Este artículo describe una metodología detallada para obtener secciones tangenciales aplastadas de cortezas mamíferas y visualizar los módulos corticales mediante histoquímica y métodos inmunohistoquímicos.
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Artículo de método
Visualización de módulos corticales en cortezas mamíferos aplanados
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Resumen
Resumen
La corteza del cerebro mamífero es parcellated en distintas subestructuras o módulos. Módulos corticales normalmente mienten paralelos a la lámina cortical y pueden estar delineados por ciertos métodos histoquímicos e immunohistochemical. En este estudio, podemos destacar un método para aislar la corteza del cerebro mamífero y aplanar para obtener URL de secciones a la hoja de la cortical. Lo más resaltado seleccionado histoquímicos y aplanado de métodos inmunohistoquímicos para procesar estas secciones tangenciales para visualizar los módulos corticales. En la corteza somatosensorial de varios mamíferos, realizamos histoquímica de la citocromo oxidasa para mostrar mapas de cuerpo o módulos corticales que representan diferentes partes del cuerpo del animal. En la corteza del entorhinal medial, un área donde se generan las células de la red, utilizamos métodos inmunohistoquímicos para resaltar módulos de neuronas genéticamente determinadas que se arreglan en un patrón de cuadrícula en la hoja de cortical a través de varias especies. En general, ofrecemos un marco para aislar y preparar layer-wise aplanado secciones corticales y visualizar los módulos corticales mediante histoquímica y métodos inmunohistoquímicos en una amplia variedad de cerebros mamíferos.
Introducción
Algunos de los cambios más significativos en la estructura del cerebro a través de la filogenia pueden observarse en la corteza cerebral. A pesar de diferencias significativas, la corteza de los animales sigue un patrón común y se puede dividir ampliamente en dos maneras distintas, por capas y áreas1. Capas corticales se encuentran paralelas a la superficie del cerebro y varían en número de 3 capas de cortezas reptiles2 a 6 capas de cortezas mamíferos1. Áreas corticales por el contrario son distintas regiones de la corteza que en gran parte corresponden a diferentes funcionalidades, por ejempl....
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Protocolo
Todos los procedimientos experimentales fueron realizados según las directrices alemanas sobre el bienestar de los animales bajo la supervisión de los comités de ética locales (LaGeSo). Humanos y murciélagos cerebro datos fueron derivados de Naumann et al. 5 el siguiente procedimiento se realiza en rata Wistar macho adulto (cepa: RJHan:WI).
1. perfusión y extracción de cerebro
Nota: Para obtener un cerebro fijado homogéneamente y sin sangre, las transcardial la perfusión del animal es muy animada, como sangre residual aumenta la señal de fondo no específica durante la coloración. Si....
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Resultados
Obtenidos de las secciones corticales aplanadas de la corteza somatosensorial en una variedad de cerebros y procesado por histoquímica de la citocromo oxidasa visualizar los módulos somatotópicos representando partes del cuerpo diferentes. Este enfoque comparativo permite estudiar las fuerzas evolutivas forma la corteza, por ejemplo, mostrando muy conservada representación de mistacial vibrissae en roedores y lagomorfos como barriles21 (
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Discusión
Modularidad en la corteza cerebral se ha identificado con una variedad de técnicas. Los primeros módulos corticales estudios típicamente identificados ya sea visualizando la célula regiones densas, o la ausencia de fibras1. Métodos posteriores han utilizado la presencia de paquetes dendríticas24, aferentes de una región particular25o enriquecimiento de neurotransmisores26. Aquí muestran dos técnicas de histoquímica de la citoc.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de cualquier relación comercial o financiera que pueda interpretarse como un potencial conflicto de interés.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Humboldt Universität zu Berlin, el centro de Bernstein para Berlín de neurociencia computacional, del centro alemán para enfermedades neurodegenerativas (DZNE), el Ministerio Federal alemán de educación e investigación (BMBF, Förderkennzeichen 01GQ1001A), NeuroCure y Gottfried Wilhelm Leibniz Premio del DFG. Agradecemos a Shimpei Ishiyama de excelente diseño gráfico y Juliane Diederichs excelente asistencia técnica.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| tinción de citocromo oxidasa | |||
| Citocromo c de corazón equino | Sigma-Aldrich | C2506 | |
| 3,3'Diaminobencidina tetraclorhidrato hidrato | Sigma-Aldrich | D5637 | |
| D(+)-Sacarosa | Carl Roth | 4621.1 | |
| Sulfato de níquel (II) amonio hexahidratado | Sigma-Aldrich | A1827 | |
| HEPES | Carl Roth | 9105.4 | |
| Nombre | Company | >Número de catálogo | Comentarios |
| Extracción de antígenos | |||
| Citrato trisódico dihidratado | Sigma-Aldrich | S1804 | |
| Ácido cítrico monohidratado | Sigma-Aldrich | C1909 | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comentarios |
| Tampón de fosfato/solución salina tamponada con fosfato/prefijo/PFA | |||
| dihidrógeno de potasio | fuerte Carl Roth | 3904.2 | |
| Cloruro de sodio | Carl Roth | 9265.1 | |
| Hidrogenofosfato disodium dihidratado | Carl Roth | 4984.3 | |
| Paraformaldehído | Carl Roth | 0335.3 | |
| TRITON-X 100 | Carl Roth | 3051.3 | |
| Name | Company | Número de catálogo | >Comentarios |
| Immunohistochemistry | |||
| Calbindin D-28k purificada de tripa de pollo, Swant RRID monoclonal de ratón | : AB_10000347 | ||
| Calbindina D-28k de calbindina de rata recombinante, Conejo policlonal | Swant | RRID: AB_10000340 | |
| Fracción V de albúmina, libre de biotina | Carl Roth | 0163.4 | |
| Nombre | Company | Número de catálogo | Comentarios |
| >Medios de montaje o congelación | |||
| Fluoromount (inmunofluorescencia) | Sigma-Aldrich | F4680 | |
| Eukitt ( histoquímica) | Sigma-Aldrich | 03989 | |
| Medio de congelación de tejidos | Leica Biosystems | NC0696746 | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| Alcohol deshidratación | |||
| Etanol 100% | Carl Roth | 9065.3 | |
| Etanol 96% | Carl Roth | P075.3 | |
| 2-Propanol | Carl Roth | 6752.4 | |
| Sustituto de xileno | Fluka | 78475 | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comentarios |
| >Dispositivos/herramientas | |||
| Microm HM 650V | Thermo Scientific | ||
| Jung RM2035 | Pinzas Leica Biosystems | ||
| Dumont #55 - | Inox Fine Science Tools | 11255-20 | |
| Pinzas Dumont #5 - Inox Biology Tip | Fine Science Tools | 11252-30 | |
| Pinzas de #5SF Dumont - Inox Super Fine Tip | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Tijeras para huesos - 24 cm | Herramientas de ciencia fina | 16150-24 | |
| Friedman Rongeur | Herramientas de ciencia fina | 16000-14 | |
| Tijeras romas Herramientas de | ciencia fina | 14000-18 | |
| Tijeras quirúrgicas - Bucles grandes Herramientas de | ciencia fina | 14101-14 | |
| Tijeras quirúrgicas - Herramientas de ciencia fina afiladas y romas | 14001-13 | ||
| Tijeras de iris finas | Herramientas de ciencia fina | 14094-11 |
Referencias
- Brodmann, K. Vergleichende Lokalisationslehre der Grosshirnrinde in ihren Prinzipien dargestellt auf Grund des Zellenbaues. , Barth. (1909).
- Naumann, R. K., et al. The reptilian brain. Curr Biol. 25 (8), R317-R321 (2015).
- Kaas, J. H.
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Reimpresiones y permisos
