Aquí, presentamos un nuevo método para la resección parcial del lóbulo izquierdo hepático en ratones neonatales (día 0). Este nuevo protocolo es adecuado para el estudio de la lesión del higado aguda y la respuesta de lesiones en el ámbito neonatal.
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Artículo de método
Hepatectomía parcial lobulado: Un modelo quirúrgico para regeneración hepática morfológico
En este artículo
Resumen
Resumen
Regeneración de órganos morfológicos después de una pérdida aguda de tejido es común entre los vertebrados inferiores, pero se observa raramente en vida postnatal mamífera. Adultos regeneración hepática después de hepatectomy parcial 70% resulta en hipertrofia de hepatocitos con algunos replicación en lóbulos restantes con la restauración de la actividad metabólica, pero con pérdida permanente de la morfología del lóbulo lesionado y la arquitectura. Aquí detallamos un nuevo método quirúrgico en el recién nacido que sale de un ambiente fisiológico propicias a la regeneración. Este modelo implica la amputación del ápice del lóbulo izquierdo y un régimen de tratamiento conservador posterior y carece de la necesidad de ligadura de grandes vasos sanguíneos hígados o lesión química, dejando un ambiente fisiológico donde puede ocurrir la regeneración. Extendemos este protocolo amputaciones en juveniles ratones (P7-14), durante el cual el hígado lesionado transiciones de regeneración del órgano al crecimiento compensatorio por hipertrofia. El protocolo presentado, breve 30 minutos proporciona un marco para estudiar los mecanismos de regeneración, su declive asociado a la edad en mamíferos y la caracterización de la supuesta madre hepática o progenitores.
Introducción
La capacidad de regenerar un órgano, o para restaurar la forma y función, se ha pensado sobre todo se pierden en el tiempo evolutivo. Se ha encontrado el potencial regenerativo del hígado mamífero adultos después de lesión aguda del químico o físico que implica la movilización de todos los hepatocitos restantes dando lugar a olas de hipertrofia y rondas de división celular, resultando en un funcional pero órgano arquitectónicamente diferentes1,2,3,4,5. Recientemente, estudios han empezado a caracterizar la ....
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Protocolo
Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo en estricta conformidad con las directrices establecidas por la Asociación para la evaluación y acreditación de laboratorio Animal Care Internacional (AAALAC) y la Universidad de Stanford Panel administrativo en Animal de laboratorio Cuidado (APLAC), (número de protocolo #10266) y en los Estados Unidos, o el Acta de Bienestar Animal Europea, Directiva 2010/63/UE. El protocolo fue aprobado por la Comisión de ética de los experimentos del Animal del gobierno de Baviera, Alemania y recibió el permiso No: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. animal preparación
- Preparar una jaula vacía con ....
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Resultados
Figura 1A detalla una cronología general de la hepatectomía lobulado parcial neonatal (esquemática en la figura 1B) y la duración prevista de tiempo de espera hasta que se observa regeneración. Regeneración sutil del lóbulo izquierdo puede ser observado entre 7 y 14 días post cirugía. Regeneración completa se observa a menudo después de 56 días post cirugía. Ratones no deben mostrar ningún signo de anormalidades fisiológicas desp.......
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Discusión
Lesión hepática aguda tradicionalmente se ha estudiado usando químico (acetaminofen, etanol, tetracloruro de carbono), o modelos quirúrgicos (hepatectomía parcial del 70%). La respuesta regenerativa después de hepatectomy parcial 70% se ha caracterizado para implicar hipertrofia de hepatocitos global y múltiples rondas de división celular4,5. Para detener la hemorragia, sin embargo, este modelo es limitado, como los vasos principales se deben ligarse dejando un a.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen ninguna revelación.
Agradecimientos
Agradecemos a P. Chu para realizar H & E y la histología; y C. Wang y A. McCarty para discusiones útiles. Investigación fue apoyada con fondos de la Virginia y D. K. Ludwig Fund para investigación del cáncer; el National Heart, Lung and Blood Institute (R01HL058770 y U01HL099999); y el Instituto de California de medicina regenerativa (RC1 00354) subvenciones a I.W. Y.R. fue apoyado por el humano frontera programa carrera desarrollo Premio de Ciencias (CDA00017), la Fundación alemana de investigación (RI 2787/1), el Instituto de células madre de Siebel y la Thomas y Stacey Siebel Foundation (1119368-104-GHBJI). J.M.T. fue apoyado por el NIH (T32GM007365), el Premio Nac....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Animals | |||
| madre con camada de cachorros neonatales del día 0 (cualquier cepa)Madre | |||
| sustituta y camada sustituta (opcional) | |||
| Name | Company | Número de catálogo | Comentarios |
| Reactivos estándar | |||
| Suero tamponado con fosfato (PBS) | |||
| Providina-yodo o solución | |||
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios< |
| fuertefuerte>Equipo quirúrgico | |||
| Microscopio de disección | Zeiss | ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000 | |
| Micro tijeras de resorte recto de 3 mm | Vannas | 72932-01 | |
| 5SF Pinzas | Dumont | 11252-00 | |
| Pinza recta Kelly | Grainger | 17-050G | |
| Almohadilla térmica | Sunbeam | 000771-810-000 | |
| Isoflurano | Abbott Labs | 0044-5260-05 | |
| Sistema de anestesia para roedores | Kent Scientific | 1205S | |
| Gasa, 10.16 x 10.16cm | Fisher Scientific | 13-761-52 | |
| Nombre | Company | Número de catálogo | >Comentarios |
| Equipo estándar | |||
| microcentrífuga | Eppendorf | 22363204 | |
| 6-0 Placas de Petri | Ethicon | MCP489G | |
| Fisher Scientific | S35839 | ||
| Pipet-Aid, Lisa, 110V | Drummond | 4-000-110 | |
| Balanzas analíticas Mettler Toledo NewClassic ME | Fisher Scientific | 01-912-402 | |
| Cámara de inducción de bajo costo | Kent Scientific | SOMNO-0730 |
Referencias
- Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. Liver Regeneration. Science. 276 (80), 60-66 (1997).
- Ponfick, V. A. Surgery of the Liver. Lancet. 1, 881(1890).
- Higgins, G., Anderson, R. M. Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).
- Miyaoka, Y., et al.
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Reimpresiones y permisos
