Declaración de ética: El Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Estatal de Mississippi aprobó todas las técnicas de captura, manipulación y marcado bajo los protocolos 04-068, 07-036, 10-033 y 13-034.
1. Establecer sitios de captura, inmovilizar y transportar ciervos de cola blanca silvestres
- Identifique propiedades públicas y privadas inscritas en el Programa de Asistencia para la Gestión del Venado22 y establezca al menos 29 sitios de captura en tres regiones fuente en Mississippi, EE. UU.
- Identifique varios lugares de captura dentro de cada región fuente para asegurar que se capture el rango de variación genética presente en la población regional.
- Nota: En este caso, las regiones fuente incluyeron el Delta, que comprende casi el 17 % del área total de tierra en Mississippi, EE. UU., y se considera una región de suelo de alta calidad con la agricultura como uso principal del suelo23,24. Todos los animales de estudio fueron capturados en esta región dentro de la distribución de O. v. virginianus25. Otras regiones incluyeron la región de Loess Delgado (Loess Delgado superior e inferior combinado), que comprende casi el 14 % del área total de tierra en Mississippi, EE. UU., y se considera una región de suelo de calidad media. La agricultura también es un uso principal del suelo en la región de Loess Delgado, aunque no tan predominante como en el Delta23,24. Todos los animales de estudio fueron capturados en esta región dentro de la distribución de O. v. virginianus21. Por último, la región de suelos de la Llanura Costera Inferior (LCP) comprende casi el 22 % de Mississippi y se clasifica como una región de suelo de baja calidad. Los usos principales del suelo en la LCP son la producción de madera de pino y el pastoreo de ganado23,24. La LCP también se superpone con la distribución geográfica de O. v. osceola; cuatro de las seis poblaciones fuente se encontraban a menos de 21 km de esta distribución25. Esta subespecie fue descrita como más pequeña que O. v. virginianus26.

Figura 1: Poblaciones de Origen. Regiones fisográficas donde se capturaron hembras preñadas y cervatillos en Mississippi, EE. UU. Esta figura ha sido modificada a partir de la referencia31. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- Seleccione sitios potenciales de captura que cumplan los siguientes criterios: características del hábitat favorables para el movimiento de los ciervos, proximidad a caminos para facilitar el acceso y distribución a lo largo del área de estudio.
NOTA: Los sitios de captura deben permitir el ocultamiento del técnico de captura.
- Use cebos con aproximadamente 10 kg de maíz desgranado para atraer a los ciervos y evalúe su uso mediante el consumo del cebo y las fotografías de ciervos tomadas por cámaras sensibles al movimiento. Cambie a sitios alternativos si los ciervos no acuden a los sitios cebados dentro de los 5-7 días.
- Durante los eventos de captura, siéntese en un "puesto" oculto.
- Coloque el puesto aproximadamente a 20 m a sotavento del montón de cebo, teniendo en cuenta la dirección predominante del viento para que los ciervos que se acerquen al cebo tengan menos probabilidades de oler al técnico de captura.
NOTA: Se prefieren fuertemente los puestos elevados, y se requiere el uso de arneses de seguridad. Existen varias variantes de puestos disponibles en diversas fuentes comerciales, y su uso varía según la preferencia personal. Por ejemplo, un puesto fijo incluye asiento y escalera para acceder, sujeto a un árbol mediante correas. Los puestos portátiles de escalada pueden ser transportados por el técnico de captura y permiten mayor movilidad, ya que este puede elegir un árbol específico al llegar al sitio de captura. Los puestos portátiles de escalada solo pueden usarse en árboles rectos sin ramas hasta la altura deseada.
- Utilice una pistola de dardos acoplada a un dardo de telemetría de radio de 3 cc para administrar una mezcla de tiletamina HCl (4,4 mg/kg) y xilazina HCl (2,2 mg/kg).
- Planifique los esfuerzos de captura para que coincidan con el ciclo típico de actividad crepuscular de los ciervos27. Comience cada intento de captura 2-3 h antes del atardecer.
- Continúe los eventos de captura durante 2-3 h después del atardecer, utilizando gafas de visión nocturna y un láser de punto rojo para la colocación del disparo si no se captura a los ciervos durante las horas de luz diurna.
- Dispare a los ciervos cuando estén de costado y estacionarios.
NOTA: La nalga del ciervo es el objetivo porque tiene tejido muscular abundante y está alejada del corazón y los pulmones.
- Espere aproximadamente 15 min para que los animales dardados (corzos de seis meses de edad, de cualquier sexo, o hembras adultas preñadas) se inmovilicen completamente antes de localizarlos con equipo de telemetría direccional.
- Confirme que los individuos están sedados comprobando los reflejos oculares (parpadeo). Luego, aplique una pomada oftálmica en los ojos y venda los ojos del ciervo para reducir el estrés.
NOTA: La pérdida de termorregulación es una consecuencia de la inmovilización.
- Utilice un termómetro rectal para evaluar la temperatura corporal tras la recuperación. Caliente al ciervo con mantas térmicas si su temperatura está por debajo de 37,7 °C. Enfríe al ciervo con bolsas de hielo si su temperatura está por encima de 40,0 °C.
- Coloque al ciervo en posición esternal sobre una camilla tipo militar y trasládelo desde el lugar de captura hasta un remolque cerrado.
- Después de colocar al ciervo en el remolque, invierta los efectos de la xilazina HCl con 0,125 mg/kg de yohimbina HCl28.
- Transporte a todos los ciervos capturados hasta la instalación cautiva deseada (por ejemplo, Unidad Conmemorativa de Ciervos Rusty Dawkins de la Universidad Estatal de Mississippi; MSU Deer Unit) y manténgalos separados según su región de origen.
2. Instalaciones de cautiverio y prácticas generales de manejo de animales de investigación
NOTA: La Unidad de Ciervos de MSU está subdividida en cinco corrales de 0,4 a 0,8 ha.
- Cubra todos los lados de cada corral con tela de sombra para actuar como barrera visual y física entre corrales. La tela de sombra ayuda a reducir lesiones y proporciona sombra durante los meses de verano.
- Coloque 1-2 puestos elevados tipo caja en un extremo de cada corral para facilitar los eventos de dardos durante la recolección de datos.
- Coloque dos comederos tipo bebedero en extremos opuestos de cada corral para reducir la competencia por la comida entre los ciervos. También proporcione un bebedero de agua en cada corral.
- Proporcione a los ciervos una dieta de alta calidad (peletes para ciervos con 20% de proteína bruta) ad libitum.
NOTA: En este caso, los forrajes adicionales disponibles dentro de los corrales incluyeron (Trifolium spp) y festuca (Festuca spp), junto con gramíneas y hierbas espontáneas.
- De estar presentes, mantenga los forrajes disponibles dentro de los corrales utilizando una mezcla de herbicidas para controlar malezas de hoja ancha y gramíneas, aplicando las tasas indicadas en las etiquetas respectivas.
NOTA: Es probable que se necesiten instalaciones fuera del campus para alojar machos de ≥5,5 meses de edad. Estas instalaciones consistieron en dos corrales de 0,7 ha en cada una de tres propiedades, con prácticas de manejo similares a las del Unidad de Ciervos de MSU.

Figura 2: Ubicaciones de las Instalaciones de Confinamiento. Área de estudio donde se encontraban las instalaciones satélite y la Unidad de Ciervos de la Universidad Estatal de Mississippi (MSU). Las áreas sombreadas indican los condados de Oktibbeha (A), Noxubee (B), Attala (C), Scott (D) y Copiah (E), en Mississippi, EE. UU. Esta figura ha sido modificada a partir de la referencia34. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
3. Control de parásitos y enfermedades
- Monitoree a los animales de investigación para detectar parásitos de gusanos redondos (Strongyloides spp) mediante flotación fecal, midiendo los parásitos como huevos por gramo (EPG).
- Si están presentes en niveles altos, realice control de parásitos administrando un vermífugo en forma de gránulos (ingrediente activo fenbendazol) a una dosis de aproximadamente 0,77 kg de gránulos por cada 22,7 kg de alimento durante el mes de mayo.
- Si los niveles de parásitos permanecen altos tras el tratamiento inicial, utilice un tratamiento tópico con ivermectina (5 mg/mL)29, mezclado a una proporción de 2 mL/0,45 kg, y adminístrelo a los animales a razón de 0,45 kg de alimento tratado por cada 45,4 kg de masa corporal.
NOTA: La enfermedad hemorrágica epizoótica es una enfermedad viral a veces letal transmitida por un mosquito picaflor (Culicoides spp) durante los meses de verano y otoño. Si está presente, trate la instalación de investigación con insecticida (insecticida al 5% de volumen ultra bajo) de 2 a 3 veces por semana desde el 1 de julio hasta el 1 de octubre para reducir la prevalencia de los vectores entre los animales de investigación. Rocíe este insecticida dentro de cada corral y alrededor del perímetro de la instalación aproximadamente 90 minutos antes de la puesta oficial del sol mediante un generador de niebla. Los métodos preferidos para el control de parásitos y enfermedades son únicos para cada instalación de cautiverio. Debe consultarse con veterinarios durante cualquier investigación con fauna silvestre en cautiverio para garantizar la salud y seguridad de los animales.
4. Recolección de datos

Figura 3: Recolección de Datos de Cérvidos Recién Nacidos. Medición de la longitud del pie trasero de un cervatillo recién nacido en la Unidad de Ciervos Memorial Rusty Dawkins de la Universidad Estatal de Mississippi, en el condado de Oktibbeha, Mississippi, EE. UU. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- Busque crías diariamente en la instalación de cautiverio durante la temporada de parto.
- Marque de forma única a las crías recién nacidas con etiquetas plásticas medianas en las orejas, utilizando un aplicador de etiquetas con antibiótico aplicado en el extremo macho de la etiqueta para prevenir posibles infecciones. Coloque la etiqueta aproximadamente en el centro de la oreja de la cría.
- Mida la masa corporal (hasta 0,01 kg) con una balanza digital colgante y mida la longitud del pie trasero y la longitud total del cuerpo (hasta el milímetro más cercano).
- Recoja muestras de pelo y envíelas a un sitio remoto para la asignación de parentesco (véase la Tabla de Materiales).
NOTA: La asignación de parentesco se realizó mediante ADN, basándose en una base de datos propietaria, no estadística y con lenguaje de consulta estructurado personalizado. En la comparación de alelos por pares, el sitio remoto de asignación de parentesco determinó el parentesco al excluir a todos los padres excepto un macho y una hembra, basándose en un alelo compartido de cada progenitor en todos los loci analizados (B. G. Cassidy, comunicación personal). Este método de asignación de parentesco también se utilizó en investigaciones previas realizadas con ciervos cola blanca en cautiverio30,31.
- Administre 2 cc de toxoide contra Clostridium perfringens tipos C y D y antitoxina contra Clostridium perfringens tipos C y D por vía subcutánea, y administre 0,3 cc/kg de ivermectina en propilenglicol (Mississippi State University Veterinarian School, Mississippi, USA) por vía oral a cada cría.
- Inmovilice químicamente a los machos adultos (≥1,5 años) durante octubre y noviembre para la recolección de datos.
- Inmovilice a los adultos encerrados utilizando la misma combinación de clorhidrato de tiletamina y clorhidrato de xilacina empleada para la captura de animales silvestres (paso 1.4).
- Durante los eventos de sedación, lleve al técnico que realizará el disparo hasta el extremo del corral donde se encuentran los puestos elevados. Ubique un solo técnico en cada uno de los dos puestos.
- El individuo que acompañó al técnico hasta el puesto debe regresar al extremo opuesto del corral.
NOTA: Los ciervos se alejan de estos técnicos y se colocan frente a los puestos, donde los técnicos están en posición de realizar disparos éticos sobre cada ciervo.
- Realice disparos sobre los ciervos cuando estén de costado y estacionarios (sección 1.4).
- Espere aproximadamente 15 minutos a que los animales alcanzados por el dardo queden completamente inmovilizados antes de acercarse.
- Confirme que los individuos están sedados comprobando los reflejos oculares (parpadeo). Aplique una pomada oftálmica en los ojos y venda los ojos del ciervo para reducir el estrés.
- Después de que los técnicos hayan sedado con éxito a un ciervo individual, supervise las constantes vitales del animal.
- Utilice un termómetro rectal para evaluar la temperatura corporal tras la recuperación. Caliente al ciervo con mantas calientes si su temperatura está por debajo de 37,7 °C. Enfríe al ciervo con paquetes de hielo si su temperatura está por encima de 40,0 °C.
- Cargue al ciervo en una camilla de estilo militar y trasládelo mediante un vehículo todo terreno a un área predeterminada de recolección de datos.
- Una vez trasladado, registre las mismas mediciones morfométricas tomadas al nacer (paso 4.1).
- Mida la masa corporal (hasta 0,01 kg) con una balanza digital colgante y mida la longitud del pie trasero y la longitud total del cuerpo (hasta el milímetro más cercano).
NOTA: Los ciervos individuales reaccionan de manera diferente a la combinación de fármacos utilizada durante los eventos de sedación, por lo que debe administrar aproximadamente 0,1-0,3 cc de la mezcla de clorhidrato de tiletamina y clorhidrato de xilacina (según la masa corporal de cada ciervo) si un individuo sale de la sedación antes de que finalice la recolección de datos.
- Administre cantidades adecuadas según el tamaño de antibiótico, ivermectina, una vacuna contra clostridiosis y una vacuna contra leptospirosis a todos los ciervos después de que sean trasladados al área de recolección de datos (véanse las secciones 1 y 3).
- Realice tres mediciones de astas en machos adultos utilizando una cinta métrica para astas mientras el animal está sedado.
- Mida la separación interna (distancia más ancha entre las ramas principales), la circunferencia basal (diámetro más pequeño ubicado entre el reborde y la primera punta G1) y la longitud de la rama principal (distancia desde la base del asta hasta la punta de la rama principal) de los astas antes de su extracción.
- Extraiga los astas aproximadamente 3 cm por encima del reborde utilizando una sierra de vaivén. No extraiga astas a menos de 3 cm del reborde.

Figura 4: Recolección de Datos de Machos Adultos. Extracción de astas mediante sierra alternativa en un ciervo cola blanca macho adulto en cautiverio. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
- Después de recopilar todos los datos del individuo sedado, coloque el ciervo en el corral adecuado y administre ya sea 0,125 mg/kg de clorhidrato de yohimbina28 o 4,0 mg/kg de clorhidrato de tolazolina32 para revertir los efectos del clorhidrato de xilazina. Monitoree a los individuos para asegurarse de que permanezcan en posición esternal hasta que salgan de la sedación y estén completamente alerta.
NOTA: Si ocurren complicaciones y los animales deben ser sacrificados, entonces la eutanasia mediante dislocación cerebral con un disparador de perno y la sección de la vena yugular son métodos éticos para sacrificar al animal.
- Lleve los astas a un área designada para terminar de medir su tamaño.
- Mida cada punta individual que sobresale del asta principal (G1, G2, G3, etc.) y los puntos anormales adicionales con ayuda de un alambre.
NOTA: Los puntos que no tienen un contrapunto correspondiente en el asta principal opuesta o que no son consistentes con la definición de un conjunto típico de astas están definidos por el Boone and Crockett Club33.
- Envuelva el alambre alrededor del punto donde la punta intersecta el asta principal y marque ese punto como referencia.
- Mida desde este punto de referencia hasta la punta de cada punta y repita para cada una.
- Obtenga las mediciones restantes de circunferencia identificando el punto más estrecho entre las puntas G1 y G2 (circunferencia H2), entre las puntas G2 y G3 (circunferencia H3), y entre las puntas G3 y G4 si están presentes (circunferencia H4).
- Si la punta G4 no está presente, mida la distancia entre el punto medio de la punta G3 y el extremo del asta principal, y mida la circunferencia H4 en el punto medio.
- Realice menos de cuatro mediciones de circunferencia cuando los astas tengan menos de tres puntas.
NOTA: Por ejemplo, un asta principal con dos puntos típicos incluye solo tres mediciones de circunferencia. Los individuos pueden utilizar otras guías (Safari Club International) para calcular el tamaño de los astas; sin embargo, deben utilizarse métodos consistentes para cada animal para obtener comparaciones válidas.
- Después de realizar todas las mediciones, calcule una puntuación de astas similar a la puntuación Boone y Crockett bruta atípica33.
- Pese los astas con una precisión de 0,1 g utilizando una balanza digital científica y asigne una masa crítica mínima de 1 g a los animales de primer año con astas más cortas que 3 cm.
- Inmovilice químicamente a los juveniles encerrados a una edad aproximada de 5,5 meses utilizando los mismos métodos que para los adultos (sección 4.2) y marque a los juveniles con una etiqueta plástica grande en la oreja (paso 4.1.1).
- Utilice las mismas tasas de mezcla de fármacos para inmovilizar a los adultos en cautiverio que las usadas para inmovilizar ciervos silvestres (sección 1).
- Recopile las mismas mediciones obtenidas al nacer (paso 4.1.2) y administre los mismos profilácticos que a los adultos (sección 4.2).
NOTA: Después de recopilar todos los datos, transporte a cada macho juvenil a su instalación satélite asignada aleatoriamente mediante remolque.
5. Producción de descendencia de primera y segunda generación
- Clasifique las crías de seis meses de edad capturadas en estado silvestre y la descendencia nacida en las instalaciones de cautiverio a partir de hembras capturadas en estado silvestre como individuos de primera generación.
- Durante la temporada de reproducción, coloque dos machos con 7-16 hembras para obtener una proporción sexual promedio de un macho por cada ocho hembras.
NOTA: Seleccione los machos reproductores de instalaciones satélite basándose en su apariencia física, ya que los machos más sanos (con astas más grandes y mayor tamaño corporal) tienen mayor probabilidad de cubrir a las hembras durante toda la temporada de reproducción sin sufrir lesiones debido al comportamiento agresivo de los machos en esta época.
- Permita que los ciervos se reproduzcan únicamente con otros individuos procedentes de la misma región de origen (por ejemplo, machos Delta con hembras Delta, machos Thin Loess con hembras Thin Loess, y machos LCP con hembras LCP).
- Clasifique a los ciervos concebidos por padres de primera generación como descendencia de segunda generación. Críe a estos individuos en cautiverio desde su nacimiento y alimente con la misma dieta de alta calidad que reciben sus padres.
NOTA: Las hembras pueden producir descendencia durante varios años, pero normalmente con sementales diferentes cada año. Recolecte los mismos datos en la descendencia de segunda generación que en los individuos de primera generación y capturados en estado silvestre.