Method Article

Disección y preparación del segmento Coronal de desarrollo de hipófisis de ratón

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Presentamos un protocolo para diseccionar las glándulas pituitaria y preparar pituitarias secciones coronales de desarrollar ratones.

Abstract

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La glándula pituitaria o hipófisis es un importante órgano endocrino que secreta hormonas esenciales para la homeostasis. Consta de dos glándulas con funciones y orígenes embrionarios separados, la neurohipófisis y la adenohipófisis. La hipófisis de ratón en desarrollo es pequeño y delicado con una forma oval alargada. Una sección coronal es preferida para mostrar la adenohipófisis y la neurohipófisis en una sola rebanada de la hipófisis de ratón.

El objetivo de este protocolo es lograr la correcta secciones coronales pituitarias con arquitecturas de tejido preservado de desarrollar ratones. En este protocolo, se describe en detalle cómo diseccionar y glándulas pituitarias correctamente de desarrollar ratones. En primer lugar, ratones son fijados por perfusión de transcardial del formaldehído antes de la disección. Luego se aplican tres diferentes técnicas de disección para obtener las glándulas pituitaria intactas dependiendo de la edad de los ratones. Para ratones fetales a partir de 17.5-18.5 días embrionarios (E) y los recién nacidos hasta 4 días, las regiones de sella todo incluyendo el hueso esfenoides, glándulas y nervios de trigeminal se disecan. Para cachorros edad postnatales días (P) 5-14, las glándulas pituitaria conectados con los nervios de trigeminal son disecados en su conjunto. Para ratones de 3 semanas de edad, las glándulas pituitarias se disecan con cuidado gratis de los tejidos circundantes. También nos muestra cómo incrustar las glándulas pituitarias en una orientación adecuada mediante el uso de los tejidos circundantes como puntos de referencia para obtener satisfacción de secciones coronales. Estos métodos son útiles en el análisis de características histológicas y del desarrollo de las glándulas de la hipófisis en el desarrollo de ratones.

Introduction

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La glándula pituitaria o hipófisis es un importante órgano endocrino que secreta hormonas esenciales para la homeostasis1,2. Anatómicamente, la glándula pituitaria es una estructura de '' dos en uno '' que consiste en la neurohipófisis y la adenohipófisis. Estas piezas tienen función y diferente origen embrionario muy diferentemente. La neurohipófisis deriva del ectodermo neural y segrega oxitocina y hormona antidiurética. La adenohipófisis se origina de la bolsa de Rathke y es responsable de la liberación de hormonas, incluyendo hormona del crecimiento, prolactina, tirotropina, hormona folículo estimulante, h....

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Protocol

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ratones C57BL/6 se crían en condiciones libres de patógenos específicas. Todos los métodos experimentales de animales están en conformidad con las directrices aprobadas por el cuidado Animal y Comité de ética en la Universidad de medicina militar de segunda.

1. disección de Postnatal desarrollo de glándula pituitaria

  1. realizar anestesia: poner ratones neonatales (P0 - P5) en hielo picado para inducir hipotermia. Para los ratones mayores de 5 días de edad, inyectar 5% uretano (30 μl/g de peso corporal) por vía intraperitoneal para inducir anestesia. Evaluar las respuestas para toe cola pinches. Proceder sólo después de que el rató....

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Results

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Este protocolo presenta un método para disecar glándulas pituitarias de desarrollar ratones. Para el ratón neonatal, las regiones de sella todo que contiene la glándula pituitaria, los nervios de trigeminal y la parte inferior se diseca hueso esfenoides de la base del cráneo. La hipófisis pequeña y delicada permaneció intacta durante el proceso (figura 1A). Para los ratones mayores de 5 días, las glándulas pituitaria conectadas a los nervios de trigeminal lat.......

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Discussion

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Para el desarrollo de pituitaries murinos, ha sido técnicamente difícil de obtener secciones coronales adecuadas debido a su diminutas y frágil características y características anatómicas únicas6,8. Algunos grupos de investigación así eligieron secciones sagital para analizar la morfología embrionaria y neonatal pituitaria11,12. Aunque la sección sagital de la hipófisis también es capaz de mostrar anteri.......

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Disclosures

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Los autores no tienen nada que revelar.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabajo fue apoyado por las becas de la Fundación de Ciencias naturales nacionales de China (31201086, 31470759 y 31671219) y la Fundación de Ciencias naturales de Shanghai (12ZR1436900).

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Tools/Equipment
Surgical scissors-straightJinZhongJ21010se puede comprar a otros proveedores
Fine scissors-strainghtJinZhongWA1010se puede comprar a otros proveedores
Pinzas romasJinZhongJD1020se puede comprar a otros proveedores
Pinzas finasDumontRS-5015para el aislamiento de la hipófisis
Aguja de 26G (0,45 mm)HongDapara perfusión transcárdica
Jeringa (1 mL)BD300841se puede comprar a otros proveedores
Jeringa (10 mL)BDse puede comprar a otros proveedores Plato de
35 mmCorning430165se puede comprar a otros proveedores
El papel de limpieza de lentesShuangQuanse puede comprar de otros proveedores
El microscopio anatómicoOLYMPUSSZX-ILLB2-200se puede comprar de otros proveedores
El casete de incrustaciónThermo Fisher22-272423se puede comprar de otros proveedores
El sistema de consola de incrustación de tejidosKEDEEKD-BM11se puede comprar de otros proveedores
MicrotomoThermo FisherHM315Rse puede comprar de otros proveedores
Portaobjetos Superfrost-PlusThermo Fisher22-037-246se puede comprar de otros proveedores
CubreobjetosThermo Fisher12-543se puede comprar de otros proveedores
Microscopio de fluorescenciaOLYMPUSBH2-RFCAse puede comprar de otros proveedores
NombreCompañíaNúmero de catálogoComentarios
>Reactivos
UretanoBBI EB0448
NaClSigmaS9625para
PBS KClSigmaP9541para PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650para PBS
K2HPO4SigmaP2222para PBS
NaNO2Sigma 237213
Heparina Sódica InyecciónSPHH31022051para perfusión salina
Paraformaldehído (PFA)SigmaP6148
EtanolSCR10009218
XilenoSCR10023418
ParafinaThermo Fisher8330
HematoxilinaSigmaH9627para H& E tinción
Eosin YSigmaE4009para H& Tinción E
anti hormona de crecimiento (GH)Hormonapara inmunotinción
anticuerpopituitario
Anticuerpo GFAP anti-ratónconejo SigmaG9269para inmunotinción
IgG anti-conejo de cabra, HRPJackson111-035-003para inmunotinción
Sistema TSAProductos de ciencias de la vida NENNEL700para inmunotinción
Estreptavidina, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356para inmunotinción
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090para inmunotinción
conejo nacional Programa

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

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Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

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