El objetivo de este documento y vídeo de instrucción es describir cómo exponer y retirar el cerebro de cerdo y la glándula pituitaria postmortem en un estado intacto, adecuado para el análisis macroscópico e histológico posterior.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
La exposición del cerdo del SNC para el análisis histológico: Un Manual para decapitación, Apertura cráneo, cerebro y Remoción
En este artículo
Resumen
Resumen
Los cerdos se han vuelto cada vez más popular en la investigación traslacional animal grande neurociencia como un sustituto económicamente y éticamente factible primates no humanos. El tamaño del cerebro grande del cerdo permite el uso de generadores de imágenes cerebrales clínica convencionales y el uso directo y las pruebas de los procedimientos y equipos de neurocirugía de la clínica humana. Además análisis macroscópico e histológico, sin embargo, requiere la exposición postmortem del sistema de cerdo nervioso central (CNS) y la extracción del cerebro posterior. Esta no es una tarea fácil, ya que el cerdo CNS está encapsulada por una, estructura ósea del cráneo de espesor y la columna vertebral. El objetivo de este documento y vídeo de instrucción es describir cómo exponer y retirar el cerebro de cerdo postmortem y la glándula pituitaria en un estado intacto, adecuado para el análisis macroscópico e histológico posterior.
Introducción
Los estudios de neurociencia traslacional en cerdos se han vuelto cada vez más populares en las últimas dos décadas. El gran tamaño del cerebro de cerdo permite el uso de generadores de imágenes cerebrales clínica convencionales y el uso directo y las pruebas de los procedimientos neuroquirúrgicos y el equipo de la clínica humana 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. En los últimos 20 años, cerdos, especialment....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
anestesia Animal y euthanesia se realizó de acuerdo con "Principios de laboratorio cuidado de los animales" (NIH publicación No. 86-23, revisada 1985) y aprobada por el Consejo Danés de Ética de la Investigación Animal.
1. Instrumentos
- Recoge los instrumentos presentados en el video y que figuran en la Tabla de Materiales.
2. Decapitación
NOTA: La anestesia se indujo mediante una inyección intramuscular de 5 ml de midazolam (5 mg / ml) y 5 ml de ketamina (25 mg / ml). 5-10 min más tarde, cuando el animal estaba profundamente sedado, una vena de la or....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Para evitar que el material de tejido de la desecación, se recomienda para almacenar el cerebro eliminado y la hipófisis en una jarra llena de fijador o solución salina isotónica inmediatamente después que se ha realizado el análisis macroscópico. El material tejido puede ser almacenado en el fijador por año, mientras que el almacenamiento en solución salina isotónica, incluso en un refrigerador, dará lugar a la descomposición del tejido con el tiempo.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
La mayoría de los estudios de neurociencia experimentales se llevan a cabo en las especies de animales pequeños, tales como ratones y ratas, donde el acceso al SNC se ve facilitada por una fina calavera y dural-espesor. Sin embargo, en los animales de experimentación más grandes como cerdos 1, 4, 8, ovejas 32, y primates no humanos, el espesor considerable de estas estructuras requiere el uso de instrume.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores reconocen con gratitud la ayuda experta de la señora Trine W. Mikkelsen, la señora Lise M. de montaje, y el personal de Påskehøjgaard. El Consejo Danés de Investigación Médica, la Fundación Lundbeck, y la Fundación Novo Nordisk con el apoyo financiero del estudio.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Mango de bisturí pesado # 4 | FST (Fine Science Tools) | 10008-13 | Bueno para incisión en la piel y eliminación de tejidos |
| blandos Hojas de bisturí no estériles # 23 | FST | 10023-00 | |
| Mango de bisturí #7 | FST | 10007-12 | Óptimo para la incisión dural y el trabajo |
| de precisión Hojas de bisturí no estériles #11 | FST | 10011-00 | |
| Pinza quirúrgica | FST | 11024-18 | La punta de las pinzas quirúrgicas asegura un agarre firme |
| Kerrison Bone Punch | Aesculap Neurosurgery | FF713R | Debe ser robusto, tamaño de mordida 3-5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | MD615 | Debe ser robusto, tamaño de mordida 15 x 5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | FO551R | Debe ser robusto, tamaño de mordida 25 x 15 mm |
| Cincel de hueso | Lawton | 67-0335 | El tamaño de la cabeza del cincel no debe exceder los 20 mm |
| Mazo (martillo)Millarco | 5624108 | Peso 300 g, longitud 30 cm, tamaño del área de golpe de la cabeza 2 x 2 cm | |
| Microtijera | FST | 14002-14 y nbsp; | |
| Disector | Aesculap Neurocirugía | OL165R | |
| Gö ttingen minipigs | Ellegaard Gö ttingen Minipigs A/S, Dinamarca | ||
| Euthanimal | pentobarbital | ||
| Ketamina | Pfizer | ||
| Midazolam | Hameln Productos Farmacéuticos |
Referencias
- Lind, M. N., Moustgaard, A., Jelsing, J., Vajta, G., Cumming, P., Hansen, A. K. The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders. Neurosci Biobehav Rev. 31, 728-751 (2007).
- Bjarkam, C. R., et al. Neuromodulation in a minipig model of Parkinson disease. British ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
Etiquetas
