetría EEG es de importancia central en la caracterización neurológica de los modelos de ratones transgénicos de enfermedades neuropsiquiátricas y neurodegenerativas, así como las epilepsias. Esta poderosa técnica no sólo proporcionan información valiosa sobre los mecanismos fisiopatológicos subyacentes, es decir., La etiopatogenia de las enfermedades relacionadas con el SNC, sino que también facilita el desarrollo de nuevos traslacional, es decir., Enfoques terapéuticos. Mientras que las técnicas de la competencia que hacen uso de sistemas de grabación utilizados en las chaquetas o los sistemas atados sufren de su alejamiento no fisiológica de carácter semi-restricción, los registros de EEG radiotelemétrico superar estos inconvenientes. Técnicamente, la radiotelemetría implantable EEG permite la medición precisa y altamente sensible de EEG epidurales y profundo, intracerebrales en diversas condiciones fisiológicas y fisiopatológicas. En primer lugar, se presenta un protocolo detallado de una recta hacia adelante, con éxito,técnica rápida y eficaz para las grabaciones epidural (superficie) de EEG resultantes en electrocorticograms de alta calidad. En segundo lugar, demostramos cómo implantar electrodos de EEG, intracerebrales profundos, por ejemplo, en el hipocampo (electrohippocampogram). Para ambos enfoques, se utiliza un sistema de electrodos 3D implantación estereotáxica computarizado. El transmisor de radiofrecuencia sí mismo se implanta en una bolsa subcutánea en ratones y ratas. Especial atención también tiene que ser pagado a la pre-, peri- y el tratamiento postoperatorio de los animales de experimentación. La preparación preoperatoria de los ratones y las ratas, anestesia adecuadas, así como la gestión del tratamiento del dolor postoperatorio y se describen en detalle.

Introducción

Radiotelemetría es un enfoque metodológico más valioso para medir una variedad de parámetros de comportamiento y fisiológicos en animales, sin restricciones conscientes de diferentes tamaños, en particular en el contexto de EEG, ECG, EMG, la presión arterial, la temperatura corporal central o mediciones de la actividad 1-7. En teoría, cualquier especie se pueden analizar usando radiotelemetría implantable EEG de los roedores de laboratorio, tales como ratones y ratas a gatos, perros, cerdos y primates 3,8. Incluso los peces, reptiles y anfibios están sujetas a investigación radiotelemétrico 9. Durante las dos últimas décadas, implanta....

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Protocolo

Declaración de Ética: Toda la experimentación animal se llevó a cabo de acuerdo con las directrices del Consejo Local e institucional de los Animales (Universidad de Bonn, BfArM, LANUV, Alemania). Además, todos los experimentos con animales se llevó a cabo de conformidad con la legislación superior, por ejemplo., La Directiva del Consejo Comunidades Europeas de 24 de noviembre de 1986 (86/609 / CEE) o individuo legislación regional o nacional. Se hace un esfuerzo específico para reducir al mínimo el número de animales utilizados y su sufrimiento.

1. Los animales experimentales

  1. La selección de los animales de experiment....

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Resultados

En esta sección se ilustra ejemplos obtenidos de los registros de EEG, intracerebrales superficial y profunda. Inicialmente debe tenerse en cuenta que las grabaciones de referencia en condiciones fisiológicas son obligatorios antes de grabaciones posteriores siguientes, por ejemplo, el tratamiento farmacológico. Tales mediciones de referencia pueden proporcionar información valiosa acerca de la interdependencia funcional de ritmicidad cerebro con diferentes estados de comportami.......

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Discusión

Implantable radiotelemetría EEG es de importancia fundamental, ya que es una técnica no de restricción que permite animales de experimentación para llevar a cabo su completo repertorio de comportamiento 1,3. Esto es de gran interés como el enfoque telemétrico permite no sólo los registros de EEG espontáneo sino también grabaciones bajo tareas cognitivas y configuraciones de análisis circadianos, tales como T-laberinto, laberinto radial, laberinto de agua, las tareas de la privación del sueño o cuando el regis.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores desean agradecer a la Dra. Christina Ginkel (Centro Alemán de Enfermedades Neurodegenerativas, DZNE), a la Dra. Michaela Möhring (DZNE) y al Dr. Robert Stark (DZNE) por su asistencia en la cría de animales y el cuidado de la salud animal. Este trabajo fue apoyado financieramente por el Instituto Federal de Medicamentos y Dispositivos Médicos (Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM) Bonn, Alemania.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Carprofeno (Rimadyl VET - InjektionA2:D43slö sung)PfizerPZN 011020820 ml
Microscopio binocular quirúrgico de aumento Zeiss Stemi 20000000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000
Bulldog serrefineF.S.T.18051-28Jaulas de 28 mm
(Macrolon)Techniplast1264C, 1290D Fuente de
luz fríaSchott KL2500 LCD9.705  202pedidos en Th.Geyer
Aplicadores de punta de algodón (estériles)Carl Roth EH12.1
Dexpantenol (Bepanthen Wund- und Heilsalbe)BayerPZN: 1578818
Cortinas (estériles)HartmannPZN 0366787
70% etanolCarl Roth 9065.5
Solución de peróxido de hidrógeno al 0,3%/3%Sigma95321Solución madre al 30% 
Guantes (estériles)Unigloves1570
Cemento de ionómero de vidrio dentalKentDental /NORDENTA957 321
Solución de glutaraldehído al 2%SigmaG6257
Graefe Pinzas curvas, dentadasF.S.T.11052-10
Halsey Micro Portaagujas-Carburo de tungstenoF.S.T.12500-1212,5 cm
Esterilizador de instrumental quirúrgico a base de calorF.S.T.18000-50
Almohadilla térmicaAEG HK5510520010pedido en myToolStore
Taladro dental de alta velocidadAdeorSI-1708
Tijeras de iris extra finas;F.S.T.14058-099 cm
Sistema narcótico por inhalación (isoflurano)Harvard Apparatus GmbH34-1352, 10-1340, 34-0422, 34-1041, 34-0401, 34-1067, 72-3044, 34-0426, 34-0387, 34-0415, 69-0230
IsofluranoBaxter 250 mlPZN 6497131
KetaminaPfizerPZN 07506004
Ringer Lactato s solución (estéril)BraunL7502
Lexar-Baby Tijeras-recta, 10 cmF.S.T.14078-1010 cm
Solución de tinción NisslArmin BaackBAA31712159
Material de sutura no absorbible 5-0/6-0 (estéril)SABANA (Sabafil)N-63123-45
Covidien (Sofsilk)S1172, S1173
Halsey PortaagujasF.S.T.12001-1313 cm
Almohadillas (estériles)ReWa Krankenhausbedarf2003/01
0,9% solución salina (NaCl, estéril)BraunPZN:8609255
Hojas de bisturí con mango (estéril)propraxis2029/10
Pinza de patrón estándarF.S.T.11000-12, 11000-1412 cm y 14,5 cm de longitud
Electrodos de acero y tungsteno recubiertos de parileno FHC Inc., Estados Unidos)UEWLGESEANND
Marco estereotáxicoNeurostar51730Mpedido en Stoelting
(Stereo Drive-New Motorized Stereotaxic)
Cintas (estériles)BSN medical GmbH & Co. KG626225
TA10ETA-F20 DSI270-0042-001X Transmisor deradiofrecuencia 3,9 g, 
3,9 g, 1,9 ml, rango de voltaje de entrada ± 2,5 mV, ancho de banda de canal
(B) 1 - 200 Hz, 
frecuencia de muestreo nominal (f) 1.000 Hz (f = 5B)
temperatura rango de funcionamiento 34 - 41 ° C
duración garantizada de la batería 4 meses
TL11M2-F20EET DSI270-0124-001X Transmisor deradiofrecuencia 
3,9 g, 1,9 ml, rango de voltaje de entrada ± 1,25 mV, ancho de banda de canal
(B) 1 - 50 Hz, 
frecuencia de muestreo nominal (f) 250 Hz (f = 5B)
temperatura rango de funcionamiento 34 - 41 ° C
duración garantizada de la batería 1,5 meses
Pinzas de tejido- 1x2 dientes 12 cmF.S.T.11021-1212 cm
de longitud Tijeras de iris de carburo de tungstenoF.S.T.14558-1111,5 cm
Vibroslicadora 5000 MZCiencias de la microscopía electrónica 5000-005
Xilacina (Rompun)BayerPZN: 1320422

Referencias

  1. Kramer, K., et al. The use of radiotelemetry in small laboratory animals: recent advances. Contemp Top Lab Anim Sci. 40, 8-16 (2001).
  2. Kramer, K., et al. The use of telemetry to record electrocardiogram and hea....

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Etiquetas

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