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Técnicas quirúrgicas para la colocación del catéter y nefrectomía 5/6 en modelos murinos de Diálisis Peritoneal

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DOI:

10.3791/56746

19 de julio de 2018

En este artículo

Resumen

Este artículo muestra el método para la colocación quirúrgica en ratones de un catéter intraperitoneal conectados a un puerto de acceso que se encuentra en la parte posterior del animal. Por otra parte, explica el procedimiento para una nefrectomía 5/6 para asemejarse al estado urémico de pacientes con EP.

Resumen

La diálisis peritoneal (DP) es una terapia de reemplazo renal consistente en la administración y posterior recuperación de un fluido hiperosmolares en la cavidad peritoneal para drenar el agua y tóxicos metabolitos que funcionalmente suficientes riñones no son capaces de eliminar. Desafortunadamente, este procedimiento deteriora el peritoneo. Daño tisular provoca la aparición de la inflamación para curar la lesión. Si la lesión persiste y la inflamación se vuelve crónica, puede conducir a la fibrosis, que es una ocurrencia común en muchas enfermedades. En PD, inflamación crónica y fibrosis, junto con otros procesos específicos relacionados con las mismas, conducen al deterioro de la capacidad de ultrafiltración, que significa el fracaso y posterior abandono de la técnica. Trabajar con muestras humanas proporciona información acerca de este deterioro pero presenta limitaciones técnicas y éticas para obtener biopsias. Modelos animales son esenciales para el estudio de este deterioro desde que superan estas deficiencias.

Un modelo de infusión crónica de ratón fue desarrollado en 2008, que se beneficia de la amplia gama de ratones modificados genéticamente, abriendo la posibilidad de estudiar los mecanismos implicados. Este modelo emplea un dispositivo personalizado diseñado para los ratones, que consta de un catéter conectado a un puerto de acceso que se coloca por vía subcutánea en la parte posterior del animal. Este procedimiento evita la continua punción del peritoneo durante experimentos a largo plazo, reducir las infecciones y la inflamación debido a las inyecciones. Gracias a este modelo, daño peritoneal inducido por la exposición fluida PD crónica ha sido caracterizada y modulada. Esta técnica permite la infusión de grandes volúmenes de líquidos y puede ser utilizada para el estudio de otras enfermedades en las que la inoculación de drogas u otras sustancias durante largos períodos de tiempo es necesaria.

Este artículo muestra el método para la colocación quirúrgica del catéter en ratones. Por otra parte, explica el procedimiento para una nefrectomía 5/6 imitar el estado de insuficiencia renal en pacientes con EP.

Introducción

Función renal y enfermedad Renal

Los riñones son órganos esenciales implicados en homeostasis, la filtración de sangre y la producción de la hormona. Hay varias condiciones que conducen a insuficiencia renal y a la posterior aparición de uremia, que ha sido definida como el conjunto de síntomas sistémicos debido a la acumulación de productos de desecho en la sangre retenida debido a trastornos de función renal1. Por otra parte, puesto que la capacidad homeostática de los mismos también se ve afectado cuando hay una falla renal, hipertensión por sobrecarga de volumen puede ocurrir, que también es peligroso ya que puede c....

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Protocolo

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el cuidado de Animal institucional y Comité de uso del centro de Biología Molecular Severo Ochoa (Madrid, España).

Nota: Se utilizaron ratones hembra C57BL/6J de 12 a 14 semanas de edad y aproximadamente 20 g de peso al inicio del estudio. Todos los animales fueron alojados bajo condiciones estándar y se les dio comida y agua ad libitum. Las condiciones de salud se revisaron diariamente. El material requerido, como guantes, paño, catéter, sutura y agujas, debe ser estéril.

1. colocar el catéter

Nota: Si los riñones no se el....

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Resultados

La figura 1 muestra todos los materiales necesarios para seguir los procedimientos descritos en la sección de protocolo. Para este ejemplo, ratones sometidos o no a nefrectomía (8 animales por grupo) (figura 2) fueron expuestos durante 40 días (dos inyecciones al día, espera al menos 2 horas entre ambos) a una mezcla de dos diferentes PDFs, comúnmente utilizado en la práctica clínica: Extraneal (icodextrina basado en PDF) y Diane.......

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Discusión

Los primeros datos publicados analizando alteraciones PD usando una técnica de "cerrar sistema" fue realizados en el 200929 . Este sistema de cierre significa que todo el dispositivo se encuentra dentro del cuerpo y fluido se inyecta con una aguja a través de un puerto de acceso. El problema técnico más importante en los modelos animales a largo plazo de la infusión de líquido a través de un catéter es la ocurrencia de la obstrucción. Posibles opciones son realizar omentectomy o añadir heparina a .......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Autores agradecen Ferrantelli E. y G. Liappas su apoyo establecer el protocolo de nefrectomía 5/6, R. Sánchez-Díaz y P. Martín por la ayuda con las evaluaciones de nitrógeno ureico y Hevia E. y F. Núñez para la asistencia con el cuidado de ratones. Este trabajo fue financiado por becas SAF2016-80648R del "Ministerio de Economía y Competitividad" / Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER/MINECO) a Manuel López Cabrera y PI 15/00598 desde el Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS)-fondos FEDER, a Abelardo Aguilera.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Minute Mouse Port 4French con cordones de retención y orificios transversalesTecnologías de accesoMMP-4S-061108A
Agujas de punta Posi-Grip Huber calibre 25 X 1/2&agudo; &agudo;  Tecnologías de accesoPG25-500
Kit de cauterización a alta temperaturaBovie18010-00
ForaneabbVie880393.4 HO
sutura no absorbible 6/0Laboratorio Agar;6121
Tijeras Pinzas Fine Science Tools14079-10
PinzaFine Science Tools11002-12
FineScience Tools13002-10
Buprenorfina 0,3 mg/mlproducto farmacéutico
hisopos defarmacéutico
Dalsy (ibuprofeno) 20 mg/ml suspensión oralAbbVie  S.R.L. Producto farmacéutico
algodón producto

Referencias

  1. Meyer, T. W., Hostetter, T. H. Uremia. New England Journal of Medicine. 357 (13), 1316-1325 (2007).
  2. Pyper, R. A. Peritoneal Dialysis. Ulster Medical Journal. 17 (2), 179-187 (1948).
  3. Chaimovitz, C. Peritoneal dialysis. Kidney International. 45 (4), 1226-1240 (1994).
  4. <....

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Etiquetas

Cavidad peritonealestado ur micoinfusi n de l quidosmodificaci n gen ticada o tisular

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