Se trata de una dieta alta en grasas alimentación protocolo para inducir obesidad en Drosophila, un modelo de mecanismos moleculares fundamentales comprensión implicados en la lipotoxicidad. También proporciona un análisis de alto rendimiento triacylglyceride para medir la acumulación de grasa en Drosophila y potencialmente otros modelos (insectos) en diversas condiciones de dieta, ambientales, genéticas o fisiológicas.
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Artículo de método
Alimentación dieta alta en grasas y alto rendimiento Triacylglyceride ensayo en Drosophila Melanogaster
En este artículo
Resumen
Resumen
Enfermedad cardíaca es la causa número una de muerte humana en todo el mundo. Numerosos estudios han demostrado fuertes conexiones entre la obesidad y fallo cardíaco en los seres humanos, pero se necesitan más herramientas y esfuerzos de investigación para dilucidar mejor los mecanismos implicados. Para más de un siglo, el modelo genético altamente manejable de Drosophila ha sido fundamental en el descubrimiento de genes clave y vías moleculares que demostró ser altamente conservadas entre especies. Muchos procesos biológicos y mecanismos de la enfermedad se conservan funcionalmente en la marcha, como el desarrollo (p. ej., plan de cuerpo, corazón), cáncer y enfermedades neurodegenerativas. Recientemente, el estudio de la obesidad y patologías secundarias, tales como enfermedades del corazón en organismos modelo, ha desempeñado un papel muy importante en la identificación de los principales reguladores implicados en el síndrome metabólico en los seres humanos.
Aquí, nos proponemos utilizar este organismo modelo como una herramienta eficaz para inducir la obesidad, es decir, la acumulación excesiva de grasa y desarrollar un protocolo eficiente para monitorear el contenido de grasa en forma de acumulación de TAGs. Además de altamente conservado, pero menos complejo genoma, la mosca también tiene una vida útil corta para la experimentación rápida, combinada con la rentabilidad. Este documento proporciona un protocolo detallado para la alimentación de la dieta de grasa alto (HFD) en Drosophila para inducir a la obesidad y un análisis de alto rendimiento triacylglyceride (etiqueta) para medir el aumento asociado en contenido de grasa, con el objetivo de ser altamente reproducibles y eficiente para la detección genética o química a gran escala. Estos protocolos ofrecen nuevas oportunidades para eficiente investigar mecanismos regulatorios involucrados en la obesidad, así como proporcionar una plataforma estandarizada para la investigación de descubrimiento de drogas para la prueba rápida del efecto de fármacos candidatos en el desarrollo o prevención de la obesidad, diabetes y enfermedades metabólicas relacionadas.
Introducción
Estamos en un momento donde la obesidad y sus cargas económicas asociadas, es un problema mundial1. Dos de cada tres estadounidenses tienen sobrepeso u obesidad con cardiopatías relacionadas, la principal causa de muerte en la población adulta de2. Se necesitan nuevos métodos eficientes para investigar adecuadamente los componentes genéticos y moleculares implicados en la regulación del síndrome metabólico utilizando organismos modelo. Por esta razón, elegimos el modelo de Drosophila mosca de la fruta porque comparte los procesos biológicos más básicos con los mamíferos, como ratones y seres humanos
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Protocolo
1. HFD protocolo de alimentación
tabla 1. Receta de comida mosca.
Esta tabla resume los diferentes ingredientes utilizados para preparar nuestro control alimentos. Una vez hecho, 10 mL del alimento se vierte en frascos, enfriado y almacenado a 4 ° C para almacenamiento a largo plazo.
- Preparación de HFD
- para hacer 1 kg de alimentos grasa, pesan 700 g de moscas normales hecha de antemano de los alimentos (ver tabla 1) y 300 g de aceite de coco en dos envases ....
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Resultados
En D. melanogaster, como es el caso con otras especies Existe dimorfismo sexual entre machos y hembras22. Es bien sabido que las hembras son más grandes, con más grasa en su abdomen que los machos22. Para probar la efectividad de nuestro protocolo, realizamos ensayos de etiqueta para determinar las diferencias en el contenido de la etiqueta entre machos y hembras de laboratorio estándar wildtype (w1118) vuela. Lo.......
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Discusión
La inducción de la obesidad en ratones puede tomar meses19,20. En moscas, este HFD protocolo de alimentación permite la inducción de la excesiva acumulación de grasa en cuestión de días o menos, causando aumento en la acumulación de grasa solamente después de 18 h (ver figura 2). HFD de alimentación con el protocolo descrito aumenta glucosa contenido 12 y disminuye Bmm lipasa y de la expresión de PGC-.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Nos gustaría dar las gracias a Erika Taylor para la edición de este manuscrito. Este trabajo fue financiado por subvenciones de los institutos nacionales de salud (P01 HL098053, P01 AG033561 y HL054732 R01) a R.B., un suplemento de investigación post-doctoral (R01 HL085481) y compañerismo (AAUW) a S.B.D. y becas de la American Heart Association a S.B.D. y R.T.B.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Talboys Cuentagotas/Dispensador de cuentas | Talboys | #: 930150 | |
| Talboys Homogeneizador de Alto Rendimiento | Talboys | #: 930145 | |
| bolas de molienda, acero inoxidable | OPS Diagnostics, LLC | # GBSS 156-5000-01 | 5000 bolas |
| Masterblock 96 Microplacas profundas de pozos | Greiner Bio-One | # T-3058-1 | caja de 80 placas |
| Greiner Microplaca de 96 pocillos de fondo plano | Sigma Aldrich | # M4436 | 40 placas |
| Greiner CapMat para el sellado de placas de pocillos múltiples | Sigma Aldrich | # C3606 | 50 placas de sellado |
| Reservorios de reactivos& nbsp; | Thomas Scientific | # 1192T71 | 12/PK |
| Thermo Scientific Finnpipeta 4661040 | Thermo Scientific | # 4661040 | 1-10 ul Multipipeta |
| Thermo Scientific Finnpipeta 4661070 | Thermo Scientific | # 4661070 | 30-300ul multipipeta |
| Thermo Scientific Finnpipeta 4661020 | Thermo Scientific | #4661020 | 10-100ul multipipeta |
| multicanal Puntas | Denville Scientific Inc | # P3131-S | para pipeta de 10 uL |
| Puntas multicanal | Denville Scientific Inc | # P3133-S | para pipeta de 200 uL |
| Puntas multicanal | Denville Scientific Inc | #P1125 | para pipeta de 100 uL |
| Pinzas | Roboz Quirúrgico | # 5 Dumonts | Pinza superfina |
| Mettler Toledo Excellence XS Balanza analítica Mfr# XS64 | Cole-Parmer expertos científicos | # EW-11333-00 | |
| Metler Toledo Excellence XS Balanza de carga superior | Cole-Parmer expertos científicos | # EW-11333-49 | |
| Microplaca de 96 pocillos Centrífuga | Hettich Zentrifugen | # Microplaca Rotina 420R | |
| Lector | Dispositivos moleculares | # SpectraMax 190 | |
| Lab-Line Bench-Top Orbit Environ Shaker Incubadora | Biostad | # 3527 | |
| Reactivo de triglicéridos infinitos | Thermo Scientific | # TR22421 | |
| Estándar de triglicéridos | Stanbio | #2103 - 030 | |
| Inicio rápido Bradford Ensayo de proteínas | Bio-RAD | # 500-0205 | 1x reactivo de colorante |
| Aceite de coco | Nutiva | # 692752200014 | 15 0z tarro |
| PBS 10X | Thermo Scientific | # AM9625 | 500 ml |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | # 9002-93-1 | |
| Lámina permeable al gas | Macherey-Nagel | # | 740675 50 piezas |
| de filtro Papel | VWR | # 28317-241 | Paquete de 100 |
| viales de | DrosophilaGenesee Scientific | Cat #: 32-116SB | |
| Inicio Rápido Albúmina Suero Bovino Estándar | Bio-Rad | # 5000206 | |
| Anestésico FlyNap | Carolina | # 173025 | 100 mL |
| Kimwipes Low-Lint | Uline | # S-8115 | 1 capa, 4.4 x 8.4" |
Referencias
- Ng, M., et al. Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013. Lancet. 384, 766-781 (2014).
- Murphy, S. L., et al. Mortality in the United States, 2014. NCHS data brief, no 229. , Available from:
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Reimpresiones y permisos
