El presente Protocolo describe un procedimiento de evaluación del esperma de pescado utilizando el análisis de los espermatozoides asistido por ordenador y equipos de refrigeración. El software ofrece una rápida, precisa y análisis cuantitativo de la calidad del esperma de pescado basada en motilidad de espermatozoides, que puede ser una herramienta útil en la acuicultura para mejorar el éxito de la reproducción.
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Artículo de método
Evaluación del esperma de pescado utilizando Software y equipos de refrigeración
En este artículo
Resumen
Resumen
Para la evaluación de la calidad de gametos, hay técnicas innovadoras, rápidas y cuantitativas que pueden proporcionar datos útiles para la acuicultura. Sistemas computarizados para el análisis de la esperma se desarrollaron para medir varios parámetros y uno de los más comúnmente medido es la movilidad de los espermatozoides.
Inicialmente, esta tecnología fue diseñada para especies de mamíferos, aunque también puede ser utilizado para el análisis de esperma de peces. Peces tienen características específicas que pueden afectar el esperma evaluación como un momento de poca motilidad después de la activación y, en algunos casos, adaptación a temperaturas más. Por lo tanto, es necesario modificar los componentes tanto de software como de hardware para hacer análisis de motilidad más eficientes para el análisis de esperma de peces. Mamíferos de los espermatozoides, la placa de calefacción se utiliza para mantener temperaturas óptimas de los espermatozoides. Sin embargo, para algunas especies de peces, es ventajoso utilizar una temperatura más baja para prolongar la duración de la movilidad, ya que los espermatozoides permanecen activos por menos de 2 min. Por lo tanto, dispositivos de enfriamiento están necesarios refrigerar las muestras a temperatura constante durante el tiempo de análisis, incluyendo en el microscopio óptico. Este protocolo describe el análisis de la motilidad del esperma de pescado utilizando el software para el análisis de la esperma y refrigeración nuevos dispositivos para optimizar los resultados.
Introducción
La eficacia de la reproducción depende de la calidad de ambos gametos (óvulos y espermatozoides)1,2. Este es el principal factor que contribuye a la fertilización exitosa, permitiendo el desarrollo de crías viables3,4. La conveniente evaluación de la calidad de gametos es la mejor herramienta para definir el potencial de fertilidad de una muestra.
Mezclando la esperma de varios machos es una práctica común en la producción de muchas especies comerciales4. Sin embargo, la variabilidad de esperma entre ....
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Protocolo
Procedimientos relacionados con temas de animales han sido aprobados (2015/VSC/guisante/00064) por la Dirección General de producción agrícola y ganadera en la Universitat Politècnica de València.
1. recoger esperma de anguilas europeas maduras en cautiverio
Nota: Uso anguila europea los machos mantenidos en tanques con agua de mar y un sistema de recirculación a temperatura constante (20 ° C). Tratar con hormonas por inyección intraperitoneal semanal (gonadotropina coriónica humana (hCG); 1,5 UI / g de peso de pescado). Aclimatarse gradualmente a partir de 3 días en agua dulce peces seguido del reemplazo con agua ....
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Resultados
Análisis del efecto de tiempo en la motilidad del esperma
En el caso de la anguila europea, el porcentaje de espermatozoides estáticos aumentó de 15 s a 120 s después de la activación (de 24,4% a 40,7%) y el porcentaje de espermatozoides móviles de progresivas disminución (de 36,9% a 20,9%) (Figura 1A y 1B). Basada en la velocidad, las células espermatozoides demost.......
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Discusión
El software de análisis de esperma utilizado en este protocolo ha sido utilizado por investigadores en todo el mundo para diferentes especies, incluyendo peces. Sin embargo, los peces tienen algunas características específicas que pueden afectar la evaluación de espermatozoides. Espermatozoides de peces mostraron alta velocidad en el momento de la activación que declina rápidamente y conduce a un corto plazo de la movilidad después de la activación. Además, la temperatura de la reproducción depende de la especie y, en al.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este proyecto ha recibido financiación de la Asociación de costos (alimentación y agricultura costo acción FA1205: AQUAGAMETE y programa de investigación e innovación a los horizonte 2020 de la Unión Europea bajo la Marie Sklodowska-Curie proyecto IMPRESS (GA n 642893). Nos gustaría agradecer al equipo de científico de PROiSER, específicamente para el estudiante Alberto Vendrell Bernabéu, para su participación activa en la grabación de vídeo de este proyecto.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Gonadotropina coriónica humana Argent | Chemical Laboratories | hormona | hCG |
| benzocaína | Merck | E1501 Sigma | Anestesia |
| bicarbonato de sodio | Merck | S5761 Sigma | P1 medio |
| cloruro de sodio | Merck | 1.06406 EMD Millipore | P1 |
| cloruro de magnesio | Merck | 1374248 USP | P1 |
| cloruro de potasio | Merck | P3911-500G | P1 |
| cloruro de calcio | Merck | C7902-500G | P1 |
| sal comercial | Aqua Medic | Solución Meersalz | Activator |
| BSA | Merck | 05470 Solución Sigma | Activator |
| Tubos Falcon 15 ml | Merck | T1943-1000EA | |
| Tubos Falcon soporte | Merck | R5651-5EA | |
| Eppendorfs | Merck | T9661-1000EA | |
| Micropipeta 20 &; l | Gilson | PIPETMAN® Micropipeta clásica | |
| 10 y micro; l | Merck | Z683787-1EA | |
| Puntas para micropipetas 20 y micro; l | Merck | Z740030-1000EA | |
| Puntas para micropipetas 10 y micro; l | Merck | Z740028-2000EA | |
| Spermtrack | PROiSER | Cámara | |
| TruMorph | PROiSER | Microscopio TruMorph | |
| UB 200i Serie | PROiSER | Microscopio | |
| Placa de enfriamiento | PROiSER Prototipo PROiSER | ||
| Bloque de enfriamiento | PROiSER | Prototipo | |
| ISAS v1 | Software PROiSER | ISAS |
Referencias
- Kime, D. E., et al. Use of computer-assisted sperm analysis (CASA) for monitoring the effects of pollution on sperm quality of fish; application to the effects of heavy metals. Aquatic Toxicology. 36, 223-237 (1996).
- Kime, D. E., et al. Computer-assisted sperm analy....
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