Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

Weiguang Weng; Dongxue Li; Cheng Peng; Thomas Behnisch

doi:10.3791/55936

Artículo de método

Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

DOI:

10.3791/55936

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1 de enero de 2018

Weiguang Weng¹ , Dongxue Li¹ , Cheng Peng¹ , Thomas Behnisch¹

¹The Institutes of Brain Science, the State Key Laboratory of Medical Neurobiology, the Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University

En este artículo

Resumen

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Este protocolo describe la estabilización del nivel de oxígeno en un pequeño volumen de tampón reciclado y aspectos metodológicos de la plasticidad sináptica dependiente de actividad de la grabación en rebanadas hippocampal agudas sumergidas.

Resumen

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Aunque los experimentos en rebanadas de cerebro han estado en uso desde 1951, siguen existiendo problemas que reducen la probabilidad de lograr un análisis acertado y estable de la modulación de la transmisión sináptica al realizar grabaciones intracelulares o potenciales del campo. Este manuscrito describe aspectos metodológicos que pueden ser útiles en la mejora de las condiciones experimentales para el mantenimiento de rebanadas cerebrales agudas y para la grabación de potenciales postsinápticos excitatorios de campo en una cámara de inmersión disponibles en el mercado con una unidad de salida carbogenation. La carbogenation de la salida ayuda a estabilizar el nivel de oxígeno en los experimentos que se basan en el reciclaje de un depósito tampón pequeño para mejorar la rentabilidad de experimentos con drogas. Además, el manuscrito presenta experimentos representativos que examinan los efectos de la carbogenation diferentes modos y paradigmas de estimulación de la plasticidad sináptica dependiente de actividad de la transmisión sináptica.

Introducción

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En 1951, los experimentos de rebanada cerebral aguda registrados primero fueron realizados¹. En 1971, después de éxito en vitro las grabaciones de la corteza piriforme²^,³ y el descubrimiento que las neuronas hippocampal están interconectadas transversalmente en el eje septotemporal del hipocampo⁴, uno de los primeras grabaciones en vitro de la actividad neuronal hippocampal fue alcanzado⁵. La similitud de los parámetros neurofisiológicos o neurostructural de las neuronas bajo condiciones en vivo y en vitro

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Protocolo

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Los animales fueron mantenidos según las normas de cuidado de los animales y los procedimientos de los institutos de ciencia del cerebro y el estado clave de laboratorio médico Neurobiología de la Universidad de Fudan, Shanghai, China.

1. preparación de la solución

Nota: Consulte la tabla de materiales.

Preparar el buffer de corte (solución de Gey modificado): 92 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1.25 mM NaH₂PO₄, 30 mM NaHCO₃, 25 mM de glucosa, 20 mM HEPES, 3 mM Na⁺-piruvato, 10 mM MgSO₄y 0,5 mM de CaCl₂.
Ajustar el pH a 7,6 con 1 M NaOH sin carbogenation.

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Resultados

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En la sección de protocolo, nos describe la preparación de aguda rebanadas hippocampal de la parte intermedia y ventral de la formación hipocámpica (figura 1) de ratones C57BL/6 machos y ratas Wistar macho (5-8 semanas). La posición de los hemisferios en la plataforma de la máquina de cortar ayuda a mantener estable y elimina la necesidad de estabilización con agar o agarosa. El sistema de perfusión se basa en una bomba peristáltica en alta rotación para dar .......

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Discusión

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Aunque cámaras de rebanada de interfaz exhiben más sólidas respuestas sinápticas²⁵^,²⁶^,²⁷^,²⁸, cámaras de inmersión proporcionan comodidad adicional para la grabación de la abrazadera del remiendo y de la fluorescencia proyección de imagen. Así, hemos descrito algunos aspectos de posibles grabaciones de campo en rebanadas hippocampal agudas usando una cámara de corte de inmersión comercial que pu.......

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Divulgaciones

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Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de cualquier relación comercial o financiera que pueda interpretarse como un potencial conflicto de interés.

Agradecimientos

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W.W. realizó, analizados y había diseñado los experimentos y escribió el manuscrito. D.X. y C.P. ayudó en la preparación de la figura y llevado a cabo los experimentos. Este trabajo fue apoyado por NSFC (31320103906) y 111 (B16013) en T.B.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
reactivos requeridos
NaCl	Reactivo químico Sinopharm, China	10019318
KCl	Reactivo químico Sinopharm, China	10016318
KH₂PO₄	Reactivo químico Sinopharm, China	10017618
MgCl₂ &punto medio; 6H₂O	Reactivo químico Sinopharm, China	10012818
CaCl₂	Reactivo químico Sinopharm, China	10005861
NaHCO₃	Sinopharm Reactivo químico, China	10018960
Glucosa	Reactivo químico Sinopharm, China	10010518
NaH₂ PO₄	Reactivo químico Sinopharm, China	20040718
HEPES	Sigma	H3375
Piruvato de sodio	Sigma	A4043
MgSO₄	Reactivo químico Sinopharm, China	20025118
NaOH	Reactivo químico Sinopharm, China	10019718
Herramientas y materiales para la disección
Decapitadores	Aparato Harvard	55-0012	para la decapitación de ratas
Tijeras de vendaje	SCHREIBER	12-4227	para decapitación de ratón
de doble filo	Flying Eagle, China	74-C
Tijeras IRIS	RWD, China	S12003-09
Bone Rongeurs	RWD, China	S22002-14
Cuchara	Hammacher	HSN 152-13
espátula de cemento dental	Hammacher	HSN 016-15
excavadora dental de doble extremo	Blacksmith Surgical, EE. UU.	BS-415-017
Microtomo vibratorio	Leica, Alemania	VT1200S
cuchilla quirúrgica	RWD, China	S31023-02
soporte quirúrgico	RWD, China	S32007-14
Equipos y materiales de electrofisiología
pipetas	Narishige, Japón	PC-10
Mesa de aislamiento de vibraciones	Meirits, Japón	ADZ-A0806
grabación de tipo sumergido Cámara	Warner Instruments	RC-26GLP
Micromanipulador de 4	ejes Sutter, EE. UU	MP-285, MP-225
Alambre de platino	World Precision Instruments	PTP406
Amplificador	Molecular Devices, EE. UU.	Multiclamp 700B
	Dispositivos moleculares, EE. UU.	Digidata 1440A
Anaysis software	Molecular Devices, EE. UU.	Clampex 10.2
	Nikon, Japón	LED FN1
	Lumen Dynamics Group, Canadá	X-cite 120Micropipetas LED
	Aparato Harvard	GC150TF	registro extracelular
Micropipetas de borosilicato	Sutter, EE. UU	BF150-86	pinza de parche
electrodo de tungsteno	A-M Systems, EE. UU.	575500
bomba peristáltica	más larga, China	BT00-300T
tubos para bomba peristáltica	ISMATEC, Wertheim, Alemania	SC0309	1x caudal de entrada, ID: 1,02 mm
tubos para bomba peristáltica	ISMATEC, Wertheim, Alemania	SC0319	2x tubos para salida, ID: Cámara CCD de 2,79 mm
	PCO, Alemania	pco.edge sCMOS
papel de limpieza de lentes	Tubo
de 50 ml	Precámara 339652
	Calentador en línea Warner Instruments	BSC-PC
Controlador	de temperatura SF-28		Warner Instruments
Warner Instruments	TC-324B

cuchilla Vertical Extractor de . Sistema de adquisición de datos Microscopio de fluorescencia Fuente de luz . de centrífuga cónico Kodak Thermo scientificde

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat....

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Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

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