Cefoperazona tratados modelo de ratón clínicamente relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 Strain

Jenessa A. Winston; Rajani Thanissery; Stephanie A. Montgomery; Casey M. Theriot

doi:10.3791/54850

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Artículo de método

Cefoperazona tratados modelo de ratón clínicamente relevante

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DOI:

10.3791/54850

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10 de diciembre de 2016

Jenessa A. Winston¹ , Rajani Thanissery¹ , Stephanie A. Montgomery² , Casey M. Theriot¹

¹Department of Population Health and Pathobiology, North Carolina State University College of Veterinary Medicine, ²Department of Pathology and Laboratory Medicine, Lineberger Comprehensive Cancer Center, University of North Carolina School of Medicine

En este artículo

Resumen

Este protocolo se describe el modelo de ratón cefoperazona de la infección por Clostridium difficile (CDI), utilizando una cepa clínicamente relevante y genéticamente manejable, R20291. Énfasis en el seguimiento clínico de la enfermedad, C. difficile enumeración bacteriana, la citotoxicidad de la toxina, y los cambios histopatológicos en todo CDI en un modelo de ratón se detalla en el protocolo.

Resumen

Clostridium difficile es un patógeno entérico anaeróbico, grampositivo y formador de esporas que se asocia con un aumento de la morbilidad y la mortalidad y, en consecuencia, representa una amenaza urgente para la salud pública. La recurrencia de una infección por C. difficile (ICD) después de un tratamiento exitoso con antibióticos es alta, ocurriendo en el 20-30% de los pacientes, por lo que es necesario descubrir nuevas terapias contra este patógeno. Los modelos animales actuales de ICD dan lugar a altas tasas de mortalidad y, por lo tanto, no se aproximan a las manifestaciones crónicas e insidiosas de la enfermedad observadas en los seres humanos con ICD. Para evaluar la terapéutica contra C. difficile, se necesita un modelo de ratón que se aproxime a la enfermedad humana utilizando una cepa clínicamente relevante. Este protocolo describe el modelo de ratón cefoperazone de CDI utilizando una cepa clínicamente relevante y genéticamente tratable, R20291. En el protocolo se detallan las técnicas para el seguimiento clínico de la enfermedad, la enumeración bacteriana de C. difficile, la citotoxicidad de la toxina y los cambios histopatológicos a lo largo de la ICD en un modelo de ratón. En comparación con otros modelos murinos de ICD, este modelo no es uniformemente letal a la dosis administrada, lo que permite observar un curso clínico prolongado de infección concordante con la enfermedad humana. Por lo tanto, este modelo de ratón de cefoperazona de CDI demuestra ser una valiosa plataforma experimental para evaluar los efectos de nuevas terapias en la mejora de la enfermedad clínica y en la restauración de la resistencia a la colonización contra C. difficile.

Introducción

Clostridium difficile es un anaerobio,, Bacillus formador de esporas gram-positiva que causa diarrea que amenaza la vida ^1. Infección por C. difficile (CDI) se asocia con una mayor morbilidad y mortalidad humana y los resultados en más de $ 4.8 mil millones en costos de salud por año ^1-4. En 2013, los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades clasifican C. difficile como un riesgo de resistencia a antibióticos urgente, lo que indica que presenta una amenaza inmediata para la salud pública ^1. Actualmente, el tratamiento antibiótico con vancomicina y metronidazol se consideran el estándar de cuidado....