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Artículo de método

Preparación de hidrolizado de queratina de plumas de pollo y su aplicación en cosméticos

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DOI:

10.3791/56254

27 de noviembre de 2017

En este artículo

Resumen

El objetivo del protocolo es preparar hidrolizado de queratina de plumas de pollo por hidrólisis alcalina y enzimática y para probar si la adición de hidrolizado de queratina en una base para ungüentos cosméticos mejora la función barrera de la piel (aumentan la hidratación y disminuye la pérdida transepidérmica de agua). Las pruebas se realizan en hombres y mujeres voluntarios.

Resumen

Hidrolizados de queratina (KHs) son componentes estándar establecidos en cosmética capilar. Comprender los efectos hidratantes de KH es ventajoso para los cosméticos del cuidado de la piel. Los objetivos del protocolo son: (1) para procesar plumas de pollo en KH por hidrólisis alcalina enzimática y purificar por diálisis y (2) para comprobar si la adición de KH en una base de ungüento (OB) aumenta la hidratación de la piel y mejora la función barrera de la piel disminuyendo pérdida de agua transepidérmica (TEWL). Durante la hidrólisis alcalina enzimática plumas primero se incuban a una temperatura mayor en un ambiente alcalino y luego, en condiciones suaves, hidrolizadas con enzimas proteolíticas. La solución de KH se dializaron, vacío secado y molido a un polvo fino. Se preparan formulaciones cosméticas que comprende aceite en emulsión en agua (O/W) contiene 2, 4 y 6% de peso de KH (basado en el peso del OB). Prueba las propiedades hidratantes del KH se lleva a cabo en 10 hombres y 10 mujeres en intervalos de 1, 2, 3, 4, 24 y 48 h. comprobado formulaciones se extienden en los sitios de antebrazo volar desengrasado. La hidratación de la piel del estrato córneo (SC) se evalúa mediante la medición de la capacitancia de la piel, que es uno de los métodos usados y simples de más por todo el mundo. UREA se basa en medir la cantidad de agua transportada por un área definida y un período de tiempo de la piel. Ambos métodos son completamente no-invasivo. KH es una oclusiva excelente; dependiendo de la adición de KH en OB, trae consigo una reducción de 30% de urea después de la aplicación. KH también funciona como un humectante, como se une el agua de las capas inferiores de la epidermis a la SC; el agregado óptimo de KH en el OB, hasta 19% aumento de la hidratación en los hombres y 22% aumento en las mujeres ocurre.

Introducción

Los mataderos, la industria alimentaria y la industria del curtido producen anualmente enormes cantidades de subproductos sólidos queratina – lana, plumas, cerdas, pezuñas, garras, cuernos y similares. Según los últimos datos estadísticos, el peso vivo total de pollos, pavos, patos y otras aves de corral sacrificadas en los E.e.u.u. es 62,5 billones de libras por año1; en la UE es aproximadamente 28,7 billones de libras al año. Teniendo en cuenta que plumas hacen hasta el 8.5% del peso total de las aves de corral, los Estados Unidos solo produce anualmente aprox. 5,3 billones de libras de residuos plumas2.

La queratina es una proteína exhibe alta resistencia química debido a que es fuertemente reticulado con puentes disulfuro que hacen difícil su tratamiento. Obtención de productos solubles requiere hendiendo enlaces cruzados y posiblemente realizar la hidrólisis de los enlaces peptídicos3. Ruptura de los puentes de disulfuro se puede proceder a través de una reacción del anión tiol según el siguiente patrón4,5:

Suna + – SbSc-↔ – Sb + – SaSc

Con un nivel de pH muy alto, hidrólisis de los puentes de disulfuro también aparece, según el patrón6

SS – + → OH – S – SOH

Condiciones suaves (pH aprox. 8), incluso sulfitolysis tiene lugar según el siguiente patrón:

SS – – + HSO3 → – SH – SSO3

La forma más económica de degradar queratina es descomposición microbiana, que se caracteriza por las condiciones de reacción suaves durante el proceso y alta avería eficiencia (aprox. 90%)7,8. Keratinases son producidas por algunas bacterias aisladas del suelo y la queratina residuos9. Keratinases microbianas hidrolizar queratina rígidas y fuertemente reticulado estructuras10 y el KH resultante preparado es rico en proteínas solubles, sin pérdida de aminoácidos detectados en ella11.

Para incorporar proteínas en preparaciones cosméticas (por ejemplo, emulsiones, lociones y geles), los requisitos de aseguran que estas proteínas son solubles en agua, los sistemas dados son transparentes, y la agregación de los péptidos se evita debido a interacciones hidrofóbicas. Por lo tanto, una práctica común es aplicar hidrolizados de proteínas, como el hidrolizado de colágeno, elastina y queratina. Al agregar hidrolizados en emulsiones cosméticas, son pasos para asegurar que el hidrolizado primero se disuelve en agua. En algunos casos, es deseable que las proteínas (hidrolizado) es soluble en alcohol u otros solventes orgánicos12.

KH normalmente aparece en champús, acondicionadores, lociones y sueros nutritivos para el cabello, así como máscaras, esmalte de uñas y agentes del maquillaje del ojo. Los efectos KH declarados generalmente incluyen formando una película protectora, alisa el cabello o uñas de estructura, una mayor plasticidad y aspecto de la formación tratada, regulación de la consistencia de los productos y alentar la formación de espuma13 , 14. también se ha demostrado que KH reduce la tensión superficial, por lo tanto, la suplementación en cosméticos puede facilitar la reducción en la cantidad de emulsionante agregado para estabilizar cremas. KH limitar los efectos de la irritación provocada por detergentes (surfactantes) a la piel, ojos y cabello, reduciendo así los efectos secundarios potenciales de limpieza sobre el tejido (p. ej., deshidratación de la piel, la dureza y la función de barrera disminuida de la piel). La alta capacidad de almacenamiento en búfer de hidrolizados es explotada también para estabilizar el pH de los cosméticos; péptidos de longitud más corta tienen un efecto tampón mayor15,16. Aunque KHs se han establecido como componentes estándar en el cabello y cosméticos de uñas como se utiliza en productos para el cuidado de la piel, estudios sobre los efectos hidratantes de KH no aparecen en la literatura contemporánea.

Tecnología alcalina enzimática ha sido desarrollada para el procesamiento de productos derivados de queratina en KH, y activa la prueba es en proceso sobre los efectos de una serie de aditivos cosméticos17,18,19,20 , 21 , 22. la ventaja de dos etapas hidrólisis alcalina enzimática utilizando proteasas microbianas de plumas de pollo logra alta eficiencia bajo condiciones suaves de reacción y la calidad de KH es muy alta en contraste con hidrólisis en ácidos fuertes o álcalis. En la primera etapa, las plumas se incuban a una temperatura mayor en un ambiente alcalino, que altera la estructura de queratina parcialmente y se hincha las plumas; después de ajustar el pH, las plumas son hidrolizadas con una enzima proteolítica condiciones suaves en la segunda etapa. El KH dializado posee un alto contenido de proteínas.

Los propósitos del método descrito aquí son procesar plumas de aves en un KH mediante hidrólisis alcalina enzimática y prueba el efecto de las propiedades hidratantes de KH aplicado en emulsión cosmética O/W. Las propiedades hidratantes son investigadas por métodos no invasivos instrumental en vivo. Los métodos más frecuentes para medir la función de la hidratación y la barrera de la piel de SC incluyen medición de propiedades eléctricas de la piel (conductancia o capacitancia). Diferentes métodos para la investigación de hidratación SC incluyen cerca de método imaginando multiespectral infrarrojo (NIM), espectroscopia de resonancia magnética nuclear, tomografía de coherencia óptica o transferencia térmica transitorio23. Función de barrera de SC correlaciona a la urea de SC y se mide por el método de cámara ventilada, método de ventilación de la cámara y cámara abierta método24.

Propiedades de las formulaciones del modelo se determinan usando el adaptador de sonda Multi 5 MPA con tres tipos de sondas. El primero de ellos, corneometer CM 825, hidratación de la piel de medidas mediante la evaluación de cambios en la capacidad eléctrica de la superficie de la piel; el condensador mide muestra cambios en la capacitancia de la superficie de la piel en las corneometric unidades. El corneometer da sólo una evaluación relativa de la piel hidratación25. De urea, la segunda sonda, el tewameter TM 300, se utiliza para medir el gradiente de densidad de la evaporación del agua (en un instrumento de cámara abierta basada en el derecho de difusión de Fick) de la piel indirectamente por los dos pares de sensores (temperatura y humedad relativa) indicando la cantidad de agua transportada por un área definida y un período de tiempo (g/m2/h). Este método puede detectar incluso la más leve alteración de piel barrera función26. PH de la piel es un indicador de barrera y función anti-microbiana de la SC27. La acidez de la capa de piel fue medida por un sensor de piel PH 905 (tercero) conectado a la estación de 5 MPA. Esta sonda especialmente diseñada consta de un electrodo de vidrio plana para contacto de la piel completo, conectado a un voltímetro. El sistema mide los cambios de potencial debido a la actividad de los cationes de hidrógeno que rodea la capa muy delgada de formas semi-sólidas medido en la parte superior de la sonda. Los cambios en el voltaje se muestran como pH28.

Presentamos experimentos divididos en tres secciones: (1) preparación de KH de pollo plumas por hidrólisis alcalina enzimática de dos etapas y su purificación por diálisis (eliminación de sales y las fracciones de peso molecular bajo), (2) preparación de cosméticos formulaciones que contienen 2, 4 y 6% KH y (3) pruebas de las propiedades de KH midiendo TEWL, hidratación de la piel y pH de la piel. La prueba se realizó en 10 mujeres con edad media de 27,2 años y 10 hombres con la edad media de 26,2 años. El método de selección de los voluntarios y las pruebas se realizaron con arreglo a los principios éticos internacionales de investigación bio-médica utilizando seres humanos29; todas las personas que dieron su consentimiento informado antes de la inclusión en el estudio. Antes del ensayo comenzó, los voluntarios debían completar un cuestionario sobre su estado de salud. Los voluntarios comprometidos para evitar aplicar cualquier producto cosmético a los sitios de prueba y las regiones circundantes durante las 24 h antes y durante el período de prueba; Además, sólo se les permitió la noche breve lavados con agua corriente.

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Protocolo

Se reclutaron voluntarios entre empleados y estudiantes de nuestra Universidad. El método de selección se llevó a cabo según "normas eticas internacionales para biomédica investigación involucra sujetos humanos. Consejo de organizaciones internacionales de ciencias médicas, Ginebra (2002)." KH es un ingrediente cosmético común utilizado en productos de cuidado del cabello (champús, acondicionadores, etc.) y por lo tanto no es necesaria la aprobación de la Junta de revisión institucional.

1. proceso plumas de pollo en KH

  1. Recoger plumas de gallina de una granja de aves de corral.
  2. Lave cualquier impurezas insolubles y restos de sangre de las plumas de pollo con un exceso suficiente de agua corriente (fría). Poner las plumas en una placa plana y seca durante la noche a 50 ° C.
    Nota: El protocolo se puede detener aquí.
  3. Moler 50 plumas g seco en un molino de corte (apto para materiales blandos a semiduros y materiales fibrosos) en una finura final de 1,0 mm. alternativamente, la fineza final de plumas molidas puede ser más alto pero no más de 3,0 mm.
    Nota: El protocolo se puede detener aquí.
  4. Desengrase de plumas
    Nota: El método más eficaz y económico de desengrase pluma de las aves de corral está utilizando una enzima lipolítica comercial.
    1. En un envase de 27 L caldera de acero inoxidable con control de temperatura, mezcla las plumas con agua precalentada a 40 ± 2 ° C en una relación de peso 1: 75. Agregar una enzima lipolítica (actividad 100 KLU/g) en dosis de 1.5-2.0% (relacionado con pesó en seco plumas) y suavemente mezclar los contenidos con un agitador arriba durante 5 minutos.
    2. Ajustar el pH de la mezcla a 9.0 ± 0.2, el valor correspondiente a la máxima actividad de la enzima lipolítica mediante la adición de NaOH o 1% H3PO4 solución al 1%. Removemos la mezcla durante 5 min con un agitador de arriba y luego Compruebe y vuelva a ajustar el nivel de pH con un medidor de pH/mV de banco de laboratorio.
    3. Revolver suavemente la mezcla con un agitador arriba por 24 h a 40 ± 0.5 ° C. Alternativamente, incubar la mezcla a 40 ± 0.5 ° C y durante las primeras 6 h de incubación, agregue el contenido a intervalos de 1 h.
    4. Filtrar la mezcla por un colador fino (tamaño de 100 μm) y lavar las plumas desengrasadas con un chorro de agua corriente (fría). Secar las plumas en una placa plana a 50 ° C en una cámara de secado durante la noche.
      Nota: El protocolo se puede detener aquí.
  5. Llevar a cabo la primera etapa de la hidrólisis de plumas de pollo. Las plumas de la mezcla con solución de agua 0,3% KOH en un peso proporción 1:50 y revuelva suavemente con un agitador arriba a 60 ± 0,5 ° C por 24 h. El pH de la mezcla disminuye de aproximadamente 12.5 al comienzo de la incubación a 11.0 aprox. al final de la incubación. Después de terminar la primera etapa de hidrólisis, ajustar el pH de la mezcla al nivel correspondiente a la máxima actividad de la enzima proteolítica con 10% H3PO4 (en este caso, a un nivel de 9.0 ± 0,2) mediante la adición de 1% NaOH.
  6. Llevar a cabo la segunda etapa de la hidrólisis de plumas de pollo. Añadir a la mezcla, la enzima proteolítica en dosis de 5.0% (relacionado con la materia seca de la cantidad de plumas pesados en el inicio de la primera etapa de la hidrólisis). Suavemente mezcle con un agitador arriba a 60 ± 0,5 ° C por 8 h y la mezcla (en el mismo recipiente de la caldera 27-L de acero inoxidable) a un punto de ebullición (100 ° C) y hervir durante 10 minutos inactivar la enzima.
  7. Separar la solución de KH (preparado en el paso 1.6) el remanente sin disolver por filtración a través de la baja densidad papel de filtro en un embudo Buchner con leve presión al vacío; como alternativa, utilizar una centrífuga.
    Nota: El protocolo puede hacer una pausa aquí para varios días si se almacena una solución de KH a 5 ± 1 ° C.
  8. En el cubo de plástico (26 cm diámetro x 26 cm altura) dializarse el KH usando 12 K MWCO membrana para eliminar sales y pequeños péptidos. Vierta 400 mL de la solución KH en la tubería de la diálisis y dializo contra 4 L de agua destilada para 80 h a temperatura ambiente; Cambie el agua destilado después de 18, 36 y 60 h.
  9. Lanzar una solución de dializado de KH en una placa antiadherente (por ejemplo, de silicona) en una proporción de 500 mL a 1.000 cm2 placa zona vacío seco en una fina capa a 40 ± 0.5 ° C para toda la noche, moler para formar un polvo fino y guárdelo en un recipiente de tapa cerrada en un desecador.
    Nota: El protocolo puede hacer una pausa aquí por varios meses si el polvo KH se almacena en un lugar seco.

2. preparar formulaciones cosméticas con KH

Nota: OB utilizado para las pruebas fue una base comercial de O/W crema hidrofílica y de aqua, parafina, parafina líquida, cetearyl alcohol, Laureth 4, hidróxido de sodio, carbomer, methylparaben y propylparaben.

  1. Preparación de formulaciones que contienen 2, 4 y 6% KH (de acuerdo con el peso base del ungüento). Pesar la cantidad de polvo KH en un vaso de polietileno (7 cm de diámetro x 10 cm de altura) y añadir el OB en una cantidad que asegura que el peso total de la formulación es igual a 50 g; Vea la receta en la tabla 1.
Formulación cosméticaPeso de base para ungüentos [g]Peso de hidrolizado de queratina [g]Peso total [g]
Base para ungüentos50050
El ungüento base + 2% KH491
El ungüento base + 4% KH482
El ungüento base + 6% KH473

Tabla 1: Peso en cantidades de hidrolizado de base y la queratina de ungüento para preparar formulaciones cosméticas.

  1. Homogeneizar la mezcla con una batidora de 3 palas de laboratorio durante 10 min a 134.16 x g y mezclar con un agitador mecánico de arriba. Mantener las formulaciones preparadas a 5 ± 1 ° C y caliente a temperatura ambiente durante 2 h antes de su uso.
    Nota: Homogeneización de la mezcla de OB con KH puede hacerse con un agitador no digital también. En un agitador no digital, hay también escalas con la velocidad aproximada (en rpm). Agitación suave funciona mejor para este paso.
    Nota: El protocolo puede pausarse aquí hasta por 5 meses si las fórmulas se almacenan a 5 ± 1 ° C.

3. prueba de las propiedades de KH por medición de hidratación de la piel, urea y pH

Nota: Realice todas las mediciones en un ambiente acondicionado a 23 ± 2 ° C y la humedad relativa de 56 ± 3%.

  1. Lugar 5 tiras de papel de filtro (tamaño 2 x 4 cm) en la solución fisiológica (0.90% NaCl) y dejarlos durante aproximadamente 1 minuto en la solución.
  2. Dos tiras que se aplican a la parte interior del antebrazo derecho y tres en la parte interior del antebrazo izquierdo y fijarlos durante 4 h con esparadrapos. Este paso es desengrasar la piel y eliminar las características individuales de la piel en el sitio. Después de 4 h, quitar las tiras y delimitar las áreas con un rotulador permanente, vea la figura 1.

figure-protocol-1
Figura 1: método para la localización de las formulaciones de prueba en el antebrazo de las extremidades izquierdas y derecha superiores. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

  1. Aplicar 0,1 mL de las formulaciones probadas en cada punto de los sitios de desengrasado antebrazo utilizando jeringas y extenderlo por toda la superficie marcada. En el antebrazo izquierdo, no aplicar nada en el primer sitio (es el control), aplicar el OB para el segundo sitio y el OB + 2% KH a la tercera. Aplicar el OB + 4 OB + 6% y % KH KH para el brazo derecho.
  2. Medir cada muestra en cada sitio y cada intervalo (1, 2, 3, 4, 24 y 48 horas) y tomar lecturas de 5 con la sonda de medidor de hidratación de la piel para hidratación de la piel, 15 lecturas con la sonda medidor TEWL para piel TEWL y 1 leyendo con la sonda de medidor de pH de piel para el pH de la piel. No permita que los voluntarios para cualquier producto cosmético se aplica a los sitios de prueba y alrededores durante el período de prueba; se permite la noche breve lavados con agua corriente.
    Nota: El protocolo se puede detener aquí.
  3. Procesar las lecturas resultantes por características numéricas básicas de la estadística descriptiva, utilizando el software de hoja de cálculo. De las 5 lecturas de hidratación medidas para cada muestra, ignorar el más bajo y las lecturas más alta y calcular sólo 3 lecturas de la media aritmética y desviación estándar. Desde las 15 lecturas de TEWL medidas para cada muestra, ignorar los primeros 5 y calcular sólo 10 lecturas de media aritmética y desviación estándar.

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Resultados

El KH preparado según el procedimiento presentado aquí (ver figura 2) es de color amarillo en el color, fácilmente soluble en agua con alto contenido de proteína (sólidos inorgánicos representan < 2.0%); el pH de la solución al 1.0% de KH es de 5.3 y cumple con los requisitos para hidrolizados de grado cosmético. El rendimiento de KH de 50 g materia prima es de aprox. 30%. La distribución de peso molecular de KH fue determinada por SDS-PAGE y se muestra en la...

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Discusión

La ventaja de la hidrólisis alcalina enzimática es que puede ser modificado según las aplicaciones futuras de KH. Por ejemplo, en aplicaciones de cosméticos de cuidado del cabello donde un color ligeramente amarronado de un producto no es un obstáculo, una temperatura más alta en la hidrólisis puede aplicarse a un rendimiento superior de KH. Además, el tiempo de procesamiento durante ambas etapas del procedimiento tecnológico afecta significativamente el proceso general de eficiencia: rendimiento de KH se eleva al 85%.

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este artículo fue escrito con el apoyo del proyecto IGA/FT/2017/007, de Universidad de Tomas Bata en Zlin.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Material o productos químicos
LIPEX 100TNovozymesLJP30020Lipex - enzima producida por fermentación sumergida de un microorganismo modificado genéticamente, actividad 100 KLU/g
Savinase Ultra 16LNovozymesPXN40001Savinase - enzima producida por fermentación sumergida de un microorganismo modificado genéticamente, actividad 16 KNPU-S/g
Hidróxido de potasio, KOHSigma-Aldrich302510289Hidróxido de potasio, KOH, 97,0 %, Mr 56,11
Solución de ácido fosfórico, H3PO4Sigma-AldrichW290017Solución de ácido fosfórico, H3PO4, 85 % en peso de concentración en agua, Mr 98,00
Solución fisiológica de cloruro de sodioSigma-Aldrich52455Comprimidos de solución fisiológica BioUltra NaCl; 1 comprimido en 1000 mL de agua produce 0,9 % de NaCl
Hidróxido de sodio, NaOHPenta s.r.o.40216Hidróxido de sodio, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00
AmiFarm (Cremor base-A)Fagron608425Aceite hidrófilo en agua (O/W) base de crema; la composición: agua, parafina, parafina líquida, cetearil alkohol, Laureth 4, hidróxido de sodio, carbómero, metilparabeno, propilparabeno.
NameCompanyNúmero de catálogoComentarios
Equipo
IKA EUROSTAR POWER agitadores de control-viscIKA-labortechnikZ404020Agitador de laboratorio digital, para tareas hasta el rango de alta viscosidad, 230V, 1/cs
IKA Agitador de hélice, 3 palasIKA-labortechnikR 1381Agitador de hélice, 3 palas, agitador Ø: 45 mm, eje Ø: 8 mm, longitud del eje: 350 mm
Cierres de tubos de diálisisSigma-AldrichZ371017-10EACierres de tubos de diálisis, rojos, tamaño 110 mm
Tubos de diálisis membrana de celulosaSigma-AldrichD9402-100FTTubo de diálisis, membrana de celulosa, ancho plano promedio 76 mm (3,0 pulg.)
DOMO Olla con stailess, LCDDOMO ElektronicDO42325PCCaldera de conservación de acero inoxidable, 2000 W, contenedor de 27 L (diámetro 37 cm, altura 30 cm), control de temperatura 30-100 ° C, funcionamiento Pantalla LCD
Hettich zentrifugen Universal 32Gemini bv2770 GS1RCentrífuga de banco mediana, velocidad 18000 rpm
LT 3 agitadorFischer Scientific6470.0002Agitador orbital
KERN 440-47NKern440-47NBalanza de laboratorio
KERN 770Kern770 -NBalanza analítica de laboratorio
VENTICELL 222 - KomfortBMT, MMM GrupoC 131749Horno de secado, control de temperatura 30-100 ° C, control de circulación de aire
Vacucell 55 - EVOBMT, MMM GrupoB 050328Horno de secado al vacío, control de temperatura 30-100 ° C
PULVERISETTE 19Fritsch19.1030.00Molino de corte universal, rotor con filos en V y cuchillas fijas
Sistema de adaptador de sonda múltiple MPA 5Courage & Kazaka Electronic10225237MPA 5 Station - equipo para la medición de hidratación, TEWL y pH
Medidor de pH de la piel Sonda PH 905Courage & Sonda electrónicapara medir específicamente el pH en la superficie de la piel o en el cuero cabelludo
Sonda Corneometer CM 825Courage & Sonda electrónicapara determinar el nivel de hidratación de la superficie de la piel (estrato córneo).
Tewameter TM 300Coraje & Sonda electrónicapara la evaluación de la pérdida de agua transepidérmica (TEWL)
Heidolph RZR 2020Heidolph13-225-007-03-1Agitador aéreo, ajuste mecánico de la velocidad y transmisión continua; Rango de velocidad 40-2000 rpm
Agitador mecánico Heidolph BR 10HeidolphZ336688-1EAAgitador cruzado de impulsor de palas
Fagor FS 12FagorBTT-138Frigorífico de laboratorio con espacio en el congelador
Medidor de pH/mV de sobremesa WTWZ313165Medidores de pH y pH/conductividad de sobremesa de alto rendimiento para mediciones de laboratorio rutinarias y de alta precisión en laboratorios de investigación o control de calidad
ContenedorCubo de plástico RPC Superfos13-L, diámetro 26 cm, altura 26 cm
NombreEmpresa Número de catálogoComments
>Software
Microsoft Office 2010Microsoft
C+K softwareCourage y Khazaka Electronic GmbHMPA 5 estaciones
Kazaka Kazaka Kazaka

Referencias

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