Aquí, presentamos un protocolo para desarrollar un modelo de cáncer en vivo utilizando la tecnología de hoja de la célula. Tal modelo podría ser muy útil para la evaluación de la terapéutica contra el cáncer.
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Artículo de método
Explorar el potencial de la hoja de células madre mesenquimales en el desarrollo de Carcinoma Hepatocelular en Vivo
En este artículo
Resumen
Resumen
Un en vivo modelo animal que simula cáncer podría tener diversas aplicaciones que ofrecen información clínica importante. Las técnicas actualmente utilizadas para el desarrollo de modelos de cáncer en vivo tienen considerables limitaciones. Por lo tanto, en este estudio, nuestro objetivo es implementar la tecnología de hoja de la célula para desarrollar un modelo de cáncer en vivo . Carcinoma hepatocelular (HCC) se desarrolló con éxito en ratas desnudas utilizando hojas de célula creadas a partir de células de línea de células HCC. Las hojas de la célula de cáncer se generan a través de la adhesión intracelular y la formación de una estructura estratificada, controlada por la matriz extracelular. Esto permite que el trasplante de la hoja HCC en el hígado y la creación de un modelo animal con tumores dentro de un mes. Además, se investiga el papel de las células madre mesenquimales (MSC) en el desarrollo de este modelo de cáncer. Además de la hoja de línea de células HCC, se crean otro hojas de dos células: una hoja de células HCC y médula MSCs (BMMSCs) y una hoja de células HCC y cordón umbilical MSCs (UCMSCs). Las hojas que tienen una combinación de células HCC y MSCs también son capaces de producir un animal con tumores. Sin embargo, la adición de MSCs reduce el tamaño del tumor formado, y este efecto adverso en el desarrollo del tumor varía dependiendo de la fuente de las MSCs usado. Esto indica que se podría utilizar una hoja de la célula de ciertos subtipos MSC en control y gestión de tumor.
Introducción
HCC es un cáncer primario del hígado que está significativamente asociado con un pronóstico pobre. Anualmente, casi medio millón se diagnostican nuevos pacientes con HCC, que representan el 85% de pacientes de cáncer de hígado en todo el mundo1. Hepatocarcinogenesis no es una enfermedad de forma individual; por el contrario, es una colección de enfermedades que tienen diferentes características histopatológicas y la variabilidad genética y genómica, además variados resultados pronóstico1. Por lo tanto, los principales retos en el desarrollo de una estrategia terapéutica efectiva para el CHC son el conocimiento limitado d....
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Protocolo
El protocolo sigue las pautas de cuidado de los animales de Comité de ética de la Universidad Rey Saud. Procedimientos quirúrgicos, anestésicos y otros medicamentos utilizados en animales son aprobados por el Comité de ética de la Universidad Rey Saud. Todo el trabajo experimental es realizado por personal adecuadamente capacitado.
1. célula hoja construcción
- Cubrir los platos (platos de cultura sensible a la temperatura de 3.5 cm) de la cultura con puro suero bovino fetal (FBS) y asegúrese de cubrir toda la superficie del plato.
Nota: Este paso es importante para la separación de la capa celular puesto que apoya el crecimiento....
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Resultados
Colonización de hojas de células trasplantadas en ratas:
Un mes después del trasplante, todas las hojas de células trasplantadas en hígados de ratas han desarrollado tumores (figura 3). El tamaño promedio de los tumores desarrollados desde hojas de células HepG2/UCMSC, HepG2/BMMSC y HepG2 fueron 4,5 cm, 4 cm y 2,5 cm, respectivamente10.
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Discusión
Una gran cantidad de investigación se dedica a desarrollar un adecuado en vivo preclínicos modelo animal que se asemeja a los cánceres humanos. Actualmente, los principales enfoques utilizados para crear modelos animales de cáncer involucran la ingeniería genética y celular trasplante11. Modelos animales modificados genéticamente son buenas herramientas para la identificación y validación de genes diana, así como la comprensión de los mecanismos moleculares subyacentes la toxicidad droga-.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean dar las gracias al personal de la Cirugía Experimental y laboratorio Animal de la Facultad de medicina de la Universidad Rey Saud, por su cooperación y apoyo, especialmente Hussain Almukhayzim y Hisham Aloudah. Los autores también desean reconocer el equipo de medios de comunicación de Rey Saud bin Abdul-Aziz University para preparar el visual material especialmente Muath bin Ghannam y Abdulwahab Alsulami.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| FBS | Gibco/Invitrogen | 10270106 | |
| DMEM alto contenido de glucosa | Sigma | D5671-500ML | |
| Penicilina/estreptomicina | Life Technology | 15070063 | |
| solución salina fisiológica estéril | Sigma | S0817-1GA | |
| Línea celular HepG2 humana | ATCC, EE. UU | HB-8065 | |
| Médula ósea humana MSCs línea celular PromoCell | , EE. UU | C-12974 | |
| tejido de cordón umbilical humano MSCs | PromoCell, EE. UU. | C-12971 | |
| Ketamina 50% | Rompun, Bayer | ||
| Xilacina 2% | Rompun | 23076-35-9 | |
| Alphadine® solución. | Riyadh Pharma | LBL0816 | |
| Desechables: < / fuerte> | |||
| 15mL Tubo de centrífuga de polipropileno de alta claridad PP | Halcón | ||
| placas de cultivo estériles UpCell de 3,5 cm con el papel de filtro (membrana) | Sigma | 174904-1CS | |
| 100-1000 µ l Puntas de pipeta | Sigma | CLS4868-1000EA | |
| Procedimiento básico Cortina | Thermofisher | PMD5293.0 | |
| Equipment Pipeta | |||
| Plus, volumen variable | Eppendorf® Investigación® | Z683779-1EA | |
| Incubadora de cultivo de tejidos 37 ° C, 5% CO2 | Cualquier marca | ||
| Cabina de seguridad biológica | Cualquier marca | ||
| Incubadora de cultivo de tejidos 20 ° C, 5% CO2 | Cualquier marca | ||
| Herramientas quirúrgicas estériles y ratas desnudas: | |||
| Pinzas | |||
| Tijeras | |||
| bisturí | |||
| Sutura de nylon 5-0 | Accutome | AB-3854S | Monofilamento, Lanceta |
| 1 ml Jeringas de Tuberculina | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Ratas desnudas | Río |
Referencias
- Marra, M., et al. Molecular targets and oxidative stress biomarkers in hepatocellular carcinoma: an overview. Journal of Translational Medicine. 9, 171(2011).
- Yamada, K. M., Cukierman, E. Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D. Cell.
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Reimpresiones y permisos
