Islote pancreático inclusión de secciones de la parafina

Yahui Kong; Pantea Ebrahimpour; Yu Liu; Chaoxing Yang; Laura C. Alonso

doi:10.3791/57931

Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Islote pancreático inclusión de secciones de la parafina

13.2K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/57931

⸱

29 de junio de 2018

Yahui Kong¹ , Pantea Ebrahimpour¹^,² , Yu Liu³ , Chaoxing Yang¹ , Laura C. Alonso¹

¹Diabetes Center of Excellence, UMass Medical School, ²Department of Medicine, Saint Vincent Hospital, ³Department of Pathology, Morphology Core, UMass Medical School

En este artículo

Resumen

Ex vivo islote pancreático estudios son importantes para la investigación de la diabetes. Técnicas existentes para el estudio de islotes cultivados en su arquitectura original de 3 dimensiones son lentos, ineficientes y uso poco frecuente. Este trabajo describe un método nuevo, simple y eficiente para la generación de secciones de la parafina de alta calidad de todo cultos islotes.

Resumen

Experimentos con islotes pancreáticos aislados son importantes para la investigación de la diabetes, pero islotes son costosos y de limitada abundancia. Islotes contienen una población de mezclado de la célula en una arquitectura estructurada que afecta a la función, e islotes humanos son ampliamente variables en la composición del tipo de célula. Métodos actuales utilizados para el estudio de islotes cultivados incluyen estudios moleculares realizados en islotes enteros, junten tipos de células de islote dispares juntos, o microscopía o estudios moleculares en células de los islotes dispersos, alterar la arquitectura de la isla. En vivo estudios de islote, secciones parafina-encajadas del páncreas es una técnica poderosa para evaluar los resultados de células específicas en el entorno nativo de páncreas. Estudiando la post-cultura islotes dividiendo el parafina ofrece varias ventajas: detección de múltiples resultados de mismo islotes (potencialmente incluso el mismo exacto islotes, mediante secciones seriadas), las medidas específicas del tipo celular y nativos manteniendo islote célula-célula y célula-sustrato interacciones durante la exposición experimental y de análisis. Sin embargo, técnicas existentes para incrustar aislaron islotes de cultura post son ineficientes, lentos, propensos a la pérdida de material y generalmente producen secciones con números islote inadecuada para ser útil para la cuantificación de los resultados. Patología clínica celular bloque preparación laboratorios son inaccesibles y poco práctico para los laboratorios de investigación básica. Hemos desarrollado un método de banco mejorado y simplificado que genera secciones con sólido rendimiento y distribución de los islotes. Islotes fijos son suspendidas en gel de agarosa histológica caliente y pipeta en un disco plano en un portaobjetos de vidrio estándar, tal que las islas se distribuyen en un plano. Después de deshidratación estándar e incrustación, (10 +) 4-5 μm las secciones múltiples se pueden cortar de la misma cuadra del islote. Usando este método, pueden realizarse análisis histológicos e inmunofluorescencia en ratón, rata e islotes humanos. Este es un enfoque eficaz, barato, ahorro de tiempo para evaluar los resultados específicos de tipo celular, intacta arquitectura de islotes cultivados.

Introducción

Páncreas islotes de Langerhans, la única fuente de circulación de insulina, son un tejido crítico para los investigadores de diabetes mellitus. De cualquier organismo dado, islotes tienen tamaño variable, la frecuencia de célula tipo y arquitectura¹^,²^,³. La estrategia convencional para estudiar en vivo la estructura y composición de células endocrinas de los islotes pancreáticos es dividiendo el páncreas tejido⁴^,⁵. Desde islotes constituyen sólo una pequeña fracción del contenido celular pancreática total, se....