La detección y el aislamiento de especies de Vibrio clínicamente relevantes requieren medios de cultivo selectivos y diferenciales. Este estudio evaluó la capacidad de un nuevo medio cromogénico para detectar e identificar V. parahaemolyticus y otras especies relacionadas. Se encontró que el nuevo medio tenía mejor sensibilidad y especificidad que el medio convencional.
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Artículo de método
Desarrollo de una más sensible y específica cromogénico medio de agar para la detección de
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Resumen
Resumen
Infecciones transmitidas por los alimentos en los EE.UU. causada por especies de Vibrio han mostrado una tendencia al alza. En el género Vibrio, V. parahaemolyticus es responsable de la mayoría de las infecciones -asociado Vibrio. Por lo tanto, la diferenciación precisa entre Vibrio spp. y la detección de V. parahaemolyticus es de vital importancia para garantizar la seguridad de nuestro suministro de alimentos. Aunque las técnicas moleculares son cada vez más comunes, métodos de cultivo a dependiendo todavía de forma rutinaria hecho y que se consideran métodos estándar en determinadas circunstancias. Por lo tanto, un nuevo medio de agar cromogénico fue probado con el objetivo de proporcionar un mejor método para el aislamiento y la diferenciación de Vibrio spp clínicamente relevante. El protocolo compara el límite de sensibilidad, especificidad y de detección para la detección de V. parahaemolyticus entre el nuevo medio cromogénico y un medio convencional. Varios V. parahaemolyticus cepas (n = 22) de reSe han usado presentar diversos serotipos y de la fuente de origen. Ellos fueron identificados previamente por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) y los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC), y verificado aún más en nuestro laboratorio por TLH-PCR. En por lo menos cuatro ensayos separados, estas cepas se inocularon en el agar y tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa cromogénicos (TCBS) de agar, que es el medio recomendado para el cultivo de esta especie, seguido de incubación a 35-37 ° C durante 24 h -96. Tres V. parahaemolyticus cepas (13,6%) no crecieron de manera óptima en TCBS, no obstante, exhibieron colonias de color verde si había crecimiento. Dos cepas (9,1%) no dieron los esperados cian colonias en el agar cromogénico. V. no cepas parahaemolyticus (n = 32) también se probaron para determinar la especificidad de la agar cromogénico. Entre estas cepas, 31 no crecieron o exhibieron otras morfologías de colonias. La recuperación media de V. parahaemolyticus en el chromogenic agar fue de ~ 96,4% en relación con agar de soja tríptico suplementado con 2% de NaCl. En conclusión, el nuevo agar cromogénico es un medio eficaz para detectar V. parahaemolyticus y para diferenciarlo de otros vibrios.
Introducción
Como miembro del género Vibrio, V. parahaemolyticus es una bacteria Gram-negativas, no formadoras de esporas, curvada, en forma de barra. Se presenta una alta movilidad en ambos ambientes líquidos y semisólidos. La mayoría V. parahaemolyticus cepas no son patógenos para los seres humanos, sin embargo, los subtipos patógenos han causado epidemias y pandemias, por lo tanto, esta especie se considera que es un importante patógeno de transmisión alimentaria en muchos países 1,2. La incidencia de la infección por Vibrio en los EE.UU. ha mostrado una tendencia al alza desde el año 2000 3. Entre Vibrio spp.,....
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Protocolo
1. Medios y cultivo de cepas microbianas
NOTA: Use técnicas asépticas en todos los experimentos. Utilizar materiales estériles. Esterilizar todos los recipientes, herramientas y reactivos antes de su uso. Autoclave todos los materiales de desecho antes de su eliminación, ya que se consideran de riesgo biológico. temperatura del autoclave y el tiempo de combinación es ≥121 ° C x ≥15 min para todos los procedimientos siguientes.
- Para hacer ~ 1 l de agar tríptico de soja (TSA), primero agregar 1 L de agua desionizada en un matraz de 2 litros Erlenmeyer que contiene una barra de agitación magnética. Utilice un matraz que es al meno....
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Resultados
En este estudio, 54 cepas microbianas fueron ensamblados, que incluyó 22 cepas dentro de la V. especies parahaemolyticus, Vibrio otras 19 especies, y 13 especies de Vibrio no (Tabla 1). La mayoría V. cepas parahaemolyticus se recibieron ya sea de la FDA, CDC u otros departamentos de salud estatales. Representan diversos serotipos y fuentes de aislamiento. Estas cepas fueron identificadas previamente por los organismos.......
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Discusión
Este estudio se centra en el desarrollo de medios de cultivo y evaluación. Convencionalmente, el TCBS es selectivo y diferencial medio utilizado para el aislamiento y la detección de V. parahaemolyticus, V. cholerae y V. 12 vulnificus. Sin embargo, se ha informado de limitaciones para este medio, tales como la incapacidad para diferenciar V. cholerae de otras especies de Vibrio. La sacarosa y el indicador de pH son los agentes de diferenciación de TCBS. Por lo tant.......
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Divulgaciones
Algunos medios fueron proporcionados generosamente por Hardy Diagnostics, Santa María, CA. Thorsen realizó este estudio mientras estudiaba en la Universidad Estatal Politécnica de California. Actualmente es empleado de Hardy Diagnostics.
Agradecimientos
Damos las gracias a M. Channey, E. Chau, y K. Tomas por su colaboración en el proyecto. El Proyecto de abastecimiento fueron financiados parcialmente por California Polytechnic State University.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Reactivo/Equipo | |||
| ostra | |||
| generador Hardy Diagnostics | CN035A | para proporcionar una atmósfera microaerofílica; puede utilizar otras marcas | |
| Placas de agar chocolate | Hardy Diagnostics | E14 | puede utilizar otras marcas |
| Reactivos comunes de PCR (dNTPs, MgCl2, Taq Polimerasa) | Cualquiera | o utilizar perlas de PCR (Fisher Sci 46-001-014) | |
| Tubos de cultivo | Fisher Scientific | S50712 | puede utilizar otras marcas |
| Tubos Eppendorf | Fisher Scientific | S348903 | puede utilizar otras marcas |
| Gel doc | Cualquier | ||
| placa de agar HardyChrom Vibrio Hardy | Diagnostics | G319 | Este estudio evalúa este medio |
| Incubadora | Cualquier | ||
| Bucles de inoculación | Fisher Scientific | 22-363-606 | En este estudio se utilizó un tamaño de 10 microlitros NaCl |
| Fisher Scientific | BP358-212 | puede usar otras marcas | |
| Ostras | Cualquier | ||
| PBS | Fisher Scientific | R23701 | puede usar otras marcas |
| Placa de Petri | Fisher Scientific | FB0875713 | puede usar otras marcas |
| Pipeta y puntas | Cualquier | punta esterilizada | |
| Imprimadores para tlh | IDT | ||
| Cualquier | |||
| esparcidor | Fisher Scientific | 08-100-11 | Se pueden usar perlas en su lugar |
| Batidora | Stomacher Stomacher | 400 | Las muestras se homogeneizaron a 200 rpm durante 30 segundos. Se puede utilizar otro homogeneizador. |
| Bolsas de filtro estériles para licuadoras | Fisher Scientific | 01-812-5 | |
| TCBS polvo | Hardy Diagnostics | 265020 | Este estudio evalúa este medio |
| Termociclador | Cualquier | ||
| polvo TSB | Fisher Scientific | DF0370-07-5 | puede utilizar otras marcas |
| Gabinete de visualización UV | Cualquiera | Emitir luz | |
| Baño de agua | Any | | |
| Nombre | Fuentes | Número de catálogo | Comentarios |
| Especies y cepas bacterianas | |||
| Aeromonas hydrophila | ATCC | ||
| em>Candida albicans | ATCC | ||
| Campylobacter jejuni | ATCC | ||
| em>Escherichia coli | ATCC | ||
| em>Proteus mirabilis | ATCC | ||
| em>Pseudomonas aeruginosa | ATCC | ||
| em>Staphylococcus aureus | ATCC | ||
| Salmonella Choleraesuis | ATCC | ||
| em>Shigella boydii | ATCC | ||
| em>Shigella flexneri | ATCC | ||
| em>Shigella sonnei | ATCC | ||
| Vibrio alginolyticus | ATCC | ||
| V. cholerae (los serotipos incluyen O139, O1, non O1, El Tor biovars) | FDA, ATCC | ||
| em>V. damsela | FDA | ||
| em>V. fisheri | Environment | ||
| V. fluvialis | CDC | ||
| em>V. furnissii | CDC | ||
| em>V. hollisae | FDA | ||
| V. metschnikovii | ATCC | ||
| em>V. mimicus | FDA | ||
| em>V. parahaemolyticus (los serotipos incluyen O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8, etc.) | ATCC, FDA, CDC, Medio Ambiente | ||
| V. proteolyticus | FDA | ||
| V. vulnificus | FDA |
Referencias
- Yeung, P. S., Boor, K. J. Epidemiology, pathogenesis, and prevention of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections. Foodborne Pathog. Dis. 1 (2), 74-88 (2004).
- Yeung, P. S. M., Boor, K. J. Epidemiology, molecular biology, and detection of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections.
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