Se demuestra un ensayo para analizar las señales ambientales y genéticas que influyen en el comportamiento de apareamiento en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster .
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Artículo de método
Un método para probar el efecto de las señales ambientales sobre el comportamiento de apareamiento en
En este artículo
Resumen
Resumen
El impulso sexual de un individuo está influenciado por el genotipo, la experiencia y las condiciones ambientales. Cómo estos factores interactúan para modular comportamientos sexuales sigue siendo mal entendido. En Drosophila melanogaster , las señales ambientales, como la disponibilidad de alimentos, afectan la actividad de apareamiento, ofreciendo un sistema manejable para investigar los mecanismos que modulan el comportamiento sexual. En D. melanogaster , las señales ambientales a menudo se perciben a través de los sistemas gustativo y olfativo quimiosensoriales. Aquí, presentamos un método para probar el efecto de las señales químicas ambientales en el comportamiento de apareamiento. El ensayo consiste en una pequeña arena de apareamiento que contiene medio de alimento y una pareja de apareamiento. La frecuencia de apareamiento para cada pareja se controla continuamente durante 24 h. Aquí presentamos la aplicabilidad de este ensayo para probar compuestos ambientales de una fuente externa a través de un sistema de aire presurizado, así como la manipulación de los componentes ambientales directamente en el campo de apareamiento. El uDe un sistema de aire a presión es especialmente útil para probar el efecto de compuestos muy volátiles, mientras que la manipulación de componentes directamente en el campo de acoplamiento puede ser de valor para determinar la presencia de un compuesto. Este ensayo puede adaptarse para responder a preguntas sobre la influencia de las señales genéticas y ambientales en el comportamiento de apareamiento y la fecundidad, así como otros comportamientos reproductivos masculinos y femeninos.
Introducción
Los comportamientos reproductivos suelen tener altos costos de energía, especialmente para las hembras, que producen gametos más grandes que los machos y deben escoger cuidadosamente las condiciones para criar a sus descendientes en desarrollo. Debido al costo energético, no es de extrañar que la reproducción esté relacionada con las condiciones nutricionales. Esto es cierto en la mayoría de los animales, incluso en los mamíferos, cuya pubertad puede ser retardada por la desnutrición y cuyo impulso sexual puede verse afectado negativamente por la restricción de los alimentos 1 .
La reproducción del organismo genéti....
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Protocolo
1. Caja de acoplamiento ambientalmente controlada
- Para asegurar un área de prueba controlada y fácil de limpiar, configure un gabinete de cocina de acero inoxidable de 120 cm x 64 cm x 85 cm como se ilustra en la Figura 1A.
- Taladre un agujero en la parte posterior del gabinete justo debajo del techo y cuatro juegos de cuatro agujeros en los lados, cada uno con un diámetro de 2 cm. Perfore los dos primeros conjuntos de cuatro orificios, a cada lado de la caja a una altura de 7 cm desde el fondo de la caja y con 12,5 cm entre los agujeros. Taladre los otros dos conjuntos en cada lado de la caja a una altura de 35 cm desde el fondo. ....
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Resultados
Usando este ensayo continuo, el comportamiento de apareamiento, y la frecuencia de apareamiento en específico, se puede determinar bajo condiciones ambientales experimentales. Para controlar las condiciones ambientales, transformamos un gabinete de cocina de acero inoxidable en un área de prueba, con su propia fuente de luz y difusión, lo que garantiza una gran cantidad de luz y una mínima cantidad de reflejos desde la parte superior de las arenas de apareamiento ( Figura 1A
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Discusión
Este protocolo describe un ensayo para probar el comportamiento de apareamiento durante 24 horas mientras se controlan continuamente las señales ambientales que se supone que una pareja conjugada usa para determinar la frecuencia de apareamiento. Es posible aumentar la frecuencia de apareamiento en respuesta al aire de levadura suministrado a través de un sistema de aire presurizado cuando el medio contiene levadura también ( Figura 2B ). Además, se puede observar una respuesta similar en la frecuencia .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses en competencia para divulgar.
Agradecimientos
Damos las gracias al Bloomington Drosophila Stock Center para las acciones de la mosca; C. Gahr, JT Alkema y S. van Hasselt por su temprano intento de desarrollar el ensayo de aire presurizado; Jasper Bosman por el consejo sobre cultivar levadura; Y Rezza Azanchi y Joel Levine por haber desarrollado originalmente el monitoreo de lapso de tiempo del comportamiento de apareamiento de Drosophila . JA Gorter recibió el apoyo de una Beca del Programa de Posgrado BCN / NWO de la Escuela de Investigación Neurocientífica. Este trabajo fue apoyado en parte por la organización holandesa para la investigación científica (NWO) (referencia: 821.02.020) a JC Bill....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| CabinetArmario de cocina de | |||
| acero inoxidable | Horecaworld | 7412.0105 | |
| LEDs blancos | Lucky Light | ll-583wc2c-001 | LEDs blancos fríos, 20 mAmp y 2 V |
| rojos | Lucky Ligt | ll-583vc2c-v1-4da | Longitud de onda entre 625 nm, 20 mAmp y 6 V |
| Resistencia | Royal Ohm | CFR0W4J0561A50 | 560 ohmios, 0,25 W, 250 V y 5 % de tolerancia |
| Aplicación de medidor de luz para teléfonos inteligentes | Patrick Giudicelli | Medidor de luz/lux GRATIS, versión 1.1.1 | |
| Temporizador de potencia | Alecto | TS-121 | |
| Soportes metálicos | Ángulo agudo 5 por 5 mm, 2 x 5450 y 1 x 1100 mm de largo | ||
| Placa | 1190 x 545 x 5 mm | ||
| Papel de filtro hojas | Filtros LEE | 220 | Escarcha blanca |
| Ventilador pequeño | Nanoxia Silencio profundo | 4260285292828 | 80 mm Ventilador de PC ultrasilencioso, 1200 RPM |
| Ventilador grande | Nanoxia Silencio profundo | 4260285292910 | 120 mm Ventilador de PC ultrasilencioso, 650-1500 RPM |
| Cámara webcam | Logitech | 950270 | B910 HD WEBCAM OEM, Ángulo: 78 grados, resolución: 5 millones de píxeles; |
| Software de cámara | DeskShare | Monitor de seguridad pro | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comentarios |
| >Fly rearing | |||
| Fly criando botellas Flystuff | 32-130 | 6oz Caldo de Drosophila botella | |
| Flypad | Flystuff | 59-114 | |
| Moscas salvajes | Canton-S | ||
| Viales de cría de moscas | Dominique Dutscher | 789008 | Drosophila tubos estrechos 25x95 mm |
| Incubadora | Sanyo | MIR-154 | |
| Placa calefactora magnética | Heidolph | 505-20000-00 | MR Hei-Standard |
| Agar | Caldic Ingredientes B.V. | 010001.26.0 | |
| Glucosa | Gezond& wel | 1019155 | Dextrosa/Druivensuiker |
| Sacarosa | Van Gilse | Azúcar granulada | |
| Harina de maíz | Flystuff | 62-100 | |
| Germen de trigo | Gezond& Weel | 1017683 | |
| Harina de soja | Flystuff | 62-115 | |
| Melaza | Flystuff | 62-117 | |
| Levadura seca activa | Red Star | ||
| Tegosept | Flystuff | 20-258 | 100% |
| Peptona (bacto) | BD | 211677 | |
| Ácido Acético | Merck | 1000631000 | Glacial, 100% |
| Petri | Greiner bio-one | 627102 | 35 x 10 mm con rejillas de ventilación Película de |
| parafina | Bemis NA | Parafilm | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| Levadura y configuración de aire a presión | |||
| Petriplato grande | Gosselin | BP140-01 | 140 x 20,6 mm |
| Agua ultrapura | Millipore corporation | MiliQ | |
| Extracto de levadura | BD | 212750 | |
| Agar (puro) | BD | 214530 | bacto |
| Glucosa (0(+)-glucosa monohidratada) | Merck | 18270000004 | |
| Open gorras | Schott | 29 240 28 | GL45 |
| Tabique de silicona | VWR | 548-0662 | |
| Accesorios de mampara de púas | Nalgene | 6149-0002 | |
| Diámetro de tubo | : exterior 1,2 cm e interior 0,9 cm | ||
| de tubo de | : exterior 0,8 cm e interior 0,5 cm | ||
| Tubo de 15 ml | Bomba de acuario Falcon | ||
| Sera | precision | Sera air 110 plus, CA 220-240 V, 50/60 Hz, 3 W y presión >100 mbar | |
| Carbón activado | Superfish | A8040400 | Carbón activado Norit |
| Unidad de filtrado desechable | Whatman | 10462100 | |
| Pipetas serológicas | VWR | 612-1600 | |
| BD Plastipak | 300013 | ||
| Pegamento caliente | Pattex | ||
| Filtro de jeringa | Whatman | FP 30/tamaño de poro 0,45 mm CA-S | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| >Analysis | |||
| Statistics software | Paquete R | lme4 |
Referencias
- Hileman, S. M., Pierroz, D. D., Flier, J. S. Leptin nutrition, and reproduction: timing is everything. J. Clin. Endocrinol. Metab. 85 (2), 804-807 (2000).
- Grosjean, Y., et al. An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophi....
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Reimpresiones y permisos
