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Artículo de método

Un carcinoma de células singénicas modelo de ratón de la renales metastásico para la evaluación cuantitativa y longitudinal de preclínicos sobre Terapias

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DOI:

10.3791/55080

12 de abril de 2017

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

La aplicación de un modelo ortotópico de carcinoma de células renales en ratones inmunocompetentes proporciona el investigador un sistema clínicamente relevante definido por la presencia de una metástasis de tumores primarios de pulmón y renales en el mismo animal. Este sistema puede ser utilizado para probar preclínicamente una variedad de tratamientos in vivo.

Resumen

El carcinoma de células renales (CCR) afecta> 60.000 personas en los Estados Unidos cada año, y ~ 30% de los pacientes con CCR tienen múltiples metástasis en el momento del diagnóstico. CCR metastásico (CCRm) es incurable, con una mediana de supervivencia de sólo 18 meses. Intervenciones basadas inmune (por ejemplo, interferón (IFN) y la interleuquina (IL) -2) inducir respuestas duraderas en una fracción de los pacientes CCRM, y los inhibidores de multicinasas (por ejemplo, sunitinib o sorafenib) o anti-VEGF de los receptores de anticuerpos monoclonales (mAb) son en gran medida paliativa, como remisiones completas son raras. Tales deficiencias en las terapias actuales para pacientes mRCC proporcionan el fundamento para el desarrollo de protocolos de tratamiento novedosas. Un componente clave en el ensayo preclínico de nuevas terapias para CRm es un modelo animal adecuado. características beneficiosas que recapitular la condición humana incluyen un tumor primario renal, metástasis de tumores renales, y un sistema inmunológico intacto para investigar cualquier effecto inmune terapia impulsadarespuestas r y la formación de factores inmunosupresores inducida por tumores. Este informe describe un modelo ortotópico de ratón CCRm que tiene todas estas características. Se describe una técnica de implantación intrarrenal usando la línea celular de adenocarcinoma de ratón renal Renca, seguido por la evaluación del crecimiento del tumor en el riñón (sitio primario) y los pulmones (sitio metastásico).

Introducción

Carcinoma de células renales (RCC) es responsable de la mayoría de los neoplasmas malignos de riñón y aproximadamente el 3% de todos los tumores malignos de adultos en todo el mundo 1, 2. Debido a la falta de los síntomas, diagnóstico erróneo, y herramientas de detección suficientes para RCC, casi el 30% de los pacientes presentará con RCC metastásico (CCRm) en el momento del diagnóstico, con un 20-30% adicional de pacientes que evolucionan hacia una etapa metastásica 2. Estos casos dan lugar a ~ 13.500 muertes al año 1, 3. Aun....

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Protocolo

El siguiente protocolo describe un procedimiento experimental para inducir y control del crecimiento de los tumores renales ortotópicos experimentales y cualquier metástasis espontáneas potenciales. Todos los siguientes procedimientos se realizan de conformidad con las políticas institucionales y procedimientos aprobados con respecto al uso humano de los animales de experimentación.

1. Mantenimiento de líneas celulares

  1. Mantener la línea celular de adenocarcinoma renal murino, Renca, en Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 suplementado con 10% de suero de ternera fetal (FCS), 1% de penicilina-estreptomicina, y 1 mM de cada uno de no esenciale....

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Resultados

La implantación exitosa de células Renca resultará en el desarrollo de tumores en el riñón y la metástasis a los pulmones de los ratones. Después de la escisión del tumor-cojinete y los riñones contralaterales, se midieron los pesos de los tejidos húmedos (G) para demostrar la carga tumoral basado en el aumento de peso (Figura 1). Tumores Renca se pueden identificar mediante técnicas de inmunohistoquímica a través de citoqueratina 8 y 18 tinción (Figura 2)........

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Discusión

Se presenta un protocolo para un modelo ortotópico de ratón RCC. La implantación de células tumorales de adenocarcinoma renal de ratón en el riñón de ratón proporciona un modelo clínicamente relevante de CRm. Este modelo resulta en un tumor primario en el riñón y la metástasis distante en los pulmones, las cuales son características de RCC avanzado. La descripción presentada en este documento es específico para la línea celular Renca en ratones inmunocompetentes Balb / c. Utilizando este modelo ortotópico, hemos demostr.......

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Divulgaciones

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Instituto Nacional del Cáncer (R15CA173657 a AW y R01CA109446 a TSG), el Instituto de Cáncer Simmons (AW), y la Universidad de Minnestoa Climb Fundación 4 Cáncer Renal (TSG). Agradecemos al Dr. Kristin Anderson para obtener ayuda con la inmunofluorescencia.

....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Lágrimas artificiales ungüento oftálmicoAkornNDC 17478-162-35
Vetbond Adhesivo tisular3MCBGBIW011019
Solución de betadine (povidona yodada, 5%)Purdue Products, L.P.NDC 67618-155-32
0.25% Marcaine (inyección de bupivavaína HCl)Hospira0409-1587-50 
Almohadilla térmicarayo
BD 309659
GasaVenture 908291
KetaminaPhoenix PharmaceuticalsNDC 57319-609-02
Xilacina AkornNDC 59399-111
Hank' s Sales equilibradasSigma-AldrichH2387
IVISCaliper
D-Luciferin, Sal de Potasio GoldBioLUCK-1G
India InkChartpak Inc44201
Tijeras Pinzas
de la Bella Durmiente (SB) sistema de transposonesNeuromics
RencaATCCCRL-2947
Jeringas de de solSBT0200

Referencias

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J. Clin. 66, 7-30 (2016).
  2. Chow, W. H., Dong, L. M., Devesa, S. S. Epidemiology and risk factors for kidney cancer. Nat. Rev. Urol. 7, 245-257 (2010).
  3. Hollingsworth, J. M., Miller, D. C., Daignault, S., Hollenbeck, B. K.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Implantación intrarenalmetástasis tumoralcélulas Rencaimagen bioluminiscentemetástasis pulmonartumor ortotópicoterapia preclínicatinción de citoqueratina