Describimos aquí un protocolo reproducible para aislar el círculo del ratón de Willis.
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Artículo de método
Protocolo para el aislamiento del Círculo de Willis Ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
El círculo arterial cerebral (circulus arterioso cerebral) o círculo de Willis (vaca) es una anastomosis circulatorio que rodea el quiasma óptico y el hipotálamo que suministra sangre al cerebro y las estructuras circundantes. Se ha implicado en varios trastornos cerebrovasculares, incluyendo angiopatía cerebral amiloide (CAA) vasculopatías -asociado, aterosclerosis intracraneal y aneurismas intracraneales. Los estudios de los mecanismos moleculares que subyacen a estas enfermedades para la identificación de nuevas dianas farmacológicas para su prevención requieren modelos animales. Algunos de estos modelos puede ser transgénico, mientras que otros implican el aislamiento del cerebro-vascular, incluyendo el método CoW.The descrito aquí es adecuado para el aislamiento de vaca en cualquier linaje de ratón y tiene un potencial considerable para el cribado (expresión de genes, la producción de proteínas, proteínas modificaciones posteriores a la traducción, análisis secretoma, etc.) los estudios sobre los grandes vasos del cerebro-ratónvasculatura. También se puede utilizar para estudios ex vivo, mediante la adaptación del sistema de baño de órganos aislados desarrollado para arterias olfativas ratón.
Introducción
El círculo arterial cerebral (circulus arterioso cerebri), también conocido como el polígono de Willis (vaca), el lazo de Willisor Willis polígono) fue descrito por primera vez por Thomas Willis en 1664. Es una anastomosis circulatorio situado alrededor del quiasma óptico y el hipotálamo que pueden ser considerado como un eje central el suministro de sangre al cerebro y las estructuras circundantes. La sangre entra en esta estructura a través de la carótida interna y las arterias vertebrales y fluye fuera del círculo a través de la mitad interior y las arterias cerebrales posteriores. Cada una de estas arterias ha ramas izquierda y derecha de cada lado del círculo. E....
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Protocolo
Todos los procedimientos se realizaron de conformidad con las normas de la Comunidad Europea para el cuidado y uso de animales de laboratorio, con la aprobación del comité de ética local de la experimentación con animales (Ile de France-Paris-Comité, Autorización 4270).
1. anestesia
- Infundir una dosis letal de pentobarbital (hasta 1 mg / 10 g de peso corporal) (aguja de calibre 27 y una jeringa de 1 ml) por vía intraperitoneal en ratones adultos antes de la cirugía.
La perfusión 2. Embarcación
NOTA: No hay necesidad de aplicar el ungüento veterinario para los ojos du....
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Resultados
El ratón perfundidos con PBS se mata y se aísla la vaca como se describe en la sección 3.2 del protocolo. Cuando la disección se realiza correctamente, la vaca debe salir en una sola pieza y debe ser ligeramente transparente debido a la ausencia de sangre residual en la vasculatura.
Figura 2: La vaca del ratón después del ais.......
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Discusión
Se describe aquí un protocolo reproducible para el aislamiento del círculo de Willis. Los trastornos cerebrovasculares más comunes que implican el CdT son vasculopatías CAA-asociado, aterosclerosis intracraneal y aneurisma intracraneal, todos los cuales afectan a las paredes de los vasos arteriales. Los factores de riesgo son bien conocidos, pero la patogénesis molecular de estos trastornos cerebrales sigue siendo poco conocida y los marcadores biológicos específicos para predecir su ocurrencia son insuficientes. Existe.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Universidad de París VI y una donación de Pierre Fabre Innovación.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Pinzas | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Tijeras de iris finas endurecidas | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Tijeras - Rectas / Afiladas / Afiladas 16,5 cm | Herramientas de Ciencias Finas | 14002-16 | |
| Pinzas de #7b Dumont | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Microscopio estereoscópico con zoom | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Superficie 60mm Placa de cultivo Corning | #3295 | ||
| Bomba peristáltica - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
Referencias
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B.
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Reimpresiones y permisos
