Desarrollamos un método para eliminar, procesar, seccionar y teñir exitosamente, para la evaluación histopatológica, el tejido mamario que originalmente había sido fijado en diapositivas como monturas enteras. Este método puede promover la recolección y evaluación de monturas enteras de glándulas mamarias en estudios de referencia de pruebas reproductivas y de desarrollo.
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Artículo de método
Seccionando los Montes Enteros de las Glándulas Mamarias para la Identificación de Lesiones
En este artículo
Resumen
Resumen
El desarrollo normal de las glándulas mamarias puede verse alterado por la exposición a tóxicos ambientales y productos farmacéuticos, exposición excesiva a hormonas y alteraciones genéticas. Las guarniciones enteras de la glándula mamaria son un método barato para capturar la progresión de los cambios morfológicos que pueden surgir después de la exposición. Sin embargo, en la vida posterior, cuando las anomalías son más propensas a desarrollarse, la única dependencia de este método puede no siempre proporcionar información suficiente para hacer un diagnóstico adecuado de la anomalía. Históricamente, en los estudios de guía de pruebas químicas, una única glándula mamaria se elimina en la necropsia y se prepara como hematoxilina y eosina (H & E) -stained sección. La incorporación de la recolección y análisis de todo el montaje mamario contralateral disminuye la probabilidad de una evaluación falso-negativa. La evaluación de la totalidad del soporte está limitada por la presencia de una o dos glándulas mamarias enteras en una diapositiva y, en algunos casos, las anomalías observadas en todo el soporte no sonT uniformemente representada en la sección H & E. El objetivo de este estudio fue desarrollar un protocolo para la conversión de coverslipped mamífero entero monta a H & E manchado secciones de modo que las lesiones que de lo contrario se han perdido o que son difíciles de diagnosticar se puede identificar. Aquí se detalla un método para producir una sección H & E embebida en parafina de alta calidad de una glándula mamaria que se preparó inicialmente como una montura completa. En comparación con un tejido que se preparó intencionalmente para la sección de H & E, todo el soporte requiere una preparación adicional para la eliminación y procesamiento del tejido. Sin embargo, este método se considera barato, ya que requiere reactivos de laboratorio comunes y poco tiempo adicional. Como resultado, este método puede proporcionar información invaluable sobre cómo las exposiciones químicas y ambientales alteran el desarrollo mamario normal, así como mostrar los cambios que se producen debido a las modificaciones genéticas.
Introducción
La madre entera mamaria es un método útil y barato implementado en muchos estudios de ratas y ratones para comprender tanto el desarrollo anormal normal como químicamente inducido. En general, una glándula mamaria recogida en diferentes etapas durante el desarrollo de los roedores ( es decir, la adolescencia, la pubertad, la mitad de la gestación tardía y la fase de involución) mostrará cambios morfológicos en los tejidos y la arquitectura celular influenciada por factores parácrinos, endocrinos y autócrinos 1 . En la rata envejecida, las porciones epitelial y estromal de la glándula se vuelven cada vez más densas, lo que dificulta la....
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Protocolo
Todos los usos y procedimientos de los animales para este estudio fueron aprobados por el NIEHS Laboratory Animal
Comité de Atención y Uso y realizado en una Asociación para la Evaluación y Acreditación de
Laboratorio de Cuidado de Animales-instalación acreditada.
1. Preparación de montaje completo mamario 2 , 3 , 6 , 7
- Elimine las glándulas mamarias inguinales de un lado de un ratón hembra CD-1 no embarazada, como se describe en la referencia 3 , y colóquelas sobre una diapositiva ....
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Resultados
Este método es eficaz para ayudar con los diagnósticos que de otro modo podrían haberse perdido si la sección contralateral original de H & E de la almohadilla mamaria no mostraba ningún cambio histológico. Sin embargo, el resultado sólo será útil si se toma cuidado durante la preparación inicial de montaje completo, así como durante la preparación del tejido para la evaluación histológica. La incrustación de parafina proporcionará protección y ayudará a preservar el tejido para futu.......
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Discusión
El montaje completo de la glándula mamaria es una poderosa herramienta que puede usarse para ilustrar el desarrollo mamario normal y las alteraciones morfológicas que pueden surgir y persistir después de la exposición a químicos, incluyendo los disruptores endocrinos. Cuando se evalúan conjuntamente un conjunto completo y una sección de H & E del mismo animal, pueden proporcionar una instantánea visual precisa de las primeras alteraciones, que pueden progresar hacia un estado más enfermo.
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses conflictivos que declarar en relación con la investigación, autoría y / o publicación de este artículo.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a Pam Ovwigho, Tenette Jones y Natasha Clayton, NIEHS, por su experiencia técnica y apoyo con este proyecto.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| xileno | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | para el deslizamiento de monturas enteras y H& Secciones E |
| Procesador automatizado | Leica Biosystems Modelo | # ST5020 | |
| HM 355S Microtomo automático | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Parafina | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus portaobjetos de microscopio | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | cargado electrostáticamente |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | cubreobjetos |
| Varistain Gemini ES Tinción automática de portaobjetos | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | adhesivo líquido; utilizado en baño de agua en el corte |
| Hematoxilina Harris modificada 72711 | Richard-Allan Scientific (Parte de Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosina | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Carbonato de litio | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| Ácido acético glacial | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | necesario en el fijador de Carnoy |
| Cloroformo | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | necesario en el fijador de Carnoy |
| 100% Etanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | necesarios en el fijador y los portaobjetos de lavado de Carnoy |
| 95% Etanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Sulfato de aluminio y potasio dodecahidratado, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Tampón de lavado automatizado, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
Referencias
- Rudel, R. A., Fenton, S. E., Ackerman, J. M., Euling, S. Y., Makris, S. L. Environmental exposures and mammary gland development: State of the science, public health, implications, and research recommendations. Environ Health Perspect. 119 (8), 1053-1061 (2011).
- Keenan, K. P., Wallig, M. A., Hascheck, W. M.
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Etiquetas
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