Los mosquitos Aedes aegypti infectados con Wolbachia están siendo liberados en las poblaciones naturales para suprimir la transmisión de arbovirus. Se describen métodos para posterior Ae. aegypti con Wolbachia infecciones en el laboratorio para los experimentos y la liberación del campo, tomar precauciones para reducir al mínimo la selección y adaptación de laboratorio.
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Artículo de método
Mantener los mosquitos Aedes aegypti infectados con Wolbachia
En este artículo
Resumen
Resumen
Los mosquitos Aedes aegypti infectados experimentalmente con Wolbachia se están utilizando en los programas para controlar la propagación de arbovirus como el dengue, el chikungunya y Zika. Wolbachia-mosquitos infectados pueden ser lanzados en el campo o bien reducir el tamaño de la población a través de cruzamientos incompatibles o transformar las poblaciones de mosquitos que son refractarios a la transmisión del virus. Para que estas estrategias tener éxito, los mosquitos liberados en el campo del laboratorio deben ser competitivos con los mosquitos nativos. Sin embargo, mantener los mosquitos en el laboratorio resulta en endogamia, deriva genética y adaptación de laboratorio que puede reducir su aptitud en el campo y puede confundir los resultados de experimentos. Para probar la idoneidad de diferentes infecciones de Wolbachia para el despliegue en el campo, es necesario mantener los mosquitos en un entorno de laboratorio controlado a través de múltiples generaciones. Se describe un protocolo simple para mantener los mosquitos Ae. aegypti en el laboratorio, que es conveniente para ambos Wolbachia-mosquitos infectados y tipo salvaje. Los métodos minimizan la adaptación de laboratorio y aplicación exogamia para aumentar la relevancia de los experimentos a los mosquitos de campo. Además, las colonias se mantienen en condiciones óptimas para maximizar su aptitud para los lanzamientos de campo abierto.
Introducción
Los mosquitos Aedes aegypti son responsables para la transmisión de los arbovirus más importantes del mundo, incluyendo dengue, Zika y chikungunya1. Estos virus se están convirtiendo en una amenaza creciente para la salud global, como la distribución generalizada de Ae. aegypti en las zonas tropicales continúa ampliando2,3,4. Hembra de Ae. aegypti preferentemente se alimentan de sangre humana5 y así tienden a vivir en proximidad cercana a los seres humanos, particularmente en las zonas urbanas donde la....
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Protocolo
Sangre alimentación de los mosquitos en seres humanos fue aprobada por la Universidad de Melbourne Comité de ética humana (aprobación #: 0723847). Todos los voluntarios siempre informaron consentimiento.
1. larvas de crianza
Nota: Los mosquitos se llevan a cabo en 26 ± 0,5 ° C y 50-70% de humedad relativa, con un fotoperiodo de 12:12 h (luz: obscuridad) para este protocolo de mantenimiento de la Colonia. Estas condiciones son similares a las condiciones climáticas promedio en Cairns, Australia y dentro del rango térmico óptimo para la supervivencia de Ae. aegypti y desarrollo44....
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Resultados
Figura 4 muestra los efectos de la nutrición subóptima en el desarrollo de larvas de Ae. aegypti . Cuando contenedores cuentan con 0,25 mg de alimento por larva por día o menos, aumenta el tiempo de desarrollo para hombres y mujeres, y menos sincrónico que en contenedores cuenta con 0.5 mg de alimento. Si no se proporciona alimentación adecuada durante toda la duración del desarrollo larvario, esto podría tener un impacto adverso en el programa de ma.......
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Discusión
Siguiendo el protocolo que presentamos para el mantenimiento de Wolbachia-infectados Ae. aegypti deben garantizar que los mosquitos sanos de una calidad constante se producen para los experimentos y abren notas de campo. A diferencia de otros protocolos que prioricen la producción de grandes cantidades de mosquitos (véase la referencia57), los métodos se centran en maximizar su aptitud, tanto dentro de las generaciones mediante la implementación de las condiciones de cría relajad.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros que compiten.
Agradecimientos
Reconocemos Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina y Clare Doig por sus contribuciones al desarrollo de nuestros métodos de mantenimiento de la Colonia y Johnson tres revisores anónimos por sus sugerencias que ayudaron a mejorar el manuscrito. Nuestra investigación es apoyada por un programa de subvención y beca de AAH del nacional salud y donación de Consejo de investigación médica y una traducción de la Wellcome Trust. PAR es un recipiente de un australiano gobierno investigación beca programa de formación.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tipo silvestre Aedes aegypti | Recolectado de ubicaciones de campo en Queensland, Australia, ver Yeap and others39 para más detalles | ||
| w Mel-infected Aedes aegypti | Proporcionado por la Universidad de Monash. Consulte Walker and others23 para obtener información sobre la cepa | ||
| w infectada con AlbB Aedes aegypti | Proporcionado por la Universidad de Monash. Consulte Xi and others21 para obtener información sobre la cepa | ||
| w MelPop-infected Aedes aegypti | Proporcionado por la Universidad de Monash. Consulte McMeniman et al22 para obtener información sobre la cepa | ||
| Levadura seca instantánea | Lowan | Estimula la eclosión de huevos. Se encuentra en las tiendas de comestibles generales. Se pueden utilizar otras marcas | |
| Tarrina de plástico de 5 L | Quadrant | Q110950 | Se utiliza para la eclosión y la cría de larvas. Se pueden utilizar otros productos |
| Alimento para peces (Tetramin Tropical Tablets) | Tetra | 16152 | Se proporciona a las larvas como fuente de alimento. Dirección web: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE |
| Recipientes | utilizados para la cría de larvas. Cualquier recipiente de plástico de más de 500 ml debe ser adecuado | ||
| Pipeta | Se utiliza para transferir larvas y pupas entre contenedores. Dirección web: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez | ||
| Contador clicker | RS Pro | 710-5212 | Se utiliza para ayudar en el recuento de larvas, pupas y huevos. Dirección web: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y |
| Bandejas de cría | Gratnells | Se utiliza para la cría de larvas. Dirección web: http://www.gratnells.com | |
| Malla | Se utiliza para transferir larvas y pupas a recipientes de agua dulce. Se pueden utilizar otras marcas. Dirección web: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white | ||
| Jaulas | BugDorm | DP1000 | Alberga mosquitos adultos. Se pueden utilizar productos alternativos. Dirección web: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html |
| vaso de plástico de 35 ml | Huhtamaki | AA272225 | Se utiliza para proporcionar agua o sacarosa a los mosquitos adultos. Otras marcas pueden usar: |
| Tapa de vaso de plástico de 35 mL | Huhtamaki | GB030005 | Se utiliza para proporcionar sacarosa a los mosquitos adultos. Se pueden utilizar otras marcas |
| Lana de algodón | Cutisoft | 71841-13 | El algodón húmedo se proporciona como fuente de agua para los adultos. Se pueden utilizar otras marcas |
| : Azúcar | : Se proporciona como fuente de azúcar para los mosquitos adultos. Se encuentra en tiendas de comestibles generales | ||
| Rope | M Recht Accesorios | C323C/W | Se utiliza para proporcionar solución de sacarosa a adultos. Se pueden utilizar otras marcas. Dirección web: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/ |
| Vaso de plástico (grande) | Utilizado como contenedor de oviposición. Cualquier vaso de plástico que contenga 100 ml de agua debe ser adecuado | ||
| Papel de lija | Norton Master Painters | CE015962 | proporcionado como sustrato de oviposición. Se pueden usar productos alternativos, pero usamos esta marca porque es relativamente inodoro. Los colores más claros se utilizan para contrastar con los huevos. Dirección web: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html |
| Papel de filtro | Whatman | 1001-150 | Utilizado como sustrato de oviposición alternativo. Se pueden utilizar otras marcas: |
| Guantes de látex | SemperGuard | Z560979 | Previene las picaduras de mosquitos en las manos cuando se alimenta de sangre. Se pueden utilizar otras marcas. Dirección web: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/ |
Referencias
- Mayer, S. V., Tesh, R. B., Vasilakis, N. The emergence of arthropod-borne viral diseases: A global prospective on dengue, chikungunya and zika fevers. Acta Trop. 166, 155-163 (2017).
- Campbell, L. P., et al.
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Reimpresiones y permisos
