En este trabajo, proporcionamos un protocolo detallado para la exposición de especies en el género Drosophila a contaminantes con el objetivo de estudiar el impacto de la exposición en un rango de salidas fenotípicas en diferentes etapas de desarrollo y para más de una generación.
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Artículo de método
Protocolo experimental para el uso de Drosophila como sistema modelo de invertebrado para ensayos de toxicidad en el laboratorio
En este artículo
Resumen
Resumen
Propiedades emergentes y factores externos (interacciones a nivel de población y ecosistema, en particular) desempeñan importantes funciones en la mediación de las terminales de importancia ecológica, aunque se consideran raramente en estudios toxicológicos. D. melanogaster se perfila como un modelo de toxicología para el impacto conductual, neurológico y genético de sustancias tóxicas, para nombrar unos pocos. Más importante aún, se pueden utilizar especies en el género Drosophila como sistema modelo para un enfoque marco integrador incorporar propiedades emergentes y responder preguntas ecológicamente relevantes en la investigación de Toxicología. El objetivo de este trabajo es proporcionar un protocolo para la exposición de especies en el género Drosophila a contaminantes para ser utilizado como sistema modelo para una gama de salidas fenotípicas y ecológicamente pertinentes preguntas. Más específicamente, este protocolo permite 1) enlazar múltiples niveles biológicos de organización y entender el impacto de sustancias tóxicas en ambos fitness nivel de individuo y población; 2) prueba el impacto de sustancias tóxicas en las diferentes etapas de la exposición del desarrollo; 3) consecuencias multigeneracionales y evolutivo prueba de contaminantes; y 4) probar simultáneamente múltiples contaminantes y estresantes.
Introducción
Cada año, aproximadamente 1.000 nuevos productos químicos son introducidos por la industria química1,2; sin embargo, los impactos ambientales de sólo un pequeño porcentaje de estos productos químicos son probados antes de distribución2,3. Aunque catástrofes a gran escala son poco comunes, subletal y crónica de la exposición a una gran variedad de contaminantes están muy extendidos en los seres humanos y vida silvestre4,5. El enfoque histórico de toxicología ambiental y Ecotoxicología fue probar....
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Protocolo
El siguiente protocolo es un protocolo experimental que se utiliza para criar especies en el género Drosophila en medio contaminado cuando la ingestión de una toxina es apropiada; otras formas de exposición son posibles usando Drosophila modelo11,15,16,26. Los métodos descritos en este protocolo se han descrito previamente por Hirsch et al. 19 y Peterson et al. 23 , 24 , 25.
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Resultados
Exponiendo oralmente Drosophila a contaminantes en todo el desarrollo, se pueden probar diversas cuestiones toxicológicas exponiendo Drosophila en los diferentes niveles de organización biológica. Esta sección presenta resultados representativos obtenidos utilizando este protocolo en artículos previamente publicados23,24. En particular, este protocolo fue utilizado previamente para evaluar la acumulación, la elim.......
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Discusión
Drosophila melanogaster se ha establecido como un poderoso modelo para una variedad de procesos biológicos debido a la amplia conservación de genes y rutas de D. melanogaster y los seres humanos13,14. Por las mismas razones que es un potente modelo para la ciencia médica, la Drosophila ha surgido como modelo adecuado para estudiar el impacto de la contaminación antropogénica en una gama de puntos finales toxicológicos. Varios laboratori.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Esta publicación fue apoyada por una beca del Departamento de Educación (Premio PR #P031C160025-17, título del proyecto: 84,031 C) a las comunidades de Colorado State University-Pueblo (CSU-Pueblo) al compromiso de construir activos tallo (BASE C). Agradecemos a Zoología actual y Elsevier para proporcionar los derechos para utilizar los resultados representativos publicados en trabajos previos, así como los editores de Zeus por habernos brindado la oportunidad de publicar este protocolo. También nos gustaría agradecer al programa de BASE de C, Dr. Brian Vanden Heuvel (C-BASE y Departamento de biología, CSU-Pueblo), Departamento de Biología de CSU-Pueblo, Thomas Grazia....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Carolina Biological Instant Drosophila Medium Formula 4-24 | Carolina Biological | 173204 | |
| Drosophila viales, Estrecho (PS), Poliestireno, Superbulk, 1000 viales/unidad | Genessee Scientific | 32-116SB | Se utiliza para almacenar moscas |
| Flugs Cierres para viales y botellas, Frascos estrechos de plástico | Genessee Scientific | 49-102 | Se utiliza para almacenar moscas |
| Bandejas de cartón, bandejas sólo, estrecho | Genessee Scientific | 32-124 | Se utiliza para organizar las poblaciones de moscas Bandejas de |
| cartón, solo divisores, estrechos | Genessee Scientific | 32-126 | Se utiliza para organizar las poblaciones de moscas |
| Thermo Scientific Botellas cuadradas de HDPE de boca ancha Nalgene con cierre | Fischer Scientific | 03-312D | Útil para el almacenamiento de contaminantes |
| Thermo Scientific Nalgene Botellas de lavado de LDPE codificadas por colores | Fischer Scientific | 03-409-17C | Útil para el almacenamiento de contaminantes |
| Eppendorf Repetidor M4 Dispensador manual de pipetas | de mano Fischer Scientific | 14-287-150 | Se utiliza para preparar |
| puntas de pipeta avanzadas Combitips - Estándar, Eppendorf Consejos de calidad | Fischer Scientific | 13-683-708 | Se utiliza para preparar Flypad mediano |
| , tamaño estándar (8,1 x 11,6 cm) | Genessee Scientific | 59-114 | Se utiliza para anestesiar moscas |
| Válvula de pie | Genessee Scientific | 59-121 | Se utiliza para anestesiar moscas |
| Tubería, verde (1 pie continuo/unidad) | Genessee Scientific | 59-124G | Se utiliza para anestesiar moscas |
| Aceite mineral, ligero, blanco, grado de alta pureza, 500 mL Botella de HDPE | VWR | 97064-130 | Se utiliza para hacer una morgue |
| Juego de matraces de vidrio Erlenmeyer - 3 tamaños - 50, 150 y 250 ml, Karter Scientific 214U2 | Walmart | No aplicable | Se utiliza para hacer una morgue |
| BGSET5 Juego de vasos de precipitados de vidrio de 5 | Walmart | ||
| Línea endogámica o de tipo salvaje de Drosophila | Bloomington Drosophila Stock Center | ||
| https://bdsc.indiana.edu Poblaciones salvajes de Drosophila | UC San Diego Drosophila Stock Center | https://stockcenter.ucsd.edu/info/welcome.php |
Referencias
- Postel, S. Defusing the Toxics Threat: Controlling Pesticides and Industrial Waste. , Worldwatch Institute. Washington, DC. (1987).
- Vitousek, P. M., Mooney, H. A., Lubchenco, J., Melillo, J. M. Human domination of earth's ecosystems. Science. 277, 494-499 (1997).
- United Nations Environment Program (UNEP).
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