Explorar el potencial de la hoja de células madre mesenquimales en el desarrollo de Carcinoma Hepatocelular en Vivo

Summary

Aquí, presentamos un protocolo para desarrollar un modelo de cáncer en vivo utilizando la tecnología de hoja de la célula. Tal modelo podría ser muy útil para la evaluación de la terapéutica contra el cáncer.

Abstract

Un en vivo modelo animal que simula cáncer podría tener diversas aplicaciones que ofrecen información clínica importante. Las técnicas actualmente utilizadas para el desarrollo de modelos de cáncer en vivo tienen considerables limitaciones. Por lo tanto, en este estudio, nuestro objetivo es implementar la tecnología de hoja de la célula para desarrollar un modelo de cáncer en vivo . Carcinoma hepatocelular (HCC) se desarrolló con éxito en ratas desnudas utilizando hojas de célula creadas a partir de células de línea de células HCC. Las hojas de la célula de cáncer se generan a través de la adhesión intracelular y la formación de una estructura estratificada, controlada por la matriz extracelular. Esto permite que el trasplante de la hoja HCC en el hígado y la creación de un modelo animal con tumores dentro de un mes. Además, se investiga el papel de las células madre mesenquimales (MSC) en el desarrollo de este modelo de cáncer. Además de la hoja de línea de células HCC, se crean otro hojas de dos células: una hoja de células HCC y médula MSCs (BMMSCs) y una hoja de células HCC y cordón umbilical MSCs (UCMSCs). Las hojas que tienen una combinación de células HCC y MSCs también son capaces de producir un animal con tumores. Sin embargo, la adición de MSCs reduce el tamaño del tumor formado, y este efecto adverso en el desarrollo del tumor varía dependiendo de la fuente de las MSCs usado. Esto indica que se podría utilizar una hoja de la célula de ciertos subtipos MSC en control y gestión de tumor.

Introduction

HCC es un cáncer primario del hígado que está significativamente asociado con un pronóstico pobre. Anualmente, casi medio millón se diagnostican nuevos pacientes con HCC, que representan el 85% de pacientes de cáncer de hígado en todo el mundo¹. Hepatocarcinogenesis no es una enfermedad de forma individual; por el contrario, es una colección de enfermedades que tienen diferentes características histopatológicas y la variabilidad genética y genómica, además variados resultados pronóstico¹. Por lo tanto, los principales retos en el desarrollo de una estrategia terapéutica efectiva para el CHC son el conocimiento limitado d....

Protocol

El protocolo sigue las pautas de cuidado de los animales de Comité de ética de la Universidad Rey Saud. Procedimientos quirúrgicos, anestésicos y otros medicamentos utilizados en animales son aprobados por el Comité de ética de la Universidad Rey Saud. Todo el trabajo experimental es realizado por personal adecuadamente capacitado.

1. célula hoja construcción

1. Cubrir los platos (platos de cultura sensible a la temperatura de 3.5 cm) de la cultura con puro suero bovino fetal (FBS) y asegúrese de cubrir toda la superficie del plato.
   Nota: Este paso es importante para la separación de la capa celular puesto que apoya el crecimiento....

Results

Colonización de hojas de células trasplantadas en ratas:

Un mes después del trasplante, todas las hojas de células trasplantadas en hígados de ratas han desarrollado tumores (figura 3). El tamaño promedio de los tumores desarrollados desde hojas de células HepG2/UCMSC, HepG2/BMMSC y HepG2 fueron 4,5 cm, 4 cm y 2,5 cm, respectivamente¹⁰.

Discussion

Una gran cantidad de investigación se dedica a desarrollar un adecuado en vivo preclínicos modelo animal que se asemeja a los cánceres humanos. Actualmente, los principales enfoques utilizados para crear modelos animales de cáncer involucran la ingeniería genética y celular trasplante¹¹. Modelos animales modificados genéticamente son buenas herramientas para la identificación y validación de genes diana, así como la comprensión de los mecanismos moleculares subyacentes la toxicidad droga-.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
FBS	Gibco/Invitrogen	10270106
DMEM alto contenido de glucosa	Sigma	D5671-500ML
Penicilina/estreptomicina	Life Technology	15070063
solución salina fisiológica estéril	Sigma	S0817-1GA
Línea celular HepG2 humana	ATCC, EE. UU	HB-8065
Médula ósea humana MSCs línea celular PromoCell	, EE. UU	C-12974
tejido de cordón umbilical humano MSCs	PromoCell, EE. UU.	C-12971
Ketamina 50%	Rompun, Bayer
Xilacina 2%	Rompun	23076-35-9
Alphadine®   solución.	Riyadh Pharma	LBL0816
Desechables:  < / fuerte>
15mL Tubo de centrífuga de polipropileno de alta claridad PP	Halcón
placas de cultivo estériles UpCell de 3,5 cm con el papel de filtro (membrana)	Sigma	174904-1CS
100-1000 µ l   Puntas de pipeta	Sigma	CLS4868-1000EA
Procedimiento básico Cortina	Thermofisher	PMD5293.0
Equipment  Pipeta
Plus, volumen variable	Eppendorf®   Investigación®	Z683779-1EA
Incubadora de cultivo de tejidos 37 ° C, 5% CO2	Cualquier marca
Cabina de seguridad biológica	Cualquier marca
Incubadora de cultivo de tejidos 20 ° C, 5% CO2	Cualquier marca
Herramientas quirúrgicas estériles y ratas desnudas:
Pinzas
Tijeras
bisturí
Sutura de nylon  5-0	Accutome	AB-3854S	Monofilamento, Lanceta
1 ml Jeringas de Tuberculina	Fisher Scientific	14-826-88
Ratas desnudas	Río