Un modelo para la invasión perineural en cabeza y cuello Carcinoma de células escamosas

Resumen

La invasión perineural (PNI) es una característica común del carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC), que confiere tasas de supervivencia más bajas. Sus mecanismos son poco conocidos. Utilizando neuritas generadas a partir de ganglios de la raíz dorsal murina confinados a una matriz semisólida, se pueden investigar las vías involucradas en el PNI de las líneas celulares HNSCC.

Resumen

La invasión perineural (PNI) se encuentra en aproximadamente el 40% de los carcinomas de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC). A pesar del tratamiento multimodal con cirugía, radiación y quimioterapia, las recidivas locorregionales y las metástasis a distancia se presentan en tasas más altas, y la supervivencia general se reduce en un 40 % en comparación con el HNSCC sin PNI. Los estudios in vitro de las vías implicadas en el PNI de HNSCC han sido históricamente un reto debido a la falta de un ensayo consistente y reproducible. Aquí se describe la adaptación del ensayo del ganglio de la raíz dorsal (DRG) para el examen de PNI en HNSCC. En este modelo, los DRG se extraen de la columna vertebral de un ratón desnudo sacrificado y se colocan dentro de una matriz semisólida. Durante los días siguientes, se generan neuritas que crecen en un patrón radial a partir de los cuerpos celulares del DRG. A continuación, las líneas celulares HNSCC se colocan periféricamente alrededor de la matriz e invaden preferentemente a lo largo de las neuritas hacia el DRG. Este método permite una evaluación rápida de múltiples condiciones de tratamiento, con tasas de éxito y reproducibilidad de ensayos muy altas.

Introducción

El carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC) es el sexto cáncer más común en los Estados Unidos, con 10.000 muertes al año a nivel nacional y 300.000 muertes al año en todo el mundo¹. El pronóstico general para el HNSCC se ha mantenido sin cambios en el 50% durante las últimas décadas. La invasión perineural (PNI) es una de las características patológicas más destacadas que auguran un mal pronóstico en los pacientes con HNSCC. Desafortunadamente, la PNI es una ocurrencia frecuente en el HNSCC y puede encontrarse hasta en el 40% de los pacientes con HNSCC^2,3.

PNI es el proceso por el cual las células ma....

Protocolo

1. Preparación del medio de cultivo y platos (10 min)

1. Añadir 100 ml de de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con suero bovino fetal al 10% (FBS) a los pocillos de una placa de 96 pocillos de fondo en V.
2. Retirar un pre-alícuotas-vial de aproximadamente 100 l de matriz semisólida del congelador 20 ° C y colocarlo directamente en hielo.
   NOTA: Para ello, antes de la ganglio de la raíz dorsal de la cosecha (DRG) porque la matriz semisólida tarda aproximadamente 30 min para alcanzar el estado líquido en el hielo, que es necesaria para las etapas ulteriores. Si no se mantiene la matriz semisólida en hielo en todo momento, el resultado es la mat....

Resultados

Después de la disección de la DRG y la colocación dentro de la gotita de matriz, la aparición del ensayo debe parecerse a la Figura 1. Obsérvese que el DRG no es perfectamente redonda, pero se centra dentro de la gotita de matriz. Esto permite la excrecencia de neuritas en 360 grados, que se muestra parcialmente en la figura 2. Tenga en cuenta que ciertas partes de la DRG envían axones más rápido y en mayor número que los demás, por lo general correspond.......

Discusión

Los pasos críticos dentro del Protocolo

Los pasos más importantes dentro de este protocolo son la disección precisa y extracción de los ganglios de la raíz dorsal. transección adecuado de la columna vertebral y una división de la línea media longitudinal en dos-hemi-espinas son críticos para la obtención de un gran número de DRG. Durante la disección de los GRD individuales, el ganglio nunca debe ser manejado directamente, sino más bien los que rodean la fascia se debe agarr.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM/F-12 50/50 Mezcla con L-glutamina y 15 mM HEPES	Corning Cellgro	10-090-CV	Manassas, VA
Suero fetal bovino	Atlanta Biologicals	S11150	Flowery Branch, GA
0.25% Tripsina-EDTA (1x)	Life Technologies Corporation	25200056	Grand Island, NY
Solución salina tamponada con fosfato 1x	Corning	21-040-CM	Manassas, VA
Matrigel hESC-Qualif Mouse	Corning Incorporated	354277	Bedford, MA
Placas de cultivo con fondo de vidrio irradiadas con rayos gamma de 35 mm	MatTek Corporation	P35G-1.5-14-C	Ashland, MA
SteREO Discovery.V8 Microscopio	Carl Zeiss Microimaging	495015-0021-000	Thornwood, Nueva York
Fuente de luz Schott ACE I	Schott	A20500	Alemania
CellTracker	Life Technologies Corporation	C2925	Carlsbad, CA
BD Aguja PrecisionGlide de 18 G y 21 G	BD	305195	Franklin Lakes, NJ
Pinza de microdisección premium	Harvard Aparato	60-3851	Holliston, MA
Tijeras estándar de operación fina premium	Harvard Aparato	52-2789	Holliston, MA
Tijeras de resorte premium Harvard	Aparato	60-3923	Holliston, MA
Pinzas de vendaje	Harvard Aparato	72-8949	Holliston, MA
Ratones desnudos atímicos (002019)	Laboratorio Jackson 002019		Bar Harbor, ME