Este papel describe un protocolo detallado y muy eficaz para las grabaciones de solo sensillum de la basiconica sensilla en los palpos de partes bucales de insectos.
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Artículo de método
Grabaciones de Sensillum solo para langosta palpo Sensilla Basiconica
En este artículo
Resumen
Resumen
Los palpos de piezas bucales de la langosta se consideran órganos gustativos convencionales que juegan un papel importante en la selección de alimentos de una langosta, especialmente para la detección de señales químicas no volátil por sensilla chaetica (anteriormente llamado terminal sensilla o sensillo crested). Hay creciente evidencia de que estos palpos tienen también una función olfatoria. Un receptor odorante (LmigOR2) y una proteína odorante (LmigOBP1) han sido localizados en las neuronas y células de accesorio, respectivamente, en el basiconica sensilla de los palpos. Sensillum sola grabación (SSR) se utiliza para registrar las respuestas de las neuronas receptoras del olor, que es un método eficaz para la detección de ligandos activos sobre los receptores de olor específico. SSR se utiliza en estudios funcionales de receptores odorantes en sensillo palp. La estructura de la basiconica sensilla situado en la cúpula de los palpos difiere un poco de la estructura de los de las antenas. Por lo tanto, cuando se realiza un SSR provocada por olores, algunos consejos específicos pueden ser útil para la obtención de resultados óptimos. En este papel, se presenta un protocolo detallado y altamente eficaz para un SSR de insectos palpo sensilla basiconica.
Introducción
Los animales han desarrollado una serie de órganos quimiosensoriales que detecta señales químicas exógenas. En los insectos, los órganos quimiosensoriales más importantes son las antenas y los palpos. En estos órganos, varios tipos de pelos quimiosensoriales, llamados chemosensory sensilla, están inervados por neuronas quimiosensoriales (CSNs) dentro de los pelos. CSNs en sensilla chemosensory reconocen señales químicas específicas a través de la transducción de estímulos químicos a potenciales eléctricos que posteriormente se transfieren hasta el sistema nervioso central1,2,3
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Protocolo
1. preparación de instrumentos y del insecto
-
Preparación de tungsteno electrodos y estímulos soluciones
- Fijar un nuevo alambre de tungsteno (0,125 mm de diámetro, longitud de 75 mm) en un micromanipulador y afilar en una solución de nitrito (NaNO2) de sodio 10% (p/v) en una jeringa de 10 V proporcionado por una fuente de alimentación para 1 min. bajo un estereomicroscopio (aumento de X 40).
- Sumerja el alambre de tungsteno afilada repetidamente en la NaNO2 solución al 10%, aproximadamente de 4 mm a 5 V en < 1 minuto (figura 1A).
- Examinar el diámetro de la pun....
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Resultados
Se identifican dos subtipos sensilla (pb1 y pb2) en el palpo maxilar de langosta basado en dinámica de respuesta a olores químicos (10% 1-nonanol y 10% de ácido nonanoico). Las neuronas en pb1 producen significativamente más picos 1-nonanol de ácido nonanoico mientras las neuronas en pb2 son significativamente que menos activa 1-nonanol comparado con ácido nonanoico (figura 4). Hexanal y E-2-Hexenal pueden evocar un palpo langosta apertura respuesta (POR)
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Discusión
Insectos dependen de palpos para detectar olores de alimentos y los palpos se creen que juegan un papel importante en la especiación13,27. Los palpos son órganos olfativos simples y están recibiendo una atención creciente como un modelo atractivo para la exploración de la neuromolecular redes subyacentes chemosensation28.
Insectos labellar y palpo SSRs se han realizado con éxito en Drosophila melanogaster
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo es apoyado por una beca de la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (No.31472037). Cualquier mención de nombres comerciales o productos comerciales en este artículo es únicamente con el propósito de proporcionar información específica y no implica una recomendación.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Alambre de tungsteno | ADVENT | W559504 | Se utiliza para fabricar el electrodo y fijar el palpo |
| NaNO2 | Sigma-aldrich | 563218-25G | Se utiliza para afilar el alambre de tungsteno |
| Fuente de alimentación de CA | Syntech | A2-70 | Proporcionando el voltaje en el afilado del alambre de tungsteno |
| Estereoscopio | Motic | SMZ-163 | Utilizado para observar el afilado de alambre de tungsteno |
| Microscopio | Olympus | W-51 | Se utiliza para observar la sensilla en la langosta, palpos maxilares |
| Controlador inteligente de adquisición de datos | Syntech | IDAC-4 | Visualización en pantalla en tiempo real de todas las señales antes y durante la grabación |
| Controlador de estímulos | Syntech | CS-55 | Se utiliza para controlar la aplicación de estímulos |
| Electrónica micromanipulador | C.M.D.T | CFT-8301D | Se utiliza para el movimiento menor del electrodo de registro |
| Micromanipulador | Narishige | MN-151 | Se utiliza para el movimiento menor del electrodo de referencia |
| Altavoz | EDIFIER | R101T06 | Conectado con IDAC-4 y proporcionando sonido para la señal |
| Base magnética | PDOK | PD-101 | Se utiliza para sujetar el electrodo y el tubo de entrega de estímulos |
| Mesa de aislamiento de vibraciones | TianHe | HAP-100-1208 | Se utiliza para aislar la vibración del equipo |
| Corredera de vidrio | CITOGLAS | ZBP-407 | Se utiliza para hacer la base para el MPH |
| Blu-tack | Bostik | Blu-tack-45g | Fijación del tubo de tungsteno |
| Pasteur | YARE | WITEG | Colocación del papel de filtro que contiene soluciones de estímulos |
Referencias
- Carey, A. F., Carlson, J. R. Insect olfaction from model systems to disease control. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (32), 12987-12995 (2011).
- Leal, W. S.
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Reimpresiones y permisos
