Cuantificación de lípidos abundancia y evaluación de la distribución de lípidos en Caenorhabditis elegans por Nilo rojo y aceite rojo O manchas

Resumen

Nilo rojo de fijo Caenorhabditis elegans es un método para la medición cuantitativa de los depósitos de lípidos neutros, mientras que el aceite rojo O tinción facilita la evaluación cualitativa de la distribución de lípidos entre los tejidos.

Resumen

Caenorhabditis elegans es un organismo modelo excepcional en el que estudiar el metabolismo de los lípidos y la homeostasis de la energía. Muchos de sus genes de lípidos se conservan en los seres humanos y están asociados con el síndrome metabólico u otras enfermedades. Examen de la acumulación de lípidos en este organismo puede realizarse por fijadores colorantes o métodos libres de etiqueta. Manchas de fijador como Nilo rojo y aceite O rojo son maneras baratas, confiables para medir cuantitativamente los niveles de lípidos y observar cualitativamente la distribución de lípidos a través de los tejidos, respectivamente. Por otra parte, estas manchas permiten proyección de alto rendimiento de varios genes del metabolismo de lípidos y vías. Además, su carácter hidrofóbico facilita la solubilidad en lípidos, reduce la interacción con los tejidos circundantes y evita la disociación en el solvente. Aunque estos métodos son eficaces en el examen de contenido lipídico general, no proporcionan toda la información sobre la composición química y la diversidad de los depósitos de lípidos. Para estos propósitos, métodos libres de etiqueta tales como microscopia de GC-MS y los coches son mejores satisfecho, sus costos no obstante.

Introducción

Los lípidos son esenciales para la vida. Son componentes integrales de las membranas, actúan como mensajeros secundarios y transductores de señales y tienen funciones cruciales en almacenamiento de energía. Cuando el metabolismo lipídico se altera, conduce a enfermedades como obesidad y diabetes tipo II, que están presionando de preocupaciones de salud pública⁹. Elegans de Caenorhabditis (C. elegans) es un organismo modelo excelente estudiar el metabolismo de los lípidos ya que tiene un ciclo de vida relativamente corto, un cuerpo transparente, un linaje de la célula conocidos y un genoma completamente secuenciado. Principalme....

Protocolo

1. el Nilo rojo (NR) tinción de lípidos

1. Preparación de solución 5 mg/mL NR
   1. En una botella de 500 mL, añadir 100 mg de polvo NR a 200 mL de acetona al 100%.
   2. Cubrir la botella con papel de aluminio para evitar cualquier exposición a la luz.
   3. Antes de usar, agitar la solución durante 2 h en la oscuridad.
   4. Para uso a largo plazo, guarde la solución NR en un frasco bien sellado sin ninguna exposición a la luz. Solución madre de escala NR según las necesidades de investigación. Asegúrese de que la misma solución se utiliza en experimentos NR-coloración para obtener coloración consistente y resultados de la proyección de image....

Resultados

SKN-1 es un bZip, factor de transcripción de cytoprotective que comparte homología con NRF2 mamíferos y se ha demostrado para mediar la oxidación de los ácidos grasos. Dependiendo de la concentración de glucosa en su dieta, gusanos con un alelo activado constitutivamente skn-1 muestran los niveles de lípidos diferentes cuando manchados con rojo Nilo⁷. Figura 1A -C muestra activado skn-1 animales expue.......

Discusión

El aumento de la obesidad y las tasas de enfermedad metabólica hace que C. elegans un modelo adecuado para estudiar los mecanismos que regulan la acumulación de grasa en las células y tejidos. La evidencia reciente sugiere que los cambios en los niveles de lípidos están correlacionados con los procesos celulares que van desde⁸, la activación de la hormona receptores², salida reproductiva⁵de señalización de la insulina. En comparación con mic.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Imager.Microscopio M2m	Zeiss	n/a	Microscopio de fluorescencia
Cámara ERC5s	Axiocam	n/a
Cámara MRm	Axiocam	n/a	Rojo del Nilo con capacidad de fluorescencia
	Thermo Fisher	N1142	Tinción lipídica
Aceite rojo O	Alfa Aesar	A12989	Tinción lipídica
DAPI	Thermo Fisher	D1306	Tinción de ADN
Alcohol isopropílico	BDH	BDH1133-1LP	Solución fijadora
0,2 y micro; m filtro de jeringa seterile	VWR	28145-477 filtro de	acetato de celulosa
centrífuga 5430	Eppendorf	5428000015	centrífuga
agitador Asador	laboratorio Quake	400110Q
Rotador de tubo	VWR	10136-084	Rotador
K2HPO4	Sigma-Aldrich	7758-11-4	NGM
KH2PO4	Sigma-Aldrich	7778-77-0	NGM
MgSO4	Alfa Aesar	7786-30-3	NGM
CaCl2	Sigma-Aldrich	10035-04-8	NGM
NaCl	Sigma-Aldrich	7647-14-5	NGM
Colesterol	Sigma-Aldrich	57-88-5	NGM
Peptona	BD Biosciences	211677	NGM
Agar	Teknova	L9110	NGM
LB media	Sigma-Aldrich	L3147	Crecimiento bacteriano

con capacidad de color de agitador