Inyección de colorante azul de metileno en la pelvis renal facilita la evaluación de los defectos de obstrucción urinaria cruce durante el desarrollo embrionario las vías urinarias del ratón. Aquí, se describe un protocolo para la inyección de colorante azul de metileno en la pelvis renal.
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Artículo de método
Evaluación defectos de obstrucción urinaria cruce por la inyección de tinte de azul de metileno
En este artículo
Resumen
Resumen
Defectos de la obstrucción urinaria cruce son anomalías congénitas inducción de hidronefrosis e Hidrouréter. Defectos de obstrucción urinaria murino cruce pueden evaluarse mediante el seguimiento flujo de tinte de azul de metileno dentro del sistema urinario. Se inyecta azul de metileno en la pelvis renal de riñones embrionarios perinatales y flujo del tinte es monitoreado desde la pelvis renal del riñón por el uréter y en el lumen de la vejiga después de aplicar presión hidrostática. Acumulación de tinte será evidente en el lumen de la vejiga del tracto urinario perinatal normal, pero será limitada entre la pelvis renal y el punto final de un uréter anormal, si se producen obstrucciones del tracto urinario. Este método facilita la confirmación de obstrucción de vías urinarias cruce y visualización del hydronephrosis y del hydroureter. Este manuscrito describe un protocolo para la inyección de tinte de azul de metileno en la pelvis renal para confirmar obstrucciones de cruce de las vías urinarias.
Introducción
El sistema urinario consiste en un par de riñones y uréteres comunes vejiga y uretra. La función principal del sistema urinario es mantener la homeostasis del cuerpo al administrar el equilibrio de agua y electrolitos de la sangre. Los riñones filtran la sangre para control las concentraciones de electrolitos y equilibrio acido-base y producen orina para excretar el exceso de agua y residuos incluidos los solutos y metabolitos. Orina es transportada a través del uréter de la pelvis renal del riñón a la bladderin una manera unidireccional donde se almacenan y finalmente eliminado a través de la uretra1.
Los uréteres s....
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Protocolo
ratones (Wnt5a flox / flox ratones (Wnt5a tm1.1Tpy) y la línea Dll1Cre, modelo UVJO) 7 fueron manejados según pautas de NIH para el cuidado y uso de animales de laboratorio y estudió con un protocolo aprobado por el NCI Frederick Animal cuidado y uso.
1. preparación de la solución de colorante azul de metileno
- medir 0,1 g de azul de metileno en polvo.
- Disolver el azul de metileno en solución salina normal 10 mL o 1 x de tampón fosfato salino (PBS) completamente por Vortex.
- Filtro con un filtro de jeringa (tamaño del poro de la membrana 0.45µm) par....
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Resultados
Los riñones y sistema urinario inferior se encuentran dorsal a la mayoría de los otros órganos internos como el hígado y el intestino. Después de quitar estos otros órganos internos, un par de riñones y los uréteres y la vejiga de una sola son visibles (figura 1A). Sobre disección exitosa, fluirá el colorante inyectado en la pelvis renal del riñón en la vejiga vía el uréter. La pelvis renal es la forma de embudo parte proximal dilatada del uréter en el riñón........
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Discusión
Riñones de ratón son funcionales a partir de las E16.5 y una prueba de inyección de tinte es teóricamente posible a partir de este momento. Sin embargo, el riñón es demasiado pequeño para ser inyectada con la solución de tinte y fenotipos como hidronefrosis Hidrouréter no se observan claramente puesto que estos fenotipos son un efecto secundario de orina acumulado debido al transporte anormal de la orina. Estos fenotipos, de los obstáculos como UPJO o UVJO, son evidentes en E18.5 por distensión de los riñones y los uréte.......
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Divulgaciones
El autor no tiene nada que revelar.
Agradecimientos
Agradezco a Dr. Alan O. Perantoni (NIH/NCI/CDOBLE) para apoyar la presentación de este manuscrito. También agradezco el Dr. Michael Hall (NIH/NCI/CDOBLE) y Nirmala Sharma (NIH/NCI/CDOBLE) para la edición de este manuscrito. Agradezco a Lai Thang (SAIC) para su cría de ratón excelente. Este trabajo fue apoyado por los institutos nacionales de salud, Instituto Nacional del cáncer y centro de investigación del cáncer.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Azul de metileno | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. SOLUCIÓN SALINA NORMAL - 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| Jeringa desechable de 3 mL con punta BD Luer-Lok | BD | 309657 | |
| Acrodisc Filtros de jeringa con membrana Supor Pall | corporation | 4614 | |
| Exel Juegos de venas para cuero cabelludo (mariposa); 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Tijeras de operación delicadas | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Pinzas de Disección | Roboz Surgical Instrument Co. | Pinzas Dumont RS-5135 | |
| ; Patrón #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD Agujas PrecisionGlide 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Referencias
- Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
- Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
- Bohnenpoll, T., Kispert, A.
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Reimpresiones y permisos
