Este protocolo / manuscrito describe un proceso simplificado para la producción de cápsulas exina sporopollenin (segundos) de las esporas de Lycopodium clavatum y para la carga de compuestos hidrófilos en estos SEC.
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Artículo de método
Este protocolo / manuscrito describe un proceso simplificado para la producción de cápsulas exina sporopollenin (segundos) de las esporas de Lycopodium clavatum y para la carga de compuestos hidrófilos en estos SEC.
Las microcápsulas derivadas de esporas o polen de origen vegetal proporcionan una plataforma sólida para una amplia gama de aplicaciones de microencapsulación. cápsulas sporopollenin exina (segundos) se obtienen cuando las esporas o polen son procesadas a fin de eliminar el contenido sporoplasmic internos. Las microcápsulas huecas resultantes exhiben un alto grado de uniformidad micromeritic y conservan características microestructurales intrincados relacionados con las especies de plantas particulares. En este documento, se demuestra un proceso simplificado para la producción de los CEE a partir de esporas clavatum Lycopodium y para la carga de compuestos hidrófilos en estos SEC. El procedimiento actual aislamiento SEC ha sido optimizado recientemente para reducir significativamente los requisitos de transformación que se usan convencionalmente en el aislamiento de la SEC, y para asegurar la producción de microcápsulas intactas. L. Natural esporas clavatum se desgrasados con acetona, se trató con ácido fosfórico, y extensamente lavadas para eliminar sporoplasmicontenido c. Después de desgrase acetona, un solo paso de procesamiento utilizando ácido fosfórico al 85% se ha demostrado para eliminar todos los contenidos sporoplasmic. Al limitar el tiempo de procesamiento de ácido a 30 hr, es posible aislar SEC limpias y evitar SEC fracturación, que se ha demostrado que se producen con el tiempo de procesamiento prolongado. Lavado extensivo con agua, ácidos diluidos, diluir bases, y disolventes asegura que todos los residuos de material y químicas sporoplasmic se eliminan adecuadamente. La técnica de carga de vacío se utiliza para cargar una proteína modelo (albúmina de suero bovino) como un compuesto hidrófilo representante. carga de vacío proporciona una técnica sencilla para cargar varios compuestos sin la necesidad de disolventes agresivos o productos químicos indeseables que a menudo se requieren en otros protocolos de microencapsulación. Sobre la base de estos protocolos de aislamiento y de carga, SEC proporcionar un material prometedor para su uso en una amplia gama de aplicaciones de microencapsulación, como por ejemplo, terapéutica, alimentos, cosméticos, cuidado personal y prodductos.
Existe un interés significativo en cápsulas a base de plantas naturales obtenidos a partir de las esporas y el polen de las plantas para uso en aplicaciones de microencapsulación. 1-15 En la naturaleza, las esporas y el polen proporcionan protección para materiales genéticos sensibles contra condiciones ambientales duras. La estructura básica de las esporas de plantas y polen comprende típicamente una capa externa shell (exina), una capa envolvente interior (intine), y el material citoplásmica interna. La exina se compone de una químicamente robusto biopolímero 1,9,10,13,16 referido como sporopollenin y de la intine se compone principalmente de ....
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1. Extracción de sporopollenin exina Cápsulas (SEC) de L. Las esporas clavatum
Nota: El proceso de extracción SEC implica un polvo inflamable (L. Clavatum), ácidos corrosivos calientes y disolventes inflamables, por lo tanto, el equipo de protección personal adecuado (gafas, mascarilla, guantes, bata de laboratorio), la evaluación de riesgos aprobado el uso y disposición de productos químicos autorizados por el personal de laboratorio es esencial.
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Proceso de extracción optimizada para sporopollenin exina Cápsulas
El L. extracción clavatum SEC se logró mediante tres pasos principales: (1) degradación de grasa usando acetona; (2) La acidolisis usando ácido fosfórico al 85% (v / v); y (3) Amplia lavado SEC uso de disolventes. El flujo del proceso de extracción SEC simplificado se presenta en la Figura 1 A -. I Brevemente,.......
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En este trabajo, un análisis sistemático de la extracción de la SEC L. esporas clavatum se presenta y este informe muestra que es posible producir cápsulas de mayor calidad mientras que también el logro de una simplificación significativa de la pre-existente protocolo utilizado comúnmente. 11 En contraste con el protocolo existente que requiere una alta temperatura del proceso (180 ° C) y una larga duración del proceso (7 días), 11 la corriente de la optimización de proceso de ext.......
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Los autores no tienen nada que revelar.
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Investigación (NRF-NRFF2011-01) y el Consejo Nacional de Investigación Médica (NMRC/CBRG/0005/2012).
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Lycopodium clavatum esporas (tipo s) | Sigma | 19108-500G-F | |
| Albúmina sérica bovina | Sigma | A2153-50G | |
| BSA Sigma | A9771-250MG | ||
| Ácido fosfórico (85% p/v) | Sigma | 438081-2.5L | |
| Ácido clorhídrico | Sigma | V800202 | |
| Hidróxido de sodio | Sigma | S5881-1KG | |
| Acetona | Sigma | V800022 | |
| Etanol | AcME | ||
| Agua desionizada | Agua purificada Millipore | ||
| Papel de filtro cualitativo (grado Nº 1, celulosa de algodón) | |||
| Microesferas de poliestireno (50 ± 1 µ m) | Termocientífico (CA, EE. UU.) | 4250A | |
| Vectashield | Vector labs (CA, EE. UU.) | H-1000 | |
| Portaobjetos adhesivos, D 263 M Vidrio Schott, No.1.5H (170 μ m, 25 mm x 75 mm) portaobjetos de vidrio no estéril | Ibidi GmbH (Múnich, Alemania) | 10812 | |
| Licopodio comercial SECs (tipo L) | Polysciences, Inc. (PA, EE. UU.) | 16867-1 | |
| Placas calefactoras | IKA, Alemania | ||
| Microscopio electrónico de barrido | Jeol, Japón | JFC-1600 | |
| Analizador elemental | Elementar, Alemania | VarioEL III | |
| FlowCam: El sistema de sobremesa | Fluid Imaging Technologies, EE. UU. | FlowCamVS | |
| Microscopio de escaneo láser confocal | Carl Zeiss, Alemania | LSM710 | |
| Liofilizador | Labconco, EE. UU. | ||
| Espectrómetro UV | Boeco, Alemania | S220 |
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