Aquí, presentamos el nematodo Caenorhabditis elegans como modelo para estudiar la interacción microbiana host versátil.
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Artículo de método
El nematodo Caenorhabditis Elegans - un modelo versátil en Vivo para el estudio de las interacciones huésped-microbio
En este artículo
Resumen
Resumen
Demostrar un método usando Caenorhabditis elegans como anfitrión modelo para estudiar la interacción microbiana. Microbios se introducen a través de la dieta haciendo que el intestino la ubicación primaria de la enfermedad. El intestino nemátodo estructural y funcionalmente imita los intestinos mamíferos y es transparente lo que es susceptible de estudio microscópico de la colonización. Aquí mostramos que el patógeno pueden causar enfermedad y muerte. Somos capaces de identificar a mutantes microbianos que muestran alteración de la virulencia. Su respuesta innata conservado a estreses bióticos hace C. elegans un excelente sistema para sondear facetas de interacción inmune innata de host. Mostramos que hosts con mutaciones en el gen de la oxidasa dual no pueden producir especies reactivas de oxígeno y son incapaces de resistir el insulto microbiano. Además demostramos la versatilidad del ensayo de supervivencia presentado mostrando que puede ser utilizado para estudiar los efectos de los inhibidores del crecimiento microbiano. Este ensayo también puede ser usado para descubrir factores de virulencia de hongos como dianas para el desarrollo de nuevos antifúngicos, así como proporcionar una oportunidad para descubrir otras interacciones host-microbio. El diseño de este ensayo presta bien a alto rendimiento pantallas de todo el genoma, mientras que la capacidad de gusanos de crio-conservar para uso futuro, es un modelo rentable y atractivo todo animal para el estudio.
Introducción
C. elegans se ha utilizado como organismo modelo de gran alcance para más de 50 años. En la década de 1960, biólogo sudafricano Sydney Brenner pionero en el uso de C. elegans a estudiar desarrollo neuronal, allanando el camino para un largo linaje de científicos para estudiar diversos aspectos de la biología celular y animal de nematodos. Este linaje incluye a galardonados con el Premio Nobel Craig Mello y Andrew Fire para su trabajo de ARNi1, Robert Horvitz y John Sulston por su trabajo en el desarrollo de órganos y apoptosis2,3,4, M....
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Protocolo
1. preparación de medio de crecimiento nematodo (NGM)
- para 1 L de medios de comunicación combinan agar 20 g, 2,5 g fuente de nitrógeno orgánico (e.g., bacto-peptona) y 3 g de cloruro de sodio en un matraz de 2 L. Añadir 975 mL de agua estéril.
- Agregar en una barra de agitación estéril. Si se utiliza un dispensador automático de medios de comunicación, tubería de autoclave y media durante 15 min; los medios de comunicación deben ser esterilizado para ya si es un volumen más alto.
- Establecer los medios de comunicación en remover la placa y deje para enfriar.
- Una vez que los medi....
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Resultados
Un análisis de la patogenia (figura 1) con C. albicans y C. elegans se ha descrito previamente por nuestro laboratorio17,18 y otros laboratorios19,20. Demostramos la receptividad del uso de C. elegans para el estudio de virulencia de C. albicans que demuestran que las células de C. albicans son inge.......
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Discusión
Los métodos de ensayo de infección de C. elegans y supervivencia sobre exposición de por vida a C. albicans que hemos descrito pueden ser modificados para probar otro patógeno. Cultivos líquidos de otra bacteria u hongo pueden hechos y alimenta a C. elegans de manera similar. Además, pueden ensayarse la serie infecciones exponer primero la larva a un patógeno como se describe, y luego transferir los animales en un nuevo plato que contiene un patógeno independiente después de alcanzar la edad ad.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue realizado en y apoyado por el Instituto Politécnico de Worcester.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Agar (granulado, grado bacteriológico) | Apex BioResearch Products | 20-248 | |
| Alambre de aluminio (95% Pt, calibre 32) | Genesee Scientific | 59-1M32P | |
| Microscopio invertido Axiovision Zeiss | Axiovision Zeiss | ||
| Bacto-Peptone | Fisher BioReagants | BP1420-500 | |
| C. elegans cepa Bli-3 | Caenorhabditis Centro de Genética | Bli-3(e767) CB767 | |
| Cloruro de calcio | Fisher Scientific | BP51-250 | |
| Colesterol, grado Sigma, mínimo 99% | Sigma | C8667-25G | |
| Tubos de cultivo desechables (20 x 150 mm) | FIsherBrand | 14-961-33 | |
| (Iluminador de alta intensidad NI-150) | Nikon Instrument Inc. | ||
| E. coli | Caenorhabditis Centro de Genética | OP50 | |
| Prisma GraphPad (Software de análisis de curvas de supervivencia) | Software GraphPad | ||
| Caldo LB (Miller's) | Productos Apex BioResearch | 11-120 | |
| Sulfato de magnesio | Fisher Scientific | 10034-99-8 | |
| Placas de Petri medianas (35 x 10 mm) | Falcon | ||
| Fosfato de potasio monobásico | Sigma | P0662-500G | |
| Cloruro de sodio | Fisher Scientific | BP358-1 | |
| Fosfato de sodio | Fisher Scientific | BP332-500 | |
| Wildtype C. albicans SC5314 | ATCC | SC5314 | |
| Wildtype C. elegans | Caenorhabditis Genetics Center | N2 |
Referencias
- Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).
- Ellis, H. M., Horvitz, H. R. Genetic control of programmed cell death in the nematode C. elegans. Cell.
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Reimpresiones y permisos
