Procedimientos experimentales para la posterior extracción de los tejidos linfáticos para probar la activación de las células dendríticas linfoides se describen después del tratamiento de un nanomaterial inmunoestimulante.
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Artículo de método
Evaluación de inmunoestimulantes agente: Linfoide inyección y extracción de tejido dendrítico de la célula dependiente de la ruta de activación
En este artículo
Resumen
Resumen
Para la evaluación de un nuevo agente terapéutico para la inmunoterapia o vacunación, análisis de la activación inmune celular en tejidos linfáticos es esencial. Aquí, hemos investigado los efectos inmunológicos de un inmunoestimulante novela lípido-ADN en forma de nanopartículas de vías de administración diferentes en el ratón: oral, intranasal, subcutánea, bandolero, intraperitoneal e intravenosa. Estas inyecciones directamente influirá en la respuesta inmune y recolección de tejidos linfáticos y análisis de la activación de células dendríticas (DC) en los tejidos son partes cruciales de estas evaluaciones. La extracción de los ganglios linfáticos mediastínicos (mLNs) es importante pero bastante complejo debido al tamaño y la ubicación de este órgano. Se describe un procedimiento paso a paso para la cosecha del bazo, nodo de linfa inguinal (iLN) y mLN y análisis de activación de DC por citometría de flujo.
Introducción
Avances en Inmunología y nanomateriales han conducido a una gran cantidad de posibles nuevas estrategias terapéuticas para aplicaciones en biomedicina, incluyendo immunostimulation y entrega de la droga. Optimización de la vía de administración es un aspecto fundamental que afecta a la eficacia de agentes inmunoestimulantes. Una nanopartícula de inmunoestimulantes (INP) que consta de ADN es un coadyuvante de nano-inmune desarrollado recientemente uno montado por la separación del microphase debido a la estructura anfifílicas de lípidos-ADN1. Por lo tanto, los protocolos de INP que implica administración del material1
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Protocolo
Se realizaron todos los procedimientos experimentales incluyendo aislamiento manipulación, sacrificio y órgano animal en estricta conformidad con las normas del Comité de uso en el centro clínico de salud pública de Shanghai y centro médico de Asan e internacional Animal Care. El protocolo de estudio fue aprobado por los respectivos Comités sobre la ética de los experimentos animales en el centro clínico de salud pública de Shanghai (número de protocolo del ratón: SYXK-2010-0098) y el centro médico de Asan (2016-02-168).
1. preparación del Material
Nota: Un nano-adyuvante, INP, conformada por un portador uno mismo-....
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Resultados
Para evaluar rutas de inyección apropiado del INP para la activación del tejido linfático DC, la población de DC como linaje fue definida como –CD11c+ de las células en el bazo, iLN y mLN y analizó los niveles de expresión de moléculas coestimuladoras. Tratamiento de INP por inyección intravenosa (i.v.) y subcutánea (s.c.) promovió aumentos sustanciales en la expresión de CD40, CD80 y CD86 en el bazo y iLN DCs (figura 2B
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Discusión
Se han logrado muchos avances en nanotecnología y de la inmunología a través de la investigación terapéutica del fármaco y el immunostimulation. Cuidadosa selección del método de inyección se sabe para ser importante para el immunostimulation, que era el objetivo del presente estudio.
Rutas de inyección diferentes fueron evaluadas por un natural no tóxico y biodegradable basado en el ADN material, INP (inmunoestimulantes nanopartículas), para determinar el camino que rindieron los mejores resu.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Esta investigación fue apoyada por el programa de descubrimiento creativo de materiales a través de la nacional investigación Fundación de Corea (NRF) financiado por el Ministerio de ciencia, TIC y planeación de futuro (NRF-2017M3D1A1039421) y por el programa de biotecnología marina, financiado por el Ministerio de océanos y pesca, República de Corea y una subvención (20150220).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Material | |||
| solución de isoflurano | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Proceso de anestesia |
| Jeringa de tuberculina 1 ml - | Junglim | N/A | Inyección |
| 50 mL tubo cónico | S.P.L | 50050 | Proceso de anestesia |
| Jeringa de insulina de 1 ml | (BD Ultra-FineTMII)_short aguja | 324826 | Inyección intramuscular |
| DMEM Hiclona de alta glucosa | SH30081.01 | Almacenamiento de órganos | |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | Análisis FACS |
| Alcohol etílico anhidro 99,5 % | Daejung | 4022-4110 | Desinfectante |
| Equipos | |||
| FineCycler C100 (Termociclador) | Centrífuga | ||
| FACS tubo | Análisis FALCON | 2052 | FACS |
| Citómetro de flujo automatizado de alto rendimiento | BD (EE. UU.), FACSVerse-FACS | análisis |
Referencias
- Park, H. Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , Department of Chemistry. Pukyong National University, Master Thesis. (2016).
- Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M.
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Reimpresiones y permisos
