Se presenta un protocolo para el establecimiento de un modelo genético de ratón de cáncer colorrectal por infección segmentaria de adenovirus y su vigilancia mediante colonoscopia de alta resolución.
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Artículo de método
Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico
En este artículo
Resumen
Resumen
A pesar de las ventajas de la fácil aplicabilidad y rentabilidad, los modelos de ratones de cáncer colorrectal basados en la inyección de células tumorales tienen limitaciones severas y no simulan con precisión la biología tumoral y la diseminación de células tumorales. Se han introducido modelos de ratón genéticamente modificados para superar estas limitaciones; Sin embargo, tales modelos son técnicamente exigentes, especialmente en órganos grandes como el colon en el que sólo se desea un solo tumor.
Como resultado, se desarrolló un modelo inmunocompetente, modificado genéticamente, de cáncer colorrectal que desarrolla tumores muy uniformes y puede usarse para estudios de biología tumoral así como para ensayos terapéuticos. El desarrollo tumoral se inicia mediante la infección quirúrgica segmentaria del colon distal con el virus adeno-cre en ratones mutantes condicionalmente compuestos. Los tumores pueden ser fácilmente detectados y monitorizados vía colonoscopia. Aquí describimos la técnica quirúrgica de la infección segmentaria adeno-cre deEl colon, la vigilancia del tumor vía colonoscopia de alta resolución y presentan los tumores colorrectales resultantes.
Introducción
El cáncer colorrectal (CRC) sigue siendo una de las principales causas de muerte relacionada con el cáncer en los países occidentales. 1 Aunque el pronóstico de los pacientes con enfermedad en estadio temprano es bueno, muchos tumores son diagnosticados en etapas posteriores en los que, a pesar de las numerosas opciones de tratamiento, el pronóstico es limitado. 2 , 3 , 4 , 5
La mayoría de los actuales modelos de CRC de ratones se basan en la implantación de células tumorales derivadas de....
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Protocolo
Los experimentos con animales presentados aquí fueron revisados y aprobados de forma independiente por un Comité institucional y gubernamental de Cuidado y Uso de Animales y se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices de la Federación de Asociaciones de Ciencia Animal de Laboratorio (FELASA). Todas las medidas posibles fueron tomadas para minimizar el sufrimiento incluyendo anestesia y analgesia o, si es necesario, eutanasia prematura.
1. Inducción local del tumor a través de la infección adenovirúrgica quirúrgica
- Preparación de animales para la cirugía
NOTA: Prácticamente cualquier muta....
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Resultados
Si se realiza adecuadamente,> 85% de los animales desarrollan tumores. La mortalidad del procedimiento quirúrgico aquí presentado es <5%, la mortalidad de la colonoscopia es prácticamente inexistente. En la mayoría de los ratones, se detecta una sola lesión; En aproximadamente el 30% se pueden detectar 2 - 3 adenomas pequeños que usualmente se fusionan a un solo tumor dentro de 2 a 3 semanas después de la inducción del tumor.
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Discusión
Mientras que son generalmente fáciles de generar y de mantener, los modelos clásicos del ratón del CRC basados en la inyección de la línea celular son artificiales y no pueden recapitulate completamente la enfermedad humana. Como consecuencia, se han desarrollado GEMMs. El primer CRC GEMM fue el ratón Apc Min , que alberga una mutación nula heterocigótica en el gen Apc, por lo tanto imitando la enfermedad hereditaria humana poliposis adenomatosa familiar (FAP). Sin embargo, los ratones Apc Min de.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo está dedicado a la memoria del profesor Moritz Koch.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Reactivos / consumibles | |||
| Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Tripsina-EDTA (0,25%, fenol-rojo) | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| solución salina normal 0,9% (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL) | Vector de transferencia de genes Core Universidad de Iowa | ||
| 15 mL, 50 mL tubos de centrífuga | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| Tubos Eppendorf 1,5 mL/ 2 mL | Sarstedt AG & Co. | 72.695.400 | |
| Placa de Petri PS 100/15 mm (estéril, Nuclon) | Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| Jeringa de 1 mL (sin volumen muerto) - Injekt-F SOLO | Braun/neoLab | 194291661 | |
| aguja de inyección de 30G | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| Analgesia / anestesia | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Medical | ||
| oxygen | Air Liquide Medical | ||
| (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - ungüento oftálmico | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| Máquina de anestesia de investigación de mesa x/O2 Flush con vaporizador de sevoflurano | Parkland Scientific | V3000PS/PK | |
| strong>Name | Company | >Número de catálogo | Comments |
| celulosa | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| Jeringa de insulina EMG 1 mL (con cánula de 30 G) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| Tubo de diámetro fino (diámetro: 0,28 mm/ diámetro: 0,61 mm) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Micro-Adson Pinzas | de ciencia fina Herramientas | 11018-12 | |
| Tijera de iris - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Portaagujas Olsen-Hegar | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| AutoClip Kit | Fine Science Tools | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (sutura quirúrgica) | Johnson & Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| Abrazadera vascular Micro Serrefine curvada | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Clips de resorte Fogarty | Edwards | CDSAFE 6 | |
| Placa calefactora 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - Afeitadora de pelo | Aesculap - Braun | - | |
| Name | Company | >Número de catálogo | >Comments |
| Colonoscopia | |||
| Cold Light Fountain XENON 175 SCB Karl | Storz | 20132101-1 | Karl Storz Cable |
| fibra óptica | Karl Storz | 69495NL | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM Cabezal de cámara de tres chips | Karl Storz | 20221030 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM SLII Unidad de control de cámara | Karl Storz | 20223011-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Monitor de pantalla plana de 15" EndoVue | Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Mainz Mainz |
| Telescopio HOPKINS Straight Forward diámetro 1,9 mm; longitud 10 cm esterilizable en autoclave transmisión de luz de fibra óptica incorporada | Karl Storz | 64301AA | |
| funda de protección y examen | Karl Storz | 61029C |
Referencias
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
- Bork, U., et al.
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