La perfusión como un método para la visualización vascular<em&gt; Ambystoma mexicanum</em

Anna J. Saltman; May Barakat; Donald M. Bryant; Anastasia Brodovskaya; Jessica L. Whited

doi:10.3791/55740

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Artículo de método

La perfusión como un método para la visualización vascular

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DOI:

10.3791/55740

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16 de junio de 2017

Anna J. Saltman^*¹^,² , May Barakat^*¹ , Donald M. Bryant¹ , Anastasia Brodovskaya¹ , Jessica L. Whited¹

¹Department of Orthopedic Surgery, Harvard Medical School and Brigham and Women's Hospital, ²Division of Graduate Medical Sciences, Boston University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Usando una técnica lipofílica de tinción de perclorato de 1,1'-Dioctadecy-3,3,3 ', 3'-tetrametilindocarbocianina (DiI), Ambystoma mexicanum puede someterse a perfusión vascular para permitir una fácil visualización de la vasculatura.

Resumen

Las técnicas de perfusión se han utilizado durante siglos para visualizar la circulación de los tejidos. Axolotl (Ambystoma mexicanum) es una especie de salamandra que ha surgido como un modelo esencial para los estudios de regeneración. Poco se sabe acerca de cómo se produce la revascularización en el contexto de la regeneración en estos animales. Aquí presentamos un método simple para la visualización de la vasculatura en axolotl vía perfusión de 1,1'-Dioctadecy-3,3,3 ', 3'-tetrametilindocarbocianina perclorato (DiI). DiI es un colorante de carbocianina lipofílico que se inserta en la membrana plasmática de las células endoteliales instantáneamente. La perfusión se realiza usando una bomba peristáltica de tal manera que DiI entra en la circulación a través de la aorta. Durante la perfusión, el colorante fluye a través de los vasos sanguíneos del axolotl e incorpora en la bicapa lipídica de las células endoteliales vasculares al contacto. El procedimiento de perfusión dura aproximadamente una hora para un axolotl de ocho pulgadas. Inmediatamente después de la perfusión,Th DiI, el axolotl se puede visualizar con un microscopio confocal fluorescente. El DiI emite luz en el rango naranja-rojo cuando se excita con un filtro fluorescente verde. Este procedimiento de perfusión DiI puede usarse para visualizar la estructura vascular de los axolotes o para demostrar patrones de revascularización en tejidos regeneradores.

Introducción

La visualización de la vasculatura desempeña un papel vital en la comprensión de la estructura y función de los organismos a través de muchas especies. A partir ^del siglo XVI con Leonardo da Vinci, se han estudiado modelos y representaciones gráficas de la circulación ¹ . Usando ceras y moldes de caucho, los tejidos fueron perfundidos para crear modelos tridimensionales de la vasculatura, lo que permitió el estudio de la organogénesis y la patogénesis [ ¹ ^, ^2] . Las resinas y las ceras se colorearon con tintes tales como tinta India o rojo carmín para permitir su fácil visua....