$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
El uso de en vivo la tomografía micro computada (µCT) es una poderosa herramienta que consiste en la proyección de imagen no destructivo de estructuras internas en alta resolución utilizando modelos de roedores. La naturaleza no destructiva en vivo µCT permite repetir la proyección de imagen del mismo roedor con el tiempo. Esta función no sólo reduce el número total de roedores en un diseño experimental y así reduce la variación entre sujeta que puede surgir, pero también permite a los investigadores a entender las respuestas a largo plazo a una intervención. Con el uso de repetidas en vivo µCT, experimentos en ratones y ratas han aclarado cambios de desarrollo para la micro arquitectura del hueso y hueso densidad mineral (DMO) a lo largo de períodos de vida útil de 1,2,3 ,4,5,6,7,8 , así como la respuesta de salud ósea a intervenciones como la dieta 9,10, ovariectomía 7,11 y agentes farmacológicos 8,12,13. DMO y microarquitectura ósea en los sitios esqueléticos específicos, a saber, la tibia proximal, fémur y vértebras lumbares, son indicativos de salud ósea en general y el riesgo de sufrir una fractura y las medidas primarias al cuantificar las respuestas a un intervención.
Adquisición de imágenes en vivo µCT implica dos dimensiones proyecciones de rayos x está adquiridas en múltiples ángulos, como la fuente de rayos x y el detector giran alrededor del animal bajo investigación 14,15. La calidad de la imagen resultante es dependiente en muchos factores incluyendo pero no limitado a: seleccionar parámetros de adquisición (es decir, resolución espacial, rayos x voltaje, amperaje, paso de rotación, filtro aplicado, tiempo de exposición), limitaciones de la µCT escáner (es decir, artefactos basados en explorador tales como artefactos de anillo o polvo que causan efectos de volumen parcial o manchas) y la colocación apropiada y sujeción del animal. El ex dos de estos factores pueden ser manipulados hasta cierto punto por el usuario, dependiendo de la máquina de exploración específica, objetivos del estudio y las correcciones que se necesitan para optimizan la función del escáner o el procesamiento de imágenes adquiridas. El último de estos factores, el posicionamiento correcto de los roedores antes de la exploración, se logra independientemente de las limitaciones basadas en explorador o los parámetros de adquisición que se seleccionan para lograr un objetivo de estudio específico. Mientras que muchas publicaciones con imágenes en vivo han sido publicados en la literatura 14,15,16,17, estilo clásico manuscrito es tal que detallado "cómo" información no puede ser incluido. Por lo tanto, el objetivo de este artículo y video guía debe llenar este vacío. Aquí nuestro objetivo es instruir a los usuarios de escáneres de µCT en vivo cómo anestesiar una rata y colocar y sujetar las extremidades para producir imágenes de alta calidad que pueden ser analizadas para cuantificar con mayor precisión los resultados de la microarquitectura del hueso.
Evitar obstrucciones de la haz de rayos x a través de objetos que no sean de las extremidades son imprescindibles para cuantificar la DMO más preciso y valores de la microarquitectura del hueso. Como los rayos x pasan a través de objetos y tejidos de diferentes espesores y densidades, algunos de los rayos x son absorbidos (es decir atenuada) por los materiales que pasan a través. Puesto que la densidad de masa medida de una muestra es afectada por su grosor y la presencia y espesor de los tejidos circundantes, es imperativo que los fantasmas de calibración para determinar la DMO se analizan de la misma manera. Por lo tanto, si el haz de rayos x debe pasar a través de objetos (es decir, la cola) antes o después de pasar por la región de interés, esos objetos absorberán algunas de las energías de rayos x y va a interferir con la imagen de transmisión adquirida. Además, estas exploraciones serían muy difíciles de simular al analizar los fantasmas que deben se asemejan muestra exploraciones. Como resultado, estas diferencias de atenuación conducen a la inexactitud en la evaluación de las mediciones de la DMO del hueso. Así, para mayor facilidad y exactitud, es mejor limitar el número de obstrucciones entre la fuente de rayos x, región de interés y rayos x detector de.
Evaluación longitudinal de la estructura ósea de una intervención en modelos preclínicos incluyen la anestesia repetida del animal para limitar sus movimientos durante la exploración de protocolos. Existen varios métodos de anestesia general con el fin de someter a los animales sometidos a una exploración de la µCT, incluyendo anestesia inyectable e inhalantes 1,2,4,5,6, 12. a diferencia de los inhalantes anestésicos como isoflurano, repetida anestesia general con anestésicos inyectables causan una reducción en peso corporal, tolerancia quirúrgica y cambios importantes en otros parámetros fisiológicos en roedores, específicamente las ratas y conejillos de Indias, sugiriendo importantes contraindicaciones para repetir uso 18,19,20. Mientras que el isoflurano es altamente volátil y permite la rápida inducción y recuperación, agentes anestésicos inyectables producen diferentes niveles de anestesia y tiempo bajo anestesia depende de la cepa, sexo, composición corporal, estado ayunado y ciclo circadiano de la animal. Anestésicos inyectables también presentan barreras adicionales para su uso como que muy están reguladas por órganos de gobierno nacionales. Anestesia inhalatoria sin embargo, implica la entrega directa en el sistema respiratorio; Este método permite para una más rápida inducción y recuperación de tiempo y mejor controlan sobre la longitud y la profundidad de anestesia19,20. Limitaciones en el método de anestesia de inhalación implican su requisito para equipos de vaporización especializados y algunos cambios de ritmo cardíaco y la presión arterial durante la inducción, mantenimiento y recuperación 18,19.