En este trabajo describimos un bioensayo agudo, crónico y multigeneracional para estudiar los efectos de los estresores individuales y combinados en los killis turquesa Nothobranchius furzeri. Este protocolo está diseñado para estudiar características de historia de vida (mortalidad, crecimiento, fecundidad, peso) y máximo térmico crítico.
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Artículo de método
Protocolo de aguda y crónica pruebas de ecotoxicidad de los killis turquesa Nothobranchius furzeri
En este artículo
Resumen
Resumen
Los killis Nothobranchius furzeri es un organismo modelo emergente en el campo de la ecotoxicología y ha demostrado su aplicabilidad en las pruebas de ecotoxicidad aguda y crónica. En general, la sensibilidad de las especies a los compuestos tóxicos es en la gama, o más, que otras especies modelo.
Este trabajo describe los protocolos de bioensayos agudos, crónicos y multigeneracionales de efectos individuales y combinados estresor en N. furzeri. Debido a su tiempo de maduración corta y ciclo de vida, este modelo vertebrado permite el estudio de como tiempo de maduración y fecundidad dentro de cuatro meses. Ensayos de exposición de todo el ciclo de vida transgeneracional se pueden realizar en tan poco como 8 meses. Puesto que esta especie produce huevos que son resistentes a la sequía y permanecer viable durante años, el cultivo in situ de las especies no es necesario pero los individuos pueden ser reclutados cuando sea necesario. Los protocolos están diseñados para medir rasgos de historia de vida (mortalidad, crecimiento, fecundidad, peso) y máximo térmico crítico.
Introducción
Perfiles de sensibilidad de una gran variedad de especies a sustancias tóxicas estratégicamente seleccionados han sido descritos1 para la legislación de alcance europeo (registro, evaluación, autorización y restricción de productos químicos). Pruebas de toxicidad aguda o a corto plazo se utilizan principalmente para este propósito ya que dan una indicación rápida de la sensibilidad de una especie. Sin embargo, en su ambiente natural, los organismos están expuestos durante períodos mucho más prolongados y ciclo de vida completo o incluso varias generaciones podrían ser afectado2. Además, organismos en ambientes contaminad....
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Protocolo
Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el Comité de ética de KULeuven.
1. eclosión y mantenimiento General de furzeri N.
- Preparar pescado mediano (pH 7) a una temperatura de 14 ° C y añadir agua purificada del tipo II, con añadido sales estandarizados, a una conductividad de 600 μS/cm (24 ° C).
- Seleccione los huevos de la línea de laboratorio GRZ (Gona-Rhe-Zhou) que han sido almacenadas bajo condiciones estandarizadas13. Seleccione los huevos en la etapa DIII (es decir, listo para eclosionar), reconocible por la presencia de ojos dorados9 ....
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Resultados
Los resultados de la exposición aguda de N. furzeri a diferentes concentraciones de cobre, calcula como 2.5.2, mostrar las relaciones cleardose-respuesta (figura 1). Hay un aumento en la mortalidad con el aumento de concentración de sustancias tóxicas. Valores de LC50 disminuyen con el tiempo, lo que significa que con la disminución de las concentraciones, más tiempo pasa antes de 50% de la matriz de repeticiones. Para los resultados detal.......
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Discusión
Este trabajo describe un nuevo bioensayo usando Nothobranchius furzeri, un organismo modelo emergente, para estudiar al individuo y combina efectos a largo plazo de sustancias tóxicas y otros estresores. Los protocolos presentados fueron aplicados con éxito para medir la sensibilidad de las especies a una gran variedad de sustancias tóxicas (cobre, cadmio, 3, 4-dicloroanilina y clorpirifos). Debido a su rápido ciclo de vida, este modelo vertebrado permite evaluación de subletales y efectos transgeneracionales de.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos al grupo de la esfera de la UAntwerpen y el Departamento de protección de cultivos de todo el análisis de muestras de agua. Durante este proyecto fue apoyado por el centro de excelencia ' Eco y dinámica socio-evolutiva (PF/10/007) del fondo de investigación de KU Leuven. AFG (11Q0516N) y ESJT (FWO-SB151323) fueron financiados como doctorado y TP (12F0716N) como becario post-doctoral por FWO Flandes (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| agua purificada Tipo 1 (mili Q) | Millipore | ||
| Sea Salt | Instant Ocean | ||
| plástico | SAVIC | Siempre separado material para tratamientos de control y toxicidad Tanque de | |
| plástico de 1L (desove) | Avamoplast | Siempre material separado para el control y los tratamientos de toxicidad | |
| redes Aqua | bilzen | Material siempre separado para tratamientos de control y toxicidad | |
| Tarros de vidrio de 2L | Sepac-Flacover | Material siempre separado para tratamientos de control y toxicidad | |
| Tarros de vidrio de 0,5L | Sepac-Flacover | Material siempre separado para los tratamientos de control y toxicidad | |
| Huevos de Artemia | Quirónomo | ||
| Ocean Nutrition Ocean Nutrition | congelados | ||
| tricaine | Sigma aldrich | ||
| placas de Petri | VWR | ||
| Parafilm | Pipetas VWR | ||
| Pinzas MLS | |||
| FST | |||
| 500 µ tamiz de malla m | / | ||
| microcentrífuga de fabricación propia (2 ml) | MARCA | Para almacenar pescado en frascos | |
| de vidrio para | Sigma aldrich | Para análisis de agua | |
| barco de pesaje | MLS | ||
| Jiffy 7c pellets | Jiffy | ||
| de agua | Gilac | para | |
| nitrógeno líquido Ctmax | Termómetro digital Air Liquide | ||
| Testo AG | testo 926 | ||
| HETO Calentador térmico | Anker Schmitt | ||
| Balanza calibrada | Mettler-Toledo AG | ||
| Cámara | / | ||
| plataforma para cámara | / | Fabricación propia | |
| Kit multiparamétrico | HACH | ||
| Congelador (-80 ° C; C) | Panasonic Ultra low temperature freezer | ||
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| Fysio | |||
| 0.1 M TRIS– HCl, pH 8.5, 15 % polivinil pirrolidona, 153 y micro; M MgSO4 y 0,2 % Triton X-100 | |||
| cloroformo:metanol | Sigma Aldrich | ||
| tripalmitato de glicerilo | Sigma Aldrich | ||
| amiloglucosidasa | Sigma Aldrich | A7420 | |
| reactivo de ensayo de glucosa | Sigma Aldrich | G3293 | |
| Biorad colorante proteico | VWR | ||
| Placa de microtitulación de 96 pocillos | Greiner Bio-one | ||
| 384 placas de microtitulación | Greiner Bio-one | ||
| 2 ml tubos de vidrio | Fiers | Para el análisis de grasa | |
| 2,5 ml Tubos eppendorf Homogeneizador | VWR | ||
| Ultra-turrax Fotoespectrómetro TP 18/10 | |||
| Infinite M200 Calentador TECAN | |||
| para tubos de vidrio | Centrífuga Hach COD REACTOR | ||
| Centrífuga Eppendorf 5415 R | |||
| Incubadora | Bumako |
Referencias
- European-Chemicals-Bureau. TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1). , (2005).
- Philippe, C., et al.
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Reimpresiones y permisos
