Culturas de rebanada Hippocampal Organotypic como un modelo para estudio neuroprotección e invasividad de las células tumorales

Urszula Grabiec; Tim Hohmann; Niels Hammer; Faramarz Dehghani

doi:10.3791/55359

Artículo de método

Culturas de rebanada Hippocampal Organotypic como un modelo para estudio neuroprotección e invasividad de las células tumorales

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DOI:

10.3791/55359

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27 de agosto de 2017

Urszula Grabiec^*¹ , Tim Hohmann^*¹ , Niels Hammer² , Faramarz Dehghani¹

¹Department of Anatomy and Cell Biology, Martin Luther University Halle-Wittenberg, ²Department of Anatomy, University of Otago

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Las culturas Organotypic rebanada hippocampal (OHSC) representan un modelo en vitro que simula muy bien la situación en vivo . Aquí describimos un vibratome base mejorado rebanar protocolo para obtener rodajas de alta calidad para uso en la evaluación del potencial neuroprotector de nuevas sustancias o el comportamiento biológico de las células tumorales.

Resumen

En culturas de rebanada hippocampal organotypic (OHSC), las características morfológicas y funcionales de neuronas y células gliales están bien conservadas. Este modelo es adecuado para abordar cuestiones de investigación que involucran estudios de neuroprotección, experimentos electrofisiológicos de neuronas, redes neuronales o invasión del tumor. La arquitectura hippocampal y la actividad neuronal en circuitos multisynaptic están bien conservados en OHSC, aunque el procedimiento de corte inicialmente lesiones y conduce a la formación de una cicatriz glial. La formación de la cicatriz presumiblemente altera las propiedades mecánicas y comportamiento difusivo de moléculas pequeñas, etcetera. Láminas permiten el monitoreo de procesos dependientes del tiempo después de la lesión cerebral sin cirugía animal y los estudios sobre las interacciones entre los diversos tipos de células cerebrales, es decir, astrocitos, microglía y neuronas en fisiológicas y patológicas condiciones. Un aspecto ambivalente de este modelo es la ausencia de flujo sanguíneo y las células inmunes de la sangre. Durante la progresión de la lesión neuronal, migración de células inmunes del juego un papel importante de la sangre. Como esas células faltan en rodajas, se pueden observar los procesos intrínsecos de la cultura sin interferencia externa. Por otra parte, en OHSC la composición del ambiente externo medio es precisamente controlada. Otra ventaja de este método es el menor número de animales sacrificados en comparación con las preparaciones estándar. Varios OHSC puede obtenerse de un animal, posibilitando estudios simultáneos con múltiples tratamientos en un animal. Por estas razones, OHSC son muy adecuadas para analizar los efectos de la nueva terapéutica protectora después de daño de tejido o invasión del tumor.

El protocolo presentado aquí se describe un método de preparación de OHSC que permite generar altamente reproducible, bien conservado láminas que pueden utilizarse para una variedad de investigaciones experimentales, como estudios de neuroprotección o tumor invasión.

Introducción

OHSC son un modelo bien caracterizado en vitro para el estudio de propiedades fisiológicas y patológicas de las neuronas, astrocitos y microglia¹. Es fácil de controlar el ambiente extracelular y los cambios morfológicos y celulares después de varios estímulos. La organización de las neuronas de hipocampales y sus conexiones están bien conservadas después de preparación²^,³. De varias ventajas, OHSC permiten monitoreo de invasión de la lesión y tumor del cerebro sin cirugía animal. Seis a ocho OHSC puede obtenerse de un solo cerebro de roedor. OHSC por lo tanto ayudar a signific....