Se describe un método para laminotomy en cerdos que proporciona acceso a los ganglios de raíz dorsal lumbar (GRD) para la inyección de intraganglionic. Avance de la inyección se controla intraoperatively e histológico confirmado hasta 21 días después de la cirugía. Este protocolo podría ser utilizado para futuros estudios preclínicos con inyección de DRG.
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Artículo de método
Laminotomía para acceso de ganglio de raíz Dorsal Lumbar y de la inyección en los cerdos
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Resumen
Resumen
Ganglios de raíz dorsal (GRD) son estructuras anatómicamente definidas que contienen todas las neuronas sensoriales primarias por debajo de la cabeza. Este hecho hace objetivos atractivos DRG para la inyección de nuevas terapias encaminadas a tratar el dolor crónico. En modelos animales pequeños, laminectomía se ha utilizado para facilitar la inyección de DRG porque implica la extirpación quirúrgica del hueso vertebral que rodea cada DRG. Se demuestra una técnica para inyección intraganglionic de DRG lumbar en una especie de animal grande, a saber, porcina. Laminotomía se realiza para permitir el acceso directo a DRG utilizando materiales, instrumentos y técnicas neuroquirúrgicas habituales. Comparado con el retiro de hueso más extenso mediante laminectomía, implementamos laminotomía para conservar la anatomía vertebral logrando acceso suficiente de DRG. Progreso intraoperativa de la inyección del DRG es monitoreada usando un colorante no tóxico. Después de la eutanasia en día postoperatorio 21 el éxito de la inyección se determina por histología intraganglionic distribución de 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Se inyecta una solución biológicamente inactiva para demostrar el protocolo. Este método puede ser aplicado en el futuro preclínica para soluciones terapéuticas destino a DRG. Nuestra metodología debe facilitar las pruebas de la traducibilidad de intraganglionic paradigmas animales pequeños en una especie de animal grande. Además, este protocolo puede servir como un recurso clave para los estudios preclínicos de la inyección de DRG en cerdos.
Introducción
Ganglios de raíz dorsal (GRD) son colecciones anatómicamente discretas, neuronales, situados a lo largo de la columna vertebral. Cada GRD contiene las neuronas sensoriales primarias que codifican y transmitir los estímulos periféricos al sistema nervioso central (SNC) de regiones específicas del cuerpo. Por ejemplo, el dolor de la osteoartritis comienza cuando los receptores de dolor localizados sobre una articulación perciben estímulos nocivos. Este proceso se denomina nocicepción. Concienciación a largo plazo de estímulos nocivos conduce a dolor crónico 1.
El dolor crónico es un tema frecuente de estudio preclínico....
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Protocolo
todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el institucional Animal Care y el Comité uso (IACUC) de la Clínica Mayo.
1. requisitos previos de Rigor y reproducibilidad
- para asegurar el rigor de diseño, siga los estándares nacionales de buen laboratorio prácticas son en todo momento y obtengan la aprobación interna por el IACUC (o Comité similar) antes de cualquier animal participación en experimentos.
Nota: Este protocolo fue diseñado para mantener un enfoque clínico fiel. Así, se describen las técnicas, instrumentos y materiales de manera idéntica a los más altos estándares clínicos en seres humanos. Por ejemp....
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Resultados
Evaluación histologic de injectate propagación
Exitosa entrega de injectate DRG está determinada por la evaluación histologic de DAPI difundir. La técnica implica el posicionamiento la punta de la aguja en el centro tridimensional de lo DRG. Por lo tanto, entrega correcta se determina evaluando el grado de tinción de secciones histologic ambos cerca (secciones centrales de DRG) y distante (secciones periféricas de DRG) a punta de la aguja DAPI. Figura 1A y
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Discusión
Se intentó describir un método para la exposición quirúrgica del DRG mediante laminotomía y intraganglionic inyección en una especie de animal grande saludable, específicamente, porcina. En roedores, un método similar ha sido detallada 12 y usada para entregar a agentes farmacológicos convencionales 8,10 y vectores virales 6,7,9,
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Divulgaciones
Ninguno; los autores no tienen conflictos de interés relacionados con este estudio.
Agradecimientos
El estudio se realizó con el apoyo de la Fundación de la familia de Schulze (a ASB).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Hondas humanas grandes para animales | Britz & Compañía | 002539 | Modificado para incluir apertura abdominal |
| Electrodo adhesivo de retorno al paciente - 9 pulgadas | Medtronic | E7506-Ranger | de calentamiento de |
| sangre y fluidos | 3M | 24500-Lactato | |
| Fluido de Ringer | Hospira | 0409-7953-09-Dispositivo | de |
| calentamiento de aire de fuerza | 3M | 77500 | - |
| Duraprep solución con aplicador, 26 mL (0,7 % de yodo povacrylex, 74 % de alcohol isopropílico) | 3M | 8630-Toallas | |
| quirúrgicas desechables estériles | Medline | MDT2168286-Ioban | |
| 2 paños de incisión | 3M | 6651EZSB-Bote | |
| y tubo de succión desechables | Medline | DYND44703H-Interruptor de | |
| botón Lápiz | electroquirúrgico monopolarMedtronic | E2450H-Pinza | |
| electroquirúrgica bipolar lisa y recta fina, 4 1/2 pulgadas | Bovie | A826 | - |
| #15 hoja | Miltex | 4-315 | - |
| #11 hoja | Miltex | 4-311-4 | |
| x 4 gasa quirúrgica | Dynarex | 3262-Weitlaner | |
| retractor autorretenedor, 8 pulgadas | Miltex | 11-618 | - |
| Retractor autorretenedor Meyerding, 1 x 2 3/8 pulgadas | Sklar | 42-2078-Retractor | |
| autorretenedor Gelpi, 7 pulgadas | Sklar | 60-6570-Elevador | Freer |
| , 5 mm | Cera | Medline MDS4641518F-Bone | |
| Ethicon | W31G-Spurling | ||
| disco intervertebral rongeur, 3 mm | Sklar | 42-2852 | - |
| Spurling 45 grados, mordida hacia arriba Kerrison rongeur, 2 mm | Medline | ||
| MDS4052802-Leksell roggeur angulado, 2 mm | Sklar | 40-4097-Gelfoam | |
| , tamaño 50 | Pfizer | AZL32301-Cottonoid | |
| hamty | Medtronic | 8004007-Punta de | |
| succión Frazier, 6 Fr | Sklar | 50-2006-Punta | |
| succión Frazier, 10 Fr | Sklar | 50-2010-Dandy | |
| gancho nervioso romo en ángulo recto | Medline | de MDS4005220-Nylon | |
| , 6-0 | Ethicon | 697G-Castroviejo | |
| micro portagujas lisas | Medline | MDG2428614-22 | |
| Aguja espinal Quinke | Halyard Health | 18397-32 | |
| Aguja CED con buje Luer de bloqueo | Ver comentarios | n/a | Como en: Pleticha, J., Maus, T.P., Christner, J.A., Marsh, M.P., Lee, K.H., Hooten, W.M., Beutler, A.S. Entrega mínimamente invasiva de productos biológicos mejorados por convección en los ganglios de la raíz dorsal: validación en el modelo de cerdo y modelado prospectivo en humanos. Nota técnica. J Neurocirugía. 121(4), 851-8 (2014). |
| Tubo de polietileno, 5 pies | Scientific Commodities | BB31695-PE/05-Jeringa | |
| Monoject, 3 mL | Kendall | SY15352-NanoJet | |
| Chemyx | 10050-DAPI | ||
| Sigma-Aldrich | D9542-Fast | ||
| Green FCF | Sigma-Aldrich | F7252-Jeringa | de |
| irrigación de bulbo | Medline | DYND20125-Pinza | |
| Adson de dientes finos | Medline | ||
| Sutura MDS1000212-Vicryl, 0 | Ethicon | J603H-Sutura | |
| Vicryl, 2-0 | Ethicon | J317H-Contador | de |
| agujas | Medline | ||
| NC20FBRGS-Steri-strip cierre cutáneo, 1/2x4 pulgadas | 3M | R1547 | - |
Referencias
- Millan, M. J. The induction of pain: An integrative review. Prog Neurobiol. 57 (1), 1-164 (1999).
- Burma, N. E., Leduc-Pessah, H., Fan, C. Y., Trang, T. Animal models of chronic pain: Advances and challenges for clinical translation. J Neurosci Res. , (2016).
- Pleti....
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Reimpresiones y permisos
