Hipofunción de la glándula salival es una consecuencia frecuente de la terapia de radiación y enfermedad autoinmune. Evaluación reproducible de la función de la glándula salival en modelos de ratón de estas enfermedades es un desafío técnico. Aquí, se describe un método simple de medida preciso y reproducible de la producción de saliva de ratones.
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Artículo de método
Un método para la medición de la función de la glándula salival en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Pacientes con síndrome de Sjögren, una enfermedad autoinmune que afecta las glándulas exocrinas, desarrollan inflamación de la glándula salival y han reducido la producción de saliva. Del mismo modo, la producción de saliva está comprometida seriamente en pacientes que reciben radioterapia para cánceres de cabeza y cuello. Modelos de roedores, desarrollados para imitar estas condiciones clínicas, facilitan la comprensión de la patogénesis de la enfermedad y permitan el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas. Por lo tanto, la capacidad precisa, reproducible y varias ocasiones medir la función de la glándula salival en modelos animales es fundamental. Basándose en procedimientos previamente descritos en la literatura, que cumple estos criterios y se utilizó para evaluar la función de la glándula salival en ratones se desarrolló un método. Una ventaja adicional de este nuevo método es que se domina fácilmente y tiene poca variación inter-operador. Función de la glándula salival se evalúa como la cantidad (peso o volumen) o (mL/min) de la saliva producida en respuesta a la estimulación de la pilocarpina. La recogida de la saliva es una buena fuente para el análisis de contenido de proteína, las concentraciones de inmunoglobulinas y otras biomoléculas.
Introducción
Las glándulas salivales producen la saliva en respuesta a una variedad de estímulos neurológicos y mecánicos1. Los estímulos son llevados a través del sistema nervioso simpático y parasimpático a los receptores adrenérgicos y colinérgicos en la glándula. La pilocarpina es un agente colinérgico, párr simpaticomimético que actúa predominantemente sobre los receptores muscarínicos. En las glándulas salivales, induce la producción de saliva actuando sobre el receptor muscarínico M31. La producción de saliva tras la administración de pilocarpina es un indicador de la capacidad de responder a la estimulación de las glándulas s....
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Protocolo
El protocolo que se describe a continuación fue aprobado por el cuidado institucional de Animal y uso y sigue las normas éticas establecidas por los institutos nacionales de salud. Todos los datos presentados en este informe se generaron mediante el uso de ratones femeninos que fueron 10-12 semanas de edad. Se utilizaron las siguientes cepas de ratones: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S y F1 (B6XA/J). Todos los ratones fueron alojados en jaulas de barrera (a 5 animales por jaula) en condiciones libres de patógenos específicas y proporciona alimento y agua ad libitum.
1. preparación
- Para preparar una solución de clorhidrato de pilocarpin....
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Resultados
En los sistemas de modelo experimental de ratón, la capacidad de producir saliva en respuesta a la estimulación de la pilocarpina se utiliza como un indicador de la función de la glándula salival. La producción de saliva se midió en ratones hembra de 11 semanas de edad C57BL/6 por el método de esponja. En la figura 1A, los resultados se expresan como la cantidad de saliva (mg) recogido después de cada vez mayor dosis de pilocarpina. A la dosis de 1 mg/kg de p.......
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Discusión
La producción de saliva es un proceso complejo y está influenciada por muchos factores. Por lo tanto, la función de la glándula salival en animales de laboratorio de medición puede ser un desafío. Un desafío adicional es que mediciones repetidas de la función de la glándula salival en el mismo animal son necesarias para establecer el inicio de la enfermedad o para demostrar la recuperación después del tratamiento.
El método de hisopo que se describe en este informe es técnicamente fácil de rea.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de interés divulgar.
Agradecimientos
El estudio fue apoyado por una subvención de los institutos nacionales de salud, Instituto Nacional de Dental e investigación craneofacial (DE025030).
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Materiales
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Productos químicos para la recolección de saliva | |||
| pilocarpina | Alfa Aesar, Tewksbury, MA, EE. UU | B21410 | Diluido en solución salina isotónica estéril. Almacene alícuotas de un solo uso de 100X en stock a -80oC |
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| >Anesthesia Mix solution | Mix 1 mL de clorhidrato de ketamina + 0,5 mL de xilacina + 8,5 mL de solución salina isotónica estéril estéril en un vial estéril. Se puede utilizar durante 3 meses. | ||
| Zetamina (clorhidrato de ketamina) | Vet One, Boise, Idaho, EE. UU | C3N VT1 | El stock es de 100 mg/mL |
| Anased (xilazina) | Med-Vet International, Mettawa, IL, EE. UU | RXANASED-20 | El stock es de 20 mg/mL |
| Solución salina estéril isotónica | Vet One, Boise, Idaho, EE. UU | 501032 | Utilizado como diluyente |
| Lágrimas artificiales (ungüento oftálmico lubricante) | Henry Schien, Dublin, OH, EE. UU | . 48272 | Se utiliza para evitar que los ojos se sequen durante el procedimiento |
| Nombre | >Empresa | >Número de catálogo | Comentarios |
| Materiales para la recolección de saliva | |||
| SalivaBio Hisopo infantil | Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, EE. UU. | N/A | Hisopos envueltos individualmente Tubos |
| polipropileno de 50 ml | VWR, Radnor, PA, EE. UU | . 89004-364 | Corte la parte inferior del tubo. Asegúrese de que el borde de corte sea liso. |
| Tubos de microcentrífuga de 0,6 ml | VWR, Radnor, PA, EE. UU | . 87003-290 | Haga agujeros en la parte inferior del tubo con agujas de calibre 18 calentadas Tubos de |
| microcentrífuga de 2 ml | VWR, Radnor, PA, EE. UU | . 87003-298 | |
| Jeringas de insulina con agujas fijas de forma permanente | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, EE. UU | . 324702 | |
| Agujas de bisel regulares de | calibre 18Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE. UU. | 305195 | |
| Hoja de bisturí estéril #11 | Integra York Inc PA, EE. UU. | 4-311 | |
| Pinzas de microdisección | Roboz, Gaithersburg, MD, EE. UU. | RS-5139 | Punta angular dentada de 0,8 mm, 4" de longitud |
| Cinta de etiquetas | Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, EE. UU | SC-224487 | |
| Temporizador de 3 canales | Amazon.com, Seattle, WA, EE. UU | B06W2KCYVN | |
| Balanza analítica | Mettler Toledo, Columbus OH, EE. UU | ||
| Nombre | Company | Número de catálogo | Comentarios |
| >Químicos/ reactivos para inducir la disfunción salival | |||
| LPS | Invivogen, San Deigo, CA, EE. UU | TLRL-b5lps | Disolver en agua libre de endotoxinas y almacenar la solución madre a 5 mg/mL . diluir en HBSS estéril 100 ug/mL - inyectar 100 uL/ moue ip |
| Imject Alum adyuvante | Thermo Scientific | 77161 | Diluir 1:1 en solución salina estéril. Inyectar por vía intraperitoneal 0,1 mL/ratón |
| Antisuero anti-Ro52 de conejo | Generado en el laboratorio | Inmunización de conejos con Ro52 | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| Chemicals/ Kits para análisis de saliva | |||
| lisozima salival fuerte | |||
| EnzChek Kit de ensayo de lisozima | Sondas moleculares, Eugene, OR, EE. UU | E-22013 | Utilizado según las instrucciones del fabricante |
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Estimación > IgA salival | |||
| ratón | Southern Biotech, Birmingham, AL, EE. UU | . 0106-01 | Normas para ELISA sándwich - rango de 30 ng/mL a 0,5 ng/mL |
| IgA anti-ratón de cabra sin etiquetar | Southern Biotech, Birmingham, AL, EE. UU | . 1040-01 | Capa de 1 ug/mL en tampón de bicarbonato |
| IgA anti-ratón de cabra HRP | Southern Biotech, Birmingham, AL, EE. UU | . 1040-05 | Anticuerpo de detección utilizado en sustrato TMB con dilución 1:4000 |
| Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, EE. UU. | 555214 | Utilizado según las instrucciones del fabricante | |
| Immulon 4HBX Microtitulación de 96 placas de pocillos | Thermo Scientific, Rochester, NY, EE. UU | . 3855 | |
| Name | Company | >Número de catálogo | Comments |
| Estimación de proteínas salivales | |||
| Bio-Rad Protein Assay Colorante Reactivo Concentrado | BioRad, Hercules, CA, EE. UU | 5000006 | Para la estimación de proteínas según las instrucciones del fabricante |
Referencias
- Proctor, G. B. The physiology of salivary secretion. Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).
- Fox, R. I. Sjögren's syndrome. Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).
- Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A.
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Reimpresiones y permisos
